血型鉴定.doc

ABO血型试验(正反定型)

一 原理
利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。

二 试剂和材料
1． 抗-A（B型血），抗-B（A型血）及抗-A+B（O型血）分型血清。
2． 5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。
3． 受检者血清。
4． 受检者5%红细胞盐水悬液。

三 操作（玻片法）
1． 取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格内，再加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。

2． 另取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

3． 将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集反应。也可用低倍镜观察结果。

四 结果判定：见表1
表1 ABO血型正反定型结果

分型血清+受检者红细胞
受检者
受检者血清+试剂红细胞
抗-A 抗-B 抗A+B
血型
A细胞 B细胞 O细胞
+
—
+
A
—
+
—
—
+
+
B
+
—
—
—
—
—
O
+
+
—
+
+
+
AB
—
—
—
注：+ =凝集；- =不凝集

五 注意事项
1． 试管、滴管和玻片必需清洁干燥，防止溶血。

2． 操作中应先加血清后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

3． 为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温内进行试验。

4． 标准抗血清必须符合标准，不要长期放在室温，以免污染和孳长细菌，等渗生理盐水必须等渗、新鲜、无微生物孳生。

5． 观察结果要仔细，微弱凝集、或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。注意特异性凝集与继发性血液凝固、串钱状形成和异物的区别。

六 血型鉴定中常见的假阳性反应
1． 红细胞串钱形成：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，称为串钱形成，又称假凝集。可见于血浆蛋白紊乱、血沉加快的各种病例或实验中温度过高，作用时间过长，致水分蒸发，血清浓缩。可在观察结果前，再加等渗盐水1滴，彻底混匀，串钱状红细胞因血液稀释而散开。也可用高倍镜仔细观察凝集块的形态和用洗涤后和红细胞配制悬液。

2． 寒冷凝集：在较低温度出现的凝集称为寒冷凝集。多数正常人的血清在0~2ºC
时能凝集本人的红细胞，又称自家凝集。这种凝集是可逆的，在0-2ºC时作用最强，20ºC时可消失。但在支原体肺炎、自免溶贫、肝硬化、系统性红斑狼疮等患者血清中，可以出现高效价的病理性自身冷凝集抗体，能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。其最适反应温度是低温，一般在25-30ºC凝集作用即减弱。克服方法：被检红细胞在配制悬液前，先用37ºC等渗生理盐水洗涤，必要时试验操作可在37ºC条件下进行，或在37ºC水浴中反复观察几次，报告时要注明有寒冷凝集现象。

七 血型鉴定中常见的假阴性反应
1. 标准血清效价太低亲和力不强: 抗血清保存方法不当或贮藏时间过长而致效价减弱是最常见原因。

2. 被检红细胞敏感度过低: 如新生儿红细胞抗原形成不足,老年人红细胞敏感性下降,或红细胞标本贮藏时间过久(红细胞敏感性在血块中下降相对较快),易将A亚型错定为O型。

3. 红细胞悬液过浓或过淡: 抗原抗体比例适当时反应最明显。如红细胞悬液液过浓时,标准血清中的抗体全部被吸收,呈后带现象,以致凝集不明显或不凝集。红细胞浓度太淡,抗体浓度相对增高,呈前带现象而不易凝集,或凝集很弱,未被发现。 克服方法: 按规定配制红细胞悬液,悬液太浓时可多加1滴血清,转动玻片,增加红细胞接触的机会.微弱凝集必须用显微镜观察。

4. 溶血反应: 红细胞抗原与相对应的免疫抗体相遇,在补体存在时就可发生溶血。溶血反应与凝集反应在血型鉴定上意义相同,都是抗原抗体反应。 克服方法: 玻片法看结果时,片底最好衬以白纸,溶血时液滴边缘呈透明红色,试验前后两次镜下观察,可发现红细胞减少或消失。作血型发现溶血,要换好的等渗盐水和洗涤后红细胞重新配制悬液来作血型鉴定。

5. 溶解性抗原或血型物质的中和作用: 未经洗涤的红细胞悬液中，带有血浆中的血型物质。特别是轻度溶血，部分红细胞溶解，释放出大量可溶性抗原，可将血清中对应的抗体中和，以致抗体不足，使红细胞不能凝集。克制方法：不使用溶血标本，用洗涤后的红细胞配制悬液。

6. 试验时间过短：血型抗原抗体反应需要一定时间，时间不够，较弱的凝集就不能出现。因此，玻片法不能少于15分钟。

7. 反应温度不当：完全抗体作用的最适温度多在20ºC左右至4ºC，因此ABO血型鉴定应在室温进行。

8. 轻度凝集误认为不凝集。

9. 不完全抗体遮断引起的假阴性：新生儿溶血病时，病儿红细胞的血型抗原被母体内的不完全抗体致敏，从而遮断其与相同特异的完全抗体的反应，以致定型时出现假阴性。

RH血型试验
一 原理
利用红细胞凝集试验，采用单克隆IgM/IgG抗D抗体，使用玻片法或试管法检测红细胞表面的RH（D）抗原。

二 试剂
1． RH抗血清（抗D血清）
2． 3~5%红细胞悬液

三 操作
1． 玻片法：在清洁玻片上滴加一滴抗D血清，加待检全血一滴，轻轻转动玻片，使抗血清与红细胞充分混匀，连续5分钟，用肉眼观察有无凝集反应。凝集者为RHD）阳性；不凝集为RH（D）阴性。

2． 试管法：取清洁干燥试管一支，加抗D血清一滴，再加入3~5%红细胞悬液一滴，轻轻混匀后静置1分钟，置离心机中，以3000转/分离心1分钟。用肉眼观察有无凝集反应。凝集者为RH（D）阳性；不凝集为RH（D）阴性。

四 注意事项
1． 待检标本应为非抗凝血，红细胞浓度以3~5%RBC等渗盐水悬液为宜。

2． 试验最适温度为20~37ºC，温度过低时应适当延长反应时间。

3． 试剂应贮存在4ºC冰箱中，避光保存。

五 临床意义
我国人口绝大多数为RH阳性血型，RH阴性血型较少见，我室对RH初筛阴性者送上级医院（江门中心血站）复查。