鸡冠花黄酮化合物对DM小鼠脾脏及巨噬细胞吞噬功能的影.doc

编号：04435
鸡冠花黄酮化合物对DM小鼠脾脏及巨噬细胞吞噬功能的影响*

郭晓玲¹ 李万里² 尉辉杰¹ 张霞¹ 李喜龙 ¹
¹新乡医学院基础医学院2002级临床医学专业（新乡医学院，453003） ²新乡医学院微生物与免疫教研室（新乡，453003）
摘要 目的 探讨鸡冠花黄酮类化合物对糖尿病动物模型(DM)小鼠脾脏及巨噬细胞吞噬功能的影响. 方法 选取小鼠27只，随机分为3组：(1) 正常对照（Control）组；(2)糖尿病模型(DM)组；(3)糖尿病＋鸡冠花黄酮化合物预防(CCF)组。DM组与CCF组腹腔单剂量注射链脲佐菌素（STZ）65mg/kg,制成糖尿病模型小鼠，对照组仅注射等量枸橼酸缓冲液。CCF组用鸡冠花黄酮类化合物（100mg·kg -1 ·d-1）灌胃，Control组和DM组仅给予等量自来水灌胃。实验10周，分离小鼠脾脏并测脾重，计算脾重指数。做单核巨噬细胞外吞噬实验，测吞噬百分数，吞噬指数。 结果： CCF组与DM组相比，体重升高，而脾重指数显著降低(P<0.05),单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数有所降低(P<0.05)，而且各项指标与Control组接近（无显著性差异）。结论：补充鸡冠花黄酮类化合物可调节糖尿病动物巨噬细胞吞噬的作用，可能有利于减少巨噬细胞激活所引起的免疫病理损伤，可用于糖尿病的预防。
关键词 鸡冠花黄酮 吞噬指数 糖尿病

*新乡医学院大学生科研重点立项课题（2004）

作者：郭晓玲（1983— ）女，河南安阳人，系新乡医学院基础医学院临床医学专业02级学生；李万里（1956— ）男，医学硕士，教授，主要从事糖尿病的发病机理与临床研究

Effects of Celosia Cristata Flavonoid on the Spleen and the Function of Macrophage Ph agocytosing in DM Mice
Guo Xiaoling¹ Li Wanli² Wei Huijie¹ Zhang Xia¹ Li Xilong ¹

¹Department of 2002, the school of Basic Medical science,XinXiang Medicalcollege ²Department of Microbiology and Immuniology，XinXiang Medical College ( XinXiang ,453003)

ABSTRACT Objective To study effect of the abstraction of the celosia cristata flavonoid on the spleen and the function of macrophage phagocytosing in DM mice. Methods Choose 36 mice and divide into 3 groups at random: (1)the normal group（control）; (2) the diabete model group (DM );(3) diabete + the celosia cristata flavonid group（CCF).Inject the streptozotocin(STZ) 65mg/kg with metred dose in celiac cavity in DM group and only the same quantity of caitrate buffer in control group. The CCF group are given celosia cristata flavonoid of 100mg·kg -1 ·d-1 ,the DM froup and the Control group are only given the same quantity of water.Three groups are feeded with normal food and water. After 10 weeks , measure the spleen weight and the index of the spleen weight。 The experiment of macrophage phogocytosing measures the rate and the index. Results Compared with the DM group, the weight increases and the index of spleen weight decreases apparently(P<0.05), the rate and the index of macrophage phagocytosing RBC decreases(P<0.05); and all these items were close to the control group. Conclusion The celosia cristata flavonoid can adjust the function of macrophage of the diabete animals, may be good for reducing the immunity pathology damage caused by the active macrophage and prevent from diabete.

Key words Celosia Cristata Flavonoid The index of spleen Diabete.

