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利水通络口服液对急性脑缺血大鼠脑组织病理形态的影响The Effects of LishuiTongluo Capsule on the Pathomorphologic Changes inCerebral Tissues of Rats with Acute Cerebral Ischemia周晓卿Zhou Xiaoqing郑州市中医院,河南 郑州 450007Zhengzhou Hospital of TCM,Zhengzhou,Henan,China,450007摘要:目的:研究利水通络口服液对急性脑缺血大鼠脑组织病理形态的影响及其作用机理。方法:以急性不完全性脑缺血大鼠为模型,将50只普通级Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、利水通络口服液高剂量组、利水通络口服液低剂量组,分别灌胃取材后,测定大鼠脑组织病理形态学变化。结果:病理组织学观察结果表明,急性脑缺血模型组出现了较严重的脑组织水肿和神经细胞病变,利水通络口服液高、低剂量组在改善神经细胞病变方面效果显著(P 0.05)。结论:急性脑缺血大鼠脑组织病理形态改变明显,说明其为脑梗塞急性期的病理生理基础之一;利水通络口服液对急性脑缺血大鼠脑组织病理形态有较强的改善作用,其作用机制可能与降低脑含水量有关。Abstract:Objective:To investigate the effect of Lishui Tongluo Capsule(LSTLC)on the damage of rats with acute cerebral ischemicand its effective mechanism.Methods:The rats with acute whole2cerebral ischemia were used as model.50 common male Wistarratswere randomly divided into sham2operation group,model group,and high2dosed,low2dosed groupsof LSTLC.After perfusing stom2ach and obtaining tissues,we observe the pathomorphologic changes with optical microscope.Results:Histopathological investigationshowed that there were serious cerebric edema and pathologic changes of nerve cells in acute cerebral ischemic model group.High2dosed and low2dosed groups of LSTLC were remarkable in improving cerebral mydrops and pathologic changes of nerve cells whichwere induced by acute cerebral ischemia.Conclusions:Obvious pathomorphologic changes with acute cerebral ischemic are pathologi2cal and physiological basis of acute ischemic apoplexy.LSTLC can greatly improve the pathomorphology of the rats cerebral tissueswith acute cerebric ischemia.Its mechanism of action may be related to reducing the contents of water in cerebric tissues.关键词:利水通络口服液;急性脑缺血;脑组织形态;大鼠Key words:LSTLC;acute cerebral ischemia;histopathologic;rat中图分类号CLC number:R285.5 文献标识码Document code:A 文章编号Article ID:1672-6839(2008)01-0030-0321世纪是脑的世纪。目前,急性脑血管病已被视为“急症中之急症,重症中之重症”,其中急性脑梗塞约占急性脑血管病病人的80%,因而成为当前研究的重点。