流式细胞术检测.pdf

作者单位:310003杭州 浙江大学医学院附属儿童医院儿内科感染性疾病流式细胞术检测PP65抗原血症在诊断巨细胞病毒感染上的应用魏健 汤永民 郑季彦 张晨美 王燕儿 沈红强 钱柏芹【摘要】目的 探讨流式细胞技术检测PP65抗原血症对巨细胞病毒(CMV)感染的诊断价值。方法 对136例CMV感染患儿流式细胞技术检测血PP65抗原、实时荧光定量PCR(RFQ2PCR)检测尿CMV DNA及血清ELISA法检测CMV IgM,比较3种方法的检测结果,并以35例非CMV感染的患儿作为PP65检测的阴性对照。对18例PP65抗原阳性患儿进行短期随访。结果 136例CMV感染患儿从血单个核细胞(MNC)中检出PP65抗原118例(118/136,阳性率8618%)。其中53例患儿分别作MNC和多形核白细胞(PMNL)检测,从MNC中检出PP65抗原45例(45/53,阳性率8419%),PMNL中检出PP65抗原43例(43/53,阳性率8111%),MNC与PMNL阳性率差异无统计学意义(2m=0125,P0105)。PP65与尿CMV DNA2种方法所检测的结果间差异无统计学意义(2m=1178,P 0105);但PP65与血CMV IgM检测结果间差异有统计学意义(2m=52192,P 0101)。PP65抗原水平与CMV感染的病情程度有明显相关性,全身性感染通常伴高水平抗原血症,单脏器感染抗原水平相对较低或阴性(2=38151,P 0105)1The 95thpercentiles(P95)of PP65 in MNC andPMNL were 0139%and 0145%,respectively,so a cutoff value of0150%was set1Of the 136 patients withCMV infection,118 samples from 118 patients were positive for PP65 antigenemia with a positive rate of 8618%,which was not statistically different from that(9014%,2=0191,P 0105)of CMV2DNA detected by RFQ2PCR assay but it was significantly higher than that(4516%,2=51150,P 01005)of the detection by IgMmeasurement1PP65 detection was correlated with urine CMV DNA amplification(2=63178,P 0105)1PP65detection was not correlated with serum IgM measurement while the detection rates between the two weresignificantly different(2m=52192,P 0105)1Higher PP65antigenemia level was correlated with systemic CMV infection,while lower level of PP65 was either in the patients31中华儿科杂志2005年1月第43卷第1期 Chin J Pediatr,January 2005,Vol 43,No11with isolated organ involvement by CMV(2=38151,P 95%单侧上限)确定阳性临界值。采用一般2检验比较PP65与CMV DNA、CMVIgM之间的关联性,P 0105为有关联性;用McNemer2(2m)比较不同检验方法结果的差异性,P 0105),同型阴性对照PMNL阳性细胞百分数高于MNC(t=21153,P 0105),见表1。提示PMNL阴性对照的非特异性阳性背景较高。MNC PP65的95%百分位数(P95)为0139%,PMNL的P95为0145%,均小于015%,采用015%作为阴阳性值的界限。当检测结果 015%作为阳性。按此标准,对照组35例均为阴性。表1 单个核细胞与多形核白细胞PP65阳性细胞百分数范围及阳性率项目PP65阳性细胞百分数(%)阴性对照组(n=35)同型对照组(n=35)PP65阳性(n=53)例数阳性率(%)阳性细胞范围(%)单个核细胞01210109(01000141)01200109(01000142)458419018726141多形核白细胞01240110(01120148)01720124(01211176)438111017429142t值014252115332m=0125 注:3P 0105)。两组细胞PP65检测阳性结果见图1、2,PMNL的同型对照阳性背景(2139%)较高,而MNC的阳性背景较低(0161%),检测结果显示PP65的阳 性 细 胞 百 分 数 在MNC(10132%)与PMNL(10139%)之间差异不大。三、PP65抗原与其他实验室方法的比较(表2)本组尿CMV DNA阳性123例,阳性滴度范围11241021152107拷贝/ml,阳性率9014%;血IgM阳性62例,阳性率4516%。PP65与尿CMVDNA两种方法所检测的结果具有明显相关性(2=63178,P 0105);但PP65与血CMV IgM检测结果之间无明显相关性(2=0138,P 0105),该两种方法所得结果间差异有统计学意义(2m=52192,P 10%为高水平抗原血症,有47例。PP65高水平抗原血症者全身感染40例,其中5例死亡;PP65低水平抗原血症者全身感染30例;PP65阴性的18例患儿,全身感染仅1例,经相关趋势检验3组之间差异有统计学意义(2=38151,P 01005),见表3。表明PP65抗原水平与CMV感染的病情程度有明显相关性,全身性感染通常伴高水平抗原血症,单脏器感染抗原水平相对较低。表3136例CMV患儿PP65阳性水平与感染情况的关系PP65水平总例数感染例数单脏器全身性感染率(%)单脏器全身性高4774014198511低71413057174213阴性181719414516合计136657147185212 注:2=38151,P 10%的病例,绝大多数为全身多脏器感染,死亡率高。PP65阴性的18例患儿中,17例为单脏器感染,病情较轻,治疗后很快好转。治疗后复查PP65,13例随着临床情况的好转,抗原血症转阴或明显下降;2例临床情况恶化时,抗原阳性细胞数明显增加。由此可见,高水平的抗原血症患者受感染较重,提示高病毒负荷。van等9的研究显示,PP65抗原血症的检61中华儿科杂志2005年1月第43卷第1期 Chin J Pediatr,January 2005,Vol 43,No11测可作为CMV活动性的指标,其活动程度与阳染细胞数呈正相关,与本文结果一致。