鸡冠花是苋科青葙属天然植物, 富含蛋白质、不饱和脂肪酸、β-胡萝卜素、VB1、VB2 、VC及多种矿物质和黄酮类化合物, 并具有止血、降血脂等药理功能和抗疲劳等保健功能[1]。本研究探讨鸡冠花黄酮类化合物对糖尿病（DM）小鼠脾脏及巨噬细胞吞噬功能的影响。
1 材料与方法
1．1 材料 本学院实验动物中心提供的健康昆明小鼠27只，雌性，体重19±1g，1月龄。 本学院实验动物中心提供正常动物饲料。 本室于10月中下旬采收普通鸡冠花的花序,除去种子和茎梗,烘干后粉碎备用。取粉碎研细后的花序用乙醚回流抽提7h,除脂。脱脂后的样品再用95%乙醇于65℃水浴上提取6h,得乙醇提取液,蒸发干燥得粉剂[2]，溶解后再过滤除菌。美国Sigma公司出产的链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ, C3H15N307），其它试剂为国产分析纯。尿糖测定仪 SUPER GLUCOCARDⅡ（日本第一科学株式会社）
1.2 动物分组及模型制备 昆明小鼠随机分为3组, 每组枸橼酸缓冲液9只：(1) 正常对照组（control）；(2)糖尿病(DM)组；(3)糖尿病＋鸡冠花黄酮提取物预防(CCF)组。DM组和CCF组腹腔单剂量注射链脲佐菌素（STZ）65mg·kg -1， control组小鼠注射等量的枸橼酸缓冲液。在48-72h后DM组和CCF组小鼠全血血糖浓度均≥16.7mmol/L（尾静脉采血测血糖浓度），制成糖尿病模型小鼠[3]。
1．3方法
1．3．1 小鼠体重、脾重、脾重指数 CCF组用鸡冠花黄酮类化合物（100mg·kg -1 ·d-1）灌胃，control组和DM组仅给予等量自来水灌胃。各组给予正常饲料(由本院动物试验中心提供),自由饮水。实验第10周[3，5]，测小鼠体重，分离小鼠测脾重，并计算脾重指数。
1.3．2 单核巨噬细胞体外吞噬实验 实验10w,各组动物腹腔注射8%淀粉肉汤液体1ml致敏, 4d后，腹腔注射10ml Hanks液,10 min后抽取腹腔液 5ml,离心沉淀，取上清液用硫代巴比妥酸比色法检测MDA含量，取试管下部的腹腔细胞做单核巨噬细胞体外吞噬实验, 将腹腔细胞滴加在洁净的载玻片上， 用等量的1%鸡红细胞悬液滴加其上摇匀。置于玻璃平皿内盖好，并用胶带密封, 于37℃水浴30min, 其间轻摇玻璃皿2次取出载玻片，生理盐水漂洗、固定、染色，观察60个巨噬细胞（N），计数已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数（n）和所吞噬的鸡红细胞总数(m)。按下式计算吞噬百分率（a）： a = n/N × 100%， 及吞噬指数（k）: k=m/n。
1.4 统计学方法：用SPSS11.0软件进行统计学分析，组间进行t检验。

2 结果
2.1 小鼠体重、脾重、脾重指数 DM组体重低于Control组（P<0.05），但脾重指数显著高于Control组（P<0.01），CCF组与DM组相比体重增加（P<0.01），脾重指数显著降低(P<0.05)，CCF组与Control组比较各项指标无显著差异，单纯比较脾重各组间无显著差异，见表1。

表1 动物体重、脾重、脾重指数 ()
Tab1 the body weight, spleen weight and index of spleen of the mice
Group　
体重（g）
脾重(mg)
脾重指数(mg/g)
Control组
35.44±2.07 a
202.67±21.25
6.742±0.735 b
DM组
32.67±1.87
213.56±25.90
7.825±1.077
CCF组
35.78±1.56 b
195.78±31.06
6.439±1.239 a
与DM比：a P<0.05 ; b P<0.01

2.2 单核巨噬细胞体外吞噬鸡红细胞的能力 DM组与control组比，小鼠单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率显著增高（P<0.01），吞噬指数也显著增加（P<0.05）， CCF组与DM组比单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数有所降低（P<0.01），而与正常对照组接近（P>0.05）,（表2）。
表2 单核巨噬细胞体外吞噬红细胞百分数与吞噬指数
Tab 2 Phagocytotic function of Mononuclear macrophage of DM mice in vitro ()
Group　
吞噬率(%)
吞噬指数
Control组
31.667+7.993b
1.588+0.420a
DM组
39.074+3.829
2.129+0.354
CCF组
30.741+5.780b
1.729+0.364b
与 DM组比: a P<0.05 ; b P<0.01,

