ACA的间接免疫荧光法显示多种动_植物细胞着丝点.pdf

年第!卷第期北京师范大学学报#自然科学版%&()+&,./0/)12&们叮+3/4.(5/67#26(+8./.)9.?:&+。!2&。;一,文昌鱼、水媳、惫姗、蛆蝴、草履虫、洋葱、大蒜、吊兰、蚕豆 和 葫芦醉等?表明在进化不同阶段 的动、植物细胞均有同源的、高度保守性的着丝点蛋白?关镇词抗着丝点抗体,间接免疫荧光法,植物细胞,着丝点分类号,!?年&(&/从一种变异的进行性系统性硬皮病#88#8综合症的病人血清中发现了特异性的着丝点抗体,以间接免疫荧光法可 以显 示细胞着丝点的荧光斑点,从此,为着丝点蛋白的深人研究开辟了新途径?近?年来研究进展十分迅速,发现亮“、鼠+,、蛙即等细胞,人及小鼠精子均可显示出着丝点抗原?()5 等俩进一步用免疫荧光法结合蛋白免疫印迹法确定了人着丝点中有?!,和?的蛋白抗原,可与;血清反应,分别称之为一;,一,#,开创了深人研究着丝点蛋 白的新领域?我们首次从硬化性肌膜龚病人血清中发现也有;的存在?本工作以系统发育不同阶段的动物,特别是植物细胞为材料,用此种;血清的间接免疫荧光法探讨它们之间是否存在同源性#过去已进行了初步报导”,“,为进一步研究着丝点蛋白的演化、结构与机能打下基础。+材料与方法?离体培并细胞的处里所用细胞 有=.+,=.,=,84?,=工,=卜 等?培养液用1+.,加人?小牛血清,?青霉素及?1链霉素,在 孵箱中,!6培养?取样前用?1秋水仙酞胺阻断,以?胰酶消化,分离细胞,?!&+8洗 次,以细胞离心机制片。黄鳝#对口。坛阳+加5 用冷冻切片机将肝切成?林厚切片,贴在盖片上?大草履虫#(“、9 耐 6。,用细胞离心机将细胞离心在盖片上?盘撕#,5&9+.石5 以!酒精消毒腹部,用剪刀剪开腹壁,取出精巢,在 8中冲洗,剪 除外膜,剪碎精巢,在?胰酶加?肠 ;中!6消化?/),在?!&+、大蒜。以“,5 红、,劝在室温中加水培养?剪取上述植物的根尖各?恤?取吊 兰#再7 6“,“户。邵叶剪碎?低等植物取葫芦醉#凡、,玩妙群介9 直.地上部分?将上述 各 种植物的取材分别用写果胶酶加纤维素酶混合液消化,中5,将细胞涂于盖片卜,微干,浸火棉胶液,空气干燥。?细胞固定将贴在盖片上的动、植物细胞用新配制的 固定液#?多聚甲醛,?2,?!&+盐酸一赖氨酸,&?!&+磷酸缓冲液,=!?,在6中固定/),再用8洗/),经?(/6&)一?8消化/),8洗5/)?(5间接免疫荧光染色将我们筛选出来的硬化性肌膜炎患者#2“,!的;8稀释 倍,取 “滴在洁净的载片上,将固定后的贴有细胞的盖片,细 胞面向下扣在血清上,放在湿盒中,!孵育/),8洗次,每次/),再用以8稀释?倍的,8#?混合液滴在载片上,盖片的细胞面 向下封片?对照组实验除以 正常血清代替;血清外,其它均相同?在荧光显微镜下,用蓝光观察,柯达 定 黑 白胶片拍照?结果培养细胞=.,=.一,=,=一,8:一均 呈现明亮的荧光斑点分散于核中?斑点成双或单个分布?在有丝分裂细胞中染色体不染色,在暗的染色体主组痕 两侧,均有?对明亮的荧光斑点#附图一?。文昌鱼、水媳细胞的着丝点荧光斑点清晰,后者斑点成对#附图一,。盘撕、蛆绷、黄鳝的细胞核中均 呈现较强的荧光斑点#附图一?草履虫小核呈现强的荧光反应,但看不清斑点,而大核为阴性反应#附图一!。植物细胞中玉米、小麦和大豆的核均呈阴性反应?而洋葱、大蒜、蚕豆的根端细胞,吊兰、葫芦葺细胞呈现强弱不同的荧光斑点#附图一?葫芦醉的细胞 中 荧光斑点数量差异很大。吊兰 的荧光斑点细小,多簇集成若干丛?大蒜的荧光斑点粗大,蚕豆的荧光斑点小而亮度低。已北京师范大学学报#自然科学版第!卷?阅匕?讨论我们发现许多属子不同类群的生物均有可为;荧光染色的着丝点抗原,如蛇蝴#环节动物、轰姗#昆虫、文昌鱼#头索动物、水媳#腔肠动物、草履虫#原生动物及黄结#脊推动物。有趣的是草履虫有大核及小核,小核进行有丝分裂,大核是营 养核,尸第期播维林等;9;的间接免疫荧光法显示多种动、植物细胞着丝点?口口?曰?口进行无丝分裂?小核显示免疫荧光反应,大核未见荧光染色?大核是 由小核变化而来,大核呈阴性反应可能是大核着丝点蛋白逐渐弥散、消失,而大核基因又 不能继续表达此种蛋白的2;所致?