有人将PP65抗原阳染细胞数高低分组分析,高水平抗原血症临床出现明显症状,低水平抗原血症无临床表现,无须处理,中水平抗原血症有一部分出现症状,对没有症状的人随访观察,不久以后也有部分出现感染症状,须密切观察。故认为对中高度抗原血症在无临床表现时,也应给予预防性抗病毒治疗10。有研究证明,抗原血症阳性可早于临床症状出现,检测PP65有助于早期诊断和预防CMV感染,甚至在出现感染症状前9 d,PP65抗原血症即已呈阳性结果11。流式细胞技术检测CMV PP65抗原血症对CMV感染是一种新的敏感、特异、快速的诊断方法,不仅能早期诊断,其量化结果有助于评价感染状态与判断预后,也是观察治疗效果的有效检测手段。参考文献1中华医学会儿科学分会感染消化学组 1 巨细胞病毒感染诊断方案 1 中华儿科杂志,1999,37:44112 SinzgerC,JahnG1Humancytomegaloviruscelltropismandpathogenesis1Intervirology,1996,39:302231913The TH,van den Berg AP,Harmsen MC,et al1The cytomegalovirusantigenemia assay:a plea for standardization1Scand J Infect Dis Suppl,1995,99:2522914 SoDerberg2Naucler C,Streblow DN,FISH Ket al1Reactivation oflatent human cytomegalovirus in CD14(+)monocytes is differentiationdependent1J Virol,2001,75:75432755415 von Laer D,Serr A,Meyer2K onig U,et al1Human cytomegalovirusimmediate early and late transcripts are expressed in all major leukocytepopulations in vivo1J Infect Dis,1995,172:365237016 Michael BH,Patricia MW,Ralelgh AB,et al1Factors influencingdetection of quantitative cytomegalovirus antigenemia1J Clin Microbiol,1994,32:83217Essa S,Pacsa AS,Al2Attiyah R,et al1The use of flow cytometry forthe detection of CMV2specific antigen(PP65)in leukocyte of kidneyrecipients1Clin Transplant,2000,14:147215118 Bendiksen S,Van G M,Rekvig OP,et al1A longitudinal study ofhuman cytomegalovirus serology and viruria fails to detect active viralinfection in 20 systemic lupus erythematosus patients1Lupus,2000,9:120212519 van der BW,van Dijk RB,van Son W J,et al1Antigen test for earlydiagnosis ofactivecytomegalovirusinfectioninhearttransplantrecipients1J Heart Transplant,1988,7:1062109110 Mori T,Okamoto S,Matsuoka S,et al1Risk2adapted pre2emptivetherapyfor cytomegalovirus disease in patients undergoing allogeneic bonemarrow transplantation1Bone Marrow Transplant,2000,25:7652769111Eckart P,BrouardA,VabretF,etal1Detection ofhumancytomegalovirus in renal transplantation:comparison of four diagnosticmethods:DNA in sera by polymerase chain reaction(PCR),DNA inleukocytebyPCR,PP65leukocyticantigenemia,andviremia1Transplant Proc,1997,29:2387223891(收稿日期:2004204215)(本文编辑:付晓霞)会议征文消息第二届中国国际先天性心脏病介入治疗暨手术演示学术会议征文通知 中华儿科杂志 编辑委员会、中华心血管病杂志 编辑委员会和 中华医学杂志英文版 编辑委员会,联合举办的“第二届中国国际先天性心脏病介入治疗暨手术演示学术会议”,将于2005年4月9-11日在北京举行。大会将邀请10余位美国,加拿大,英国,德国,日本等世界著名和国内知名的先天性心脏病治疗专家参会并讲座,介绍先心病介入治疗及相关学科的最新进展,搭建无需出国的国际学术交流平台。征文内容如下:(1)先天性心脏病:先天性心脏病的介入治疗;先天性心脏病的内外科镶嵌治疗;先天性心脏病介入与手术治疗的比较;超声心动图在先心病诊断和治疗中的应用;(2)冠状动脉疾病:支架在非冠状动脉疾病的应用;左心耳封堵的临床应用;血管内滤器的临床应用;瓣膜疾病:肺动脉瓣、主动脉瓣狭窄的外科治疗和介入治疗;(3)“先心病经导管介入治疗指南”临床应用的评价(中华儿科杂志,2004年,第3期,第234239页的文章);(4)先天性心脏病介入治疗的病例报告。征文要求:(1)未公开发表的有学术价值的文章;(2)30004000字的全文,书写格式参照本刊论著类文章;摘要1份,8001000字,包括:目的、方法、结果及结论四部分;(3)全文及摘要应分别写清文章的题目,作者单位和邮政编码及作者姓名,以便联系;(4)请寄电脑打印稿和软盘(Word格式存盘和打印);(5)稿件的信封上务必注明“第二届国际介入征文”字样,以免与本刊稿件相混。截稿日期:2005年2月10日(以邮戳为准);稿件请寄:北京东四西大街42号 中华儿科杂志 编辑部 覃明博 收,邮政编码:100710;电话:[phone]转1406/1409;传真(电话):010265273371;E2mail:CJP cma1org1cn(主题:第二届国际介入征文)71中华儿科杂志2005年1月第43卷第1期 Chin J Pediatr,January 2005,Vol 43,No11