3 讨论

糖尿病是一种常见的内分泌功能障碍性疾病。常可产生许多并发症 ,在其并发症的形成中 ,巨噬细胞参与其多个环节。已有实验证实：在高糖环境下 ,巨噬细胞对CSF-1刺激增生反应能力增强 ,巨噬细胞与糖基化白蛋白一起培养可导致某些细胞因子的释放如TNF、IL-1 ,这些因子可导致细胞生理功能紊乱而产生许多并发症 ,特别是参与肾脏并发症的发生。动物在糖尿病状态下 ,巨噬细胞释放血管生长因子并刺激内皮细胞增生之能力增强 ,由此而导致糖尿病的微血管病变 (包括肾脏及视网膜病变 )。糖尿病时巨噬细胞处于激活状态。巨噬细胞被激活后 ,其吞噬作用增强。在糖尿病大鼠,巨噬细胞通过产生NO抑制脾脏淋巴细胞对有丝分裂原的增殖反应 ,此可能与糖尿病人易发生感染有关[2]。陈国荣等人研究表明糖尿病大鼠腹腔及肺泡巨噬细胞对中性红的吞噬能力均大于对照组 ,进一步说明在糖尿病发病过程中巨噬细胞处于激活状态。此激活的巨噬细胞通过多种途径参与糖尿病并发症的形成[5]。
有研究表明一些植物黄酮类可促进糖尿病动物糖原恢复正常水平，增加细胞、组织和靶器官对糖的摄取，纠正糖代谢紊乱。桑叶富含黄酮类，将200 mg/kg桑叶提取物腹腔注射于STZ小鼠，可促进外周细胞利用葡萄糖。杨梅素可促进脂肪细胞对糖的摄取。由于炎症细胞浸润可导致胰腺β细胞损坏，给胰岛素依赖糖尿病大鼠模型用番叶木苷500mg，结果显示其抗炎、抗自由基及改善血管通透性的作用，与未给药组有明显差别。金雀异黄素、大豆苷元、大豆黄酮苷也显示出一定的抗炎作用。 目前，对黄酮类化合物抗糖尿病及其并发症药理作用研究大多在实验阶段，临床试验仅是少部分。黄酮类化合物药源开发，提取新的有效成分及药理药效，使临床应用范围扩张，国内外都十分重视。天然植物或药物中的黄酮类化合物毒性小，不仅可降低血糖，且可抑制并发症的发展。近年来植物黄酮类抗糖尿病及其并发症的研究状况表明, 植物黄酮类具有一定的抗氧化、抑制 α-糖苷酶、拟胰岛素作用、抗炎、抑制醛糖还原酶、抑制蛋白糖基化等作用[5]。
本研究中DM组体重低于正常对照组，但脾重、脾重指数增加，并且巨噬细胞的吞噬功能处于激活状态，显著高于正常对照组，与DM组相比CCF组脾重、脾重指数显著降低，单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数有所降低，与正常对照组接近。提示鸡冠花黄酮类化合物具有调节糖尿病动物巨噬细胞的吞噬作用，可能有利于减少巨噬细胞激活所引起的免疫病理损伤。其作用机理与鸡冠花中所含的抗氧化、调节机体免疫功能的类黄酮生物活性因子有关[1]有进一步研究的必要。
[1]. 翁德宝 ,汪海峰 ,翁佳颖 .普通鸡冠花序中黄酮类化合物的研究 [J].植物学通报 , 2000, 17(6):565-568.
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[3] 翁孝钢. 梁荩忠. 吴兆锋. 链脲佐菌素对实验性糖尿病大鼠组织钙调素活性的研究. 新乡医学院学报 1995年12(3):201-204
[4]. 陈国荣,金丽琴,邵黎明, 实验性糖尿病大鼠巨噬细胞内酶活性及吞噬功能的研究. 免疫学杂志.2000，16（5）：352-354
[5]. 俞灵莺, 李向荣. 植物黄酮类抗糖尿病及其并发症的研究进展[J]. 国外医学卫生学分册.2000，27（6）331-335.
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