利水通络法是基于中西医结合理论,在西医辨病、中医微观辨证的基础上针对脑梗塞急性期的病理特点提出的一种治疗方法。我们据此法制备的利水通络口服液经临床观察疗效确切,为探讨其作用机理,通过该药对实验性大鼠急性脑缺血脑组织病理形态影响的实验研究,为其治疗急性脑梗塞提供科学依据。1 材料与方法1.1 动物普通级Wistar大鼠50只,雄性,体重280350 g,由河南省实验动物中心提供(动物合格证号:医动字第410116号)。1.2 实验药品利水通络口服液:由河南中医学院第一附属医院实验3 基金项目:河南省科技厅科技攻关计划基金资助项目(编号:980945)中心提供。批号:20040204。将该药的浸膏,加入由蒸馏水分别配制成浓度为25%和12.5%的混悬药液,按2 ml/100 g灌胃,相当于成人量的20倍和10倍,分别为高剂量组和低剂量组。1.3 动物分组取Wistar大鼠50只,随机分为4组:假手术组11只,在其双侧颈总动脉下穿线,不作结扎处理;术前6 d,给生理盐水灌胃,每日1次,2 ml/100 g,与其他组动物同期喂养(均给普通饮食),同时处死;模型组12只,施行不完全性脑缺血模型手术,术前6 d,生理盐水灌胃,每日1次,2 ml/100 g,术后4 h处死;利水通络口服液高剂量组14只,做不完全性脑缺血模型手术,术前6 d给予25%利水通络口服液混悬药液灌胃,药量2 ml/100 g,每日1次,术后4 h处死;利水通络口服液低剂量组13只,做不完全性缺血手术,术前6 d给予12.5%利 水 通 络 口 服 液 混 悬 药 液 灌 胃,药 量2 ml/100 g,每日1次,术后4 h处死。各组最后一次给药均在手术前1 h进行。1.4 模型制备采用经典的双颈总动脉阻断法制造大鼠急性不完全性032008年1月第1期No.1Jan.2008河 南 中 医 学 院 学 报JOURNAL OF HENAN UNIVERSITYOF CHINESE MEDICINE第23卷 总第134期Vol.23 Serial No.134脑缺血模型,用速眠新注射液按0.06 ml/100 g的剂量腹腔麻醉大鼠,然后置大鼠仰卧固定,颈前部备皮消毒,做颈前正中纵切口,逐层分离皮肤,皮下组织,肌肉与腺体,剥离双侧颈总动脉,用4号手术线先后结扎双侧颈总动脉,缝合伤口消毒。术后4 h采集标本,断头取脑。假手术组大鼠仅在双侧颈总动脉下穿线,不进行结扎处理,余同模型组。1.5 观察指标脑组织病理形态学观察:左侧额区脑组织置于10%甲醛溶液中固定,72 h后取出并切取2 mm左右厚度,病理组织切片按常规脱水、透明、包埋、切片、HE染色进行,于光学显微镜下观察小鼠脑组织形态学变化,并摄取照片。1.6 统计学处理数据在奔腾 866计算机上,用SPSS10.0 for windows统计分析软件处理。计量资料,所有数据以均数(?x)标准差(s)表示,组间比较采用方差齐性检验及单因素方差分析LSD法;计数资料用秩和检验。2 结果利水通络口服液对急性脑缺血大鼠脑组织病理形态改变的影响。脑组织病理形态改变的病变分级标准1。2.1 脑水肿分级标准 级,部分神经细胞及小血管周围间隙扩大;级,白质神经原纤维疏松离散,伴神经细胞及小血管周围间隙扩大;级,灰质神经原纤维疏松离散,伴神经细胞及小血管周围间隙扩大;级,灰质及白质神经原纤维均离散,伴神经细胞及小血管周围间隙扩大。利水通络口服液对其影响见表1。表1 对急性脑缺血大鼠脑水肿变化的影响组别n各级脑水肿动物数(只)正常秩和假手术组119200075.0模型组1201146414.03利水通络低剂量组1104421266.5利水通络高剂量组804211182.5 注:与假手术组比较,3P 0.01;与模型组比较,P0.05。2.2 神经细胞变性、坏死的分级标准 级,神经细胞浆内尼氏小体消失;级,部分神经细胞出现固核、核溶解、神经原卫星现象、神经原被噬现象等;级,软化灶形成。利水通络口服液对其影响见表2。表2 对急性脑缺血大鼠脑组织神经细胞变性、坏死的影响组别n各级神经细胞变性、坏死动物数(只)正常秩和假手术组111010072.50模型组120147399.503利水通络低剂量组110821236.00利水通络高剂量组80431195.00注:与假手术组比较,3P 0.01;与模型组比较,P 0.05。表1、表2病理组织学观察结果表明:与假手术组比较,急性脑缺血模型组出现了严重的脑水肿和神经细胞变性、坏死(P 0.01)。与模型组比较,利水通络口服液高、低剂量组在改善脑水肿和神经细胞变性、坏死方面效果显著(P 0.05)。3 讨论急性脑梗塞尤其是大脑中动脉起始部梗塞,由于脑组织缺血严重,引起缺血水肿半暗带扩大,造成颅内压升高,引起不同程度的意识障碍。