&帕在四膜虫的着丝点抗原研究中发现七56.(+&6可显示出大核中有?的着丝点蛋 白,但未报告有免疫荧光斑点?我们只发现小核为强的;免疫荧光反应,但未见斑点状,这可能是核小,着丝点数量又多的缘故?在植物细胞中用;血清的间接免疫荧光法染色显示着丝点尚未见报导?我们首次在多种除壁的植物细胞中发现有可为;血清荧光染色的着丝点抗原,如大蒜、洋葱、吊兰、蚕豆和低等植物葫芦醉等?在另一些植物如玉米、小麦和大豆细胞中却未发现有阳性反应?此类差异并不能说明这些细胞中没有着丝点抗原,可能由于进化的多歧性,生物种类的不同,其着丝点抗原性有变化,也可能不同患者血清中所含的;有所不同的缘故?例如(.(“用大鼠、小鼠、猪、仓鼠和兔的静止细胞和分裂细胞为材料,观察对;荧光染色的反应均获阳性结果?但.56.()+&6发现 8的;可以 识别大鼠以外的所有种类中的?,蛋 白,此外还可识别人的 及?蛋 白?相反在大鼠中可识 别 蛋白?相当于一;,是一种类似组蛋 白的蛋 白质,一;存在于多种哺乳动物的细胞着丝点 中,鸟类却没有,可能属于进化的另一支,此外,不同患者血清中的;(&926+;.89/38;,?,!?!(/)+.7,.6+?&)/).6&.&(&5&,6./)/)60 9.4&+6/&)7/)&(,滋&)&,)/6场).6&.&(.5?(&5&#.(+,?,?&%:,?56%主).6&9&(.)6/1.)5+./,7,57)6.5/,叻.4&+6/&).&)5.(4 6/&),&+&9+(/&+&17&,6.76&5.+.6&)?2.&(&+5拌/)1=(&(&(6&(7,?!?!?/)1.+,优.(%?二+/)址.6&.&(.)6(&.(.&滋6/&);5&)6/1&)?(.5.)6/)6.+/)城).6&9&(.)廿&.(.?9(&5&#.(+,?!,?。地履吉,等,硬皮病血清显示两栖类精子及肝核着丝拉?中国科学辑,?#。,!北京师范大学学报#自然科学版第!卷,?8功.(;)&97 6.】?.5,?!一?!?_。及/3+.7一.6+?冉%()郎.)65&,址).6倪&(.,/)&肥.+,?一(/)1./&5/,)+5.(/6&1.).滋5(&5&#.(二助(&6./)5/)1)钱/).5.(,(&6/.)65/65 9+.(&.(?6/&)65/6)6/&.)6(&.(.)6/&/.5?%(&6./)/)/,.(.)6 功+/).+5叮.)%+.(,.6+?;?!.)6(&.(&(&6./)#(6/9+.5)/6址时&).5?%(&6./).&).)6&,址).6&9&(./)山7护衬5护”幼6/一3).6&9&(.)6/&7一/(5 6;卫叼吧&)1(.55;56(.6,?,几?曰六咭上?通?几?匕?=2 2 =;2 8;2 323 8)./+/)+)1&)1.&+.)1;)+)1)(.)+/)/.;一6(.6/5&(./玩656./56.).&,6.主).6&.&(.亡.)6(&.(./)4 (诬.67&,)才+)+)6.+5 7/)/(.60 )&,+&(.5.)6.6&,5加?;6/.)65宜65.+.(&6/.,5&/主6/5?缸一75.90.55.5=.一,、再萝&5 6&?肠 9.,云云5落。1才蒯,5苏5,月少,。,+1(。6 6哪”名,尸肠邝云娜才5 9 再+介”5众,对。,&如犷“+知5,尸群,”9云“,9&砂,5&9+.&555?,:9,加,;+“,“,;+宕。?5 才落。,7+。,9 .”5.,“犷落妙1(&、云犷苦9=.(.5.+.6.56.6.(/+5/)6.56 7?.(.5.(.(.5+65/)/.6.66+6.)/习)+)65.&)./).75,/.+.+&.6.6/,.(.)6.4&+60&)(7.(宜.垃6./&+&1/.+/)1&,4.&,&1&5)/1+7.&)5.(4.祖.6&.&(.(&6./)?.7&(?)6元一.)6(&.(.她.6&.&()6/&67#;6)6.+5,/).6&.&(.)6(&.(.八刀6卜&(一(.一/.(6.)6&,/&,&1 7,.匀/)12&(公3试4.(5/67,?!,.水)1,./)13)/&).宜.+?口口?口勺