蛋白条带的位置.pdf

最佳的性能，值得您信赖的结果Novex 蛋白质分离、印迹和检测系统1精心设计的产品，帮助您获得准确、可重复的结果Novex蛋白质分离、印迹和检测系统 利用先进的分离和转移技术获得出众的 蛋白质分辨率 超灵敏的蛋白质检测 每次均可快速获得一致的结果如今，Novex品牌不仅仅只包括凝胶产品。它还提供高质量产品和试剂，可与早期的凝胶产品系列配合使用，包括最清晰、最准确的预染和非预染分子量标准品；配方独特的高灵敏度染料；iBlot 7-分钟蛋白质转印系统，BenchPro 4100自动化蛋白质印迹处理系统和蛋白质检测试剂盒。配合使用上述产品有助于实现完整的条带清晰的蛋白分离、准确的分子量估算、完全的蛋白转移、简单的转移后处理和灵敏的检测。2蛋白质分离3 电泳和预制凝胶8 制胶基础设备9 大分子蛋白质分离10 标准品12 染料蛋白质转印14 转印设备蛋白质检测16 检测设备17 检测基础产品目录3凝胶电泳高性能、高质量预制凝胶和制胶基础产品如果您要进行标准的一维蛋白质分离，我们可提供Novex解决方案，本指南将帮助您选择适合您研究的分离工具。Novex凝胶系列产品包括多种不同化学成分、孔规格和尺寸的凝胶可供选择，帮助您获得准确的下游结果所需要的分离效果。一维蛋白质分离制胶配件Tris-甘氨酸凝胶NuPAGE凝胶应用自制凝胶：预先装配的空卡盒、缓冲液、试剂利用 Laemmli 试剂实现预制凝胶的快捷性笔直的蛋白质条带，最长的保质期蛋白质分辨率中中高蛋白质完整性中中高保质期NA1-2 个月8 个月(Tris-乙酸)16 个月(Bis-Tris)平均电泳时间90 分钟90 分钟35 分钟分离范围6500 kDa6500 kDa1.5300 kDa(Bis-Tris)30400 kDa(Tris-乙酸)可提供的凝胶浓度NA4%，6%，8%，10%，12%，420%，412%，14%，16%，18%，816%，1020%412%，8%，10%，12%(Bis-Tris)38%，7%(Tris-乙酸)可供选择的包装规格NA5-和 10-包2-和 10-包凝胶尺寸小型：8 x 8 cm，1 或 1.5 mm 厚中型：8 x 13 cm，1 mm 厚小型：8 x 8 cm，1 或 1.5 mm 厚中型：8 x 13 cm，1 mm 厚小型：8 x 8 cm，1 或 1.5 mm 厚中型：8 x 13 cm，1 mm 厚最大样品体积/孔25 L(1 mm)37 L(1.5 mm)25 L(1 mm)37 L(1.5 mm)25 L(1 mm)37 L(1.5 mm)每个条带达到最佳分辨率的最大蛋白上样量*NA0.5 g0.5 g*在 1.0 mm、10 孔凝胶上，采用 考马斯亮蓝染色检测。4NuPAGE凝胶NuPAGE预制凝胶系统是一种创新的高性能聚丙烯酰胺凝胶系统。出众的蛋白条带分辨率和稳定性 更短的样本电泳时间 更长的产品保存期凝胶有Bis-Tris和Tris-乙酸两种配方及多种丙烯酰胺浓度可供选择(表1，图3)。独特的NuPAGE凝胶配方可最大程度避免其它凝胶类型经常出现的“微笑”现象及较差的分辨率。中性pH凝胶和缓冲液系统还可避免碱性电泳环境下出现的样品化学修饰。此外，NuPAGE凝胶可以提高蛋白转移效率，从而增强蛋白质印迹分析的检测信号。表 1.可供选择的两种 NuPAGE 类型。凝胶类型可选的浓度分离范围保存期平均电泳时间应用Bis-Tris8%，10%，12%，412%1.5300 kDa16 个月*3550 分钟小到中等大小的蛋白质的分离；简单的样品还原；蛋白质测序、质谱及对蛋白质完整性要求较高的实验Tris-乙酸7%，38%30400 kDa8 个月*60 分钟大分子量蛋白质分离，分离效果极佳NuPAGE小型胶的订购信息。每盒Novex小型胶包括 10 块凝胶。