动物实验显示,脑梗塞后,其中央区形成半暗带,数秒后即启动损伤级联反应,810 min后梗死灶中心的神经元发生不可逆损害,并逐渐蔓延扩大2,其周边区域的半暗带缩小。而缺血半暗带内因仍有侧支循环存在,可获得部分血液供给,尚有大量可存活的神经元,如果血流迅速恢复,损伤仍是可逆的,脑代谢障碍可得以恢复,神经细胞仍可存活并恢复功能。保护这些神经元是急性脑梗死治疗成功的关键。3。脑水肿多于梗死后35 d达高峰,大约持续14 d。严重的脑水肿,如不及时处理,可并发脑疝,使脑干及丘脑下部受压而危及生命,直至死亡。因此,合理的管理颅内压是脑梗塞治疗的重要方面甘露醇用于治疗人类脑梗死已30余年,目前仍是神经科重症抢救有限的武器之一,占居重要的地位。其主要通过增加血容量,提高肾小管液的渗透压而利尿脱水,从而降低颅内压。但在脱水降颅压的同时却存在一些副作用,如水电解质紊乱,急性左心室功能衰竭,急性肺水肿,脑水肿反跳,以及肾功能衰竭4。中药治疗脑梗塞是我国的特色,应用相当普遍,也为许多知名学者所推荐5,鉴于此,从中西医结合角度寻求效果好、副作用小的脱水降颅压治疗药物显得非常必要。中医理论认为血与水(津)都是构成人体的基本物质之一,二者生理上存在同源相济,互根互存的密切关系,历来有津血同源、血水相关说。生理上的联系,必然导致病理相关。血之病理状态有瘀血,水之病理状态有痰饮、水浊。瘀血与痰饮、水浊都是人体疾病过程中病理变化的产物,在一定条件下又可成为新的致病因素,瘀可致水,水能滞血。血液瘀阻,津液输布困难,水道不通则引起水停,即“血不利则为水”;同时水湿停聚壅遏气机,血脉不畅,引起或加重瘀血。肺、脾、肾功能失调或三焦气化不利,或经脉运行不利均致津液不能正常敷布,津聚成痰。痰是瘀的初期阶段,瘀是痰的进一步发展。脑窍以清灵通利为贵,一旦急性脑梗塞后脑络瘀阻,血不利则为水,水津不行,凝结为痰,外渗为饮,瘀血、痰饮、水浊、壅塞络道,渐成瘀水互结颅内的病理变化6。“血不利则为水”,虽被历代医家所重视而颇多发挥,用于指导临床。但因科学条件所限,对血水相关理论多局限于用于指导水肿、臌胀等病的治疗。而对于中风病瘀水交结于脑窍这一病理变化认识不清,故临床较少应用,积累经验不多。瘀水交阻为中风病急性期关键病理环节,瘀血与水饮两者互为影响,形成恶性循环。“其水不去,势必久瘀之血亦尽化为水矣”,故及早应用活血利水可以截断病(下转第34页)132008年1月第1期No.1Jan.2008河 南 中 医 学 院 学 报JOURNAL OF HENAN UNIVERSITYOF CHINESE MEDICINE利水通络 The Effects 周晓卿 Zhou Xiaoqing第23卷 总第134期Vol.23 Serial No.134综上所述,本研究采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的心肌缺血再灌注模型,结果显示,葛根素预处理后,与缺血再灌注组比较,内源性保护因子SOD活力升高,损伤因子MDA含量降低、反映心肌损害程度的LDH和CK释放入血明显降低,心肌梗死的镜下改变较轻。提示葛根素对缺血再灌注的心肌有预防和保护作用,其机制可能是葛根素提高心肌抗氧化能力,减轻细胞内钙超负荷,从而阻止心肌坏死,但其详细机制有待进一步研究。葛根素可防治心脑等缺血性疾病,本研究为葛根素的临床应用开发提供实验依据。参考文献:1杨国君,张龙生,范礼理.葛根素抗冠心病心绞痛及对血栓素A2和前列腺素的影响J.中国中西医结合杂志,1990,10(2):82-84.2高鹏,夏成清,王佩燕,等.葛根素对全脑缺血再灌注后脑组织诱导一氧化氮合酶影响的实验观察J.中华急诊医学杂志,2001,10(2):85-86.3高治平,胡弼.现代使用医学机能实验技术与方法 M.长沙:湖南科学技术出版社,2003:56-57.4尚立芝,王建人,崔明霞,等.益母草对大鼠心肌缺血再灌注损伤影响及机制的实验研究J.河南中医学院学报,2007,22(129):21-23.5谢瑞芹,都军,郝玉明,等.葛根素注射液对冠心病患者缺血再灌注心肌保护作用及机制J.中国中西医结合杂志,2003,23(12):895-897.6Patle Y,Collco MoraesY,Lachman D,et al.Neuron protective effectsof copper/zinc-dependent superoxide dismutase against a wide varietyof death inducing stimulation and proapoptotic effect of familial amy2otrophic lateral sclerosis mutationJ.Mol Brain Res,2002,109(1):189-191.7Volk T,Schmutzler M,Engelhard L,et al.Effect steroid treatmenton reperfusion associated production of reactive oxygen species and ar2rhythmias during coronary surgeryJ.Acta Anaesthesiol Scand,2003,47(6):667-778.8卢金萍,任江华,姚述远.