如需了解其它包装规格，请登录我们的网站 mm 厚1.5 mm 厚10 孔12 孔15 孔2D 孔10 孔15 孔2D 孔Bis-Tris 10%NP0301BOXNP0302BOXNP0303BOXNP0306BOXNP0315BOXNP0316BOXNP0317BOXBis-Tris 10%(2片装，New)NP0301PK2NP0302PK2Bis-Tris 412%NP0321BOX NP0322BOX NP0323BOX NP0326BOX NP0335BOX NP0336BOX NP0337BOXBis-Tris 412%(2片装，New)NP0321PK2 NP0322PK2NP0323PK2NP0335PK2NP0336PK2Bis-Tris 12%NP0341BOX NP0342BOX NP0343BOX NP0346BOXBis-Tris 12%(2片装，New)Np0341PK2NP0342PK2Tris-乙酸 7%EA0355BOX EA03552BOX EA03555BOX EA0358BOX EA03585BOX EA0359BOXTris-乙酸 38%EA0375BOX EA03752BOXEA03755BOX EA0376BOX EA0378BOX EA03785BOX EA0379BOXTris-乙酸 3-8%(2片装，New)EA0375PK2EA03752PK2NuPAGE 中型胶的订购信息。每盒 Novex 中型胶包括 10 块凝胶。凝胶类型和浓度无中型胶适配器带有中型胶适配器(10)*12+2 孔20 孔26 孔12+2 孔20 孔26 孔Bis-Tris 8%WG1001BOX WG1002BOX WG1003BOX WG1001A WG1002A WG1003ABis-Tris 10%WG1201BOX WG1202BOX WG1203BOX WG1201A WG1202A WG1203ABis-Tris 412%WG1401BOX WG1402BOX WG1403BOX WG1401A WG1402A WG1403ATris-乙酸 38%WG1601BOX WG1602BOX WG1603BOX WG1601A WG1602A WG1603A*将中型胶适配器(货号：WA0999)与凝胶卡盒相连，您即可在 Bio-Rad Criterion Cell 中进行中型胶电泳。5产品规格货号PowerEase 500 电源(220/240 VAC 50/60 Hz)1EI8700ZOOM Dual Power(200240 VAC 47-60 Hz)1ZP10002Novex 电源适配器1ZA10001电源凝胶槽和缓冲液所有Novex凝胶均可提供小型(8x8 cm)和中型(8x13 cm)两种尺寸，帮助您获得更高的通量。在XCell SureLock Mini-Cell上可同时进行至多两块小型胶电泳(图1A)。使用XCell4 SureLock Midi-Cell(图1B)可同时进行至多四块中型胶电泳。每块中型胶上可以运行多达 26 个样品，一次可实现超过100个样品的电泳。采用中型胶适配器(货号：WA0999)，即可在Bio-Rad Criterion Cell上进行Novex中型胶电泳。图1.Xcell SureLock蛋白电泳槽。(A)XCell SureLock Mini-Cell(货号：EI0001)用于一块或两块NuPAGE或Novex小型胶的电泳。(B)XCell4 SureLock Midi-Cell(货号：WR0100)用于至多四块NuPAGE或Novex中型胶的电泳。产品规格货号XCell SureLock Mini-Cell1EI0001XCell4 SureLock Midi-Cell1WR0100NuPAGE 样品还原剂(10X)250 L10 mLNP0004NP0009NuPAGE 抗氧化剂15 mLNP0005NuPAGE LDS 样品缓冲液(4X)10 mL250 mLNP0007NP0008NuPAGE MOPS SDS 电泳缓冲液(仅适用于 Bis-Tris 凝胶)(20X)500 mL5 LNP0001NP0001-02NuPAGE MES SDS 电泳缓冲液(仅适用于 Bis-Tris 凝胶)(20X)500 mL5 LNP0002NP0002-02NuPAGE Tris-乙酸 SDS 电泳缓冲液(20X)500 mLLA0041NuPAGE MOPS SDS 缓冲液试剂盒(适用于 Bis-Tris 凝胶)包括 NP0001、NP0004、NP0005、NP0007 各 1 瓶1 套NP0050NuPAGE MES SDS 缓冲液试剂盒(适用于 Bis-Tris 凝胶)包括 NP0002、NP0004、NP0005、NP0007 各 1 瓶1 套NP0060NuPAGE Tris-乙酸缓冲液试剂盒(仅适用于 Tris-乙酸凝胶)包括 LA0041、NP0004、NP0005、NP0007 各 1 瓶1 套LA0050NuPAGE 转移缓冲液(20X)125 mL1 LNP0006NP0006-1AB图2.(A)PowerEase 500电源；(B)ZOOM双电源。AB6将您的凝胶升级为 NuPAGE凝胶如果您想要从Tris-甘氨酸凝胶升级为NuPAGE凝胶，请登录我们的网站 Sharp蛋白质标准品(货号 LC5800，预染；货号LC5801，未染色)在NuPAGE Bis-Tris凝胶上的迁移模式。HiMark未染色标准品(货号：LC5688)在NuPAGE Tris-乙酸凝胶上的迁移模式。图3.在NuPAGE凝胶上的 迁移模式。为获得最佳结果，蛋白质条带应在灰色阴影区域内迁移。如需了解其它Novex凝胶配方、浓度和包装形式的更多详情，可登录 kDa160 kDa110 kDa110 kDa80 kDa60 kDa60 kDa60 kDa50 kDa40 kDa40 kDa30 kDa30 kDa30 kDa30 kDa30 kDa30 kDa30 kDa30 kDa40 kDa40 kDa40 kDa40 kDa40 kDa40 kDa40 kDa40 kDa50 kDa50 kDa50 kDa50 kDa50 kDa50 kDa50 kDa60 kDa60 kDa60 kDa60 kDa60 kDa80 kDa80 kDa80 kDa80 kDa80 kDa80 kDa80 kDa20 kDa15 kDa15 kDa15 kDa15 kDa15 kDa15 kDa15 kDa20 kDa10 kDa3.5 kDa3.5 kDa3.5 kDa3.5 kDa10 kDa10 kDa10 kDa10 kDa10 kDa10 kDa20 kDa20 kDa20 kDa20 kDa20 kDa20 kDa110 kDa110 kDa110 kDa110 kDa110 kDa110 kDa160 kDa160 kDa160 kDa160 kDa160 kDa160 kDa160 kDa500 kDa290 kDa240 kDa160 kDa116 kDa97 kDa66 kDa55 kDa55 kDa66 kDa97 kDa116 kDa160 kDa240 kDa290 kDa500 kDa260 kDa260 kDa260 kDa260 kDa260 kDa260 kDa260 kDa7预制凝胶产品选择指南Life technologies提供多种预制凝胶可供选择。凝胶浓度的选择取决于目的蛋白的分子量大小，原则上高分子量蛋白用低浓度胶，低分子量蛋白用高浓度胶。如果目的蛋白分子量不确定，或者样本中各种蛋白分子量范围幅度大，则建议选择梯度胶。请根据凝胶迁移图谱和表1选择适合您研究的凝胶和配套缓冲液。凝胶类型适合分离的分子量大小推荐样品缓冲液推荐电泳缓冲液电泳环境Nupage Bis-Tris Gel14-200KDaNupage LDS Sample BufferNupage MOPS SDS Running Buffer变性2-200KDaNupage LDS Sample BufferNupage MES SDS Running Buffer变性Nupage Tris-Acetate Gel36-400KDaNupage LDS Sample BufferNupage Tris-Acetate SDS Running Buffer变性36-400KDaNovexTris-