葛根素对心肌缺血再灌注损伤的保护作用J.中国现代应用药学杂志,2004,21(4):268-271.9Lum H,Barr DA,Shafer JR.Reoxygenation of endothelial cells in2creases permeability by oxidant mechanisms J.GCirc Res,1992,70(5):991-993.10崔海萍.葛根素注射液治疗冠心病57例血液流变学分析J.河南中医,2005,25(9):72.收稿日期:2007-08-16作者简介:王建人(1952-),女,江西兴国人,大学本科,高级实验师,从事生理学教学和实验工作。通讯作者:尚立芝(1966-),女,汉族,河南鹿邑人,医学硕士,讲师。河南省郑州市金水路1号河南中医学院基础医学院 生 理 学 科。E-mail:lzshang2001 ,Tel:[phone]。编辑:程延安(上接第31页)理上的恶性循环,中止病势,促进气血畅通。而用利水药则可以发挥淡渗利尿使水从小便而出。中风病急性期往往兼腑实便秘,因此加用通腑降浊药物使水浊从大便而下,取效更捷。利水通络之法,包括利水和通络两个方面,通络则含活血通络、化痰通络、解毒通络、开窍通络之意。利水通络口服液是针对脑梗塞急性期瘀水阻络、痰浊闭窍的病理特点,遵从利水通络大法而研制的一种药物,主要由水蛭、益母草、猪苓、川芎、大黄、冰片等组成。方中水蛭具有破血逐瘀、通经利水之功。益母草性善走散,有活血通经、祛瘀生新之力。性滑而利,有行水消肿之效。二者相须为用,加强活血利水作用,是为主药。猪苓功专渗泄,善利小便,为治小便不利、水肿、泄泻所常用。通过除湿利小便,使脑部水邪假借小便而出。川芎辛散温通,既能活血,又能行气,为“血中气药”,故善治血瘀气滞病证。大黄具有活血利水双重作用,既可以活血祛瘀,又可以攻积导滞,使水饮从大便而出,收一箭双雕之功。猪苓、川芎、大黄三药合用,共为臣药,能协助君药加强行血逐瘀,利水解毒、化痰通络之力。冰片芳香走窜,主入心经,为开窍要药,在本方中,取其化痰开窍及引领诸药上达于脑,是为佐使药。全方配伍,共奏活血逐瘀、利水通络、化痰开窍、通腑降浊之功。本实验研究结果显示,急性脑缺血后实验性大鼠有较严重的脑组织水肿和神经细胞病变,这些变化说明其为脑梗塞急性期的病理生理基础之一。利水通络口服液对急性脑缺血损伤引起的脑组织水肿和神经细胞等病变,有明显的改善作用,在降低脑组织含水量方面效果显著。其作用机理可能与以下几方面有关:减轻血管内皮的炎性反应。可以对抗内源性和外源性毒性物质的作用,从而减轻其对缺血性脑损伤的毒性,缓解缺血大脑半球的水肿。加速缺血区毒性物质的排泻,减轻神经毒素的危害。通过选择性扩张脑血管,增加缺血区血流量,改善缺血区脑组织血液循环,从而减轻脑水肿7。以上实验结果为利水通络口服液治疗急性脑梗塞提供了客观实验依据,但仍待进一步探讨。参考文献:1谢世平,封银曼.大黄虫丸对实验性脑缺血影响的研究J.河南中医,1997,17(5):282.2Pulsinelli W.Pathophysiology of acute ischaemic strokeJ.Lancet,1992,339:533-536.3王维治,罗祖明.神经病学 M.北京:人民卫生出版社,2002:131.4韩雄.脑卒中诊断与治疗学 M.郑州:郑州大学出版社,2002:151.5郭玉璞.缺血性脑损伤的病理生理基础和脑梗死的治疗原则J.基础医学与临床,1998,24:63-64.6张学文.试论活血利水法在中风病中的应用J.山西中医,1993,9(3):9.7马云枝,周晓卿.利水通络口服液对急性脑缺血大鼠IL-8、TNF-、脑组织含水量的影响J.河南中医学院学报,2004,19(4):19.(感谢马云枝老师对本文的指导)收稿日期:2007-08-16作者简介:周晓卿(1964-),男,河南孟州人,副主任医师,从事脑病的临床、科研工作。编辑:程延安432008年1月第1期No.1Jan.2008河 南 中 医 学 院 学 报JOURNAL OF HENAN UNIVERSITYOF CHINESE MEDICINE第23卷 总第134期Vol.23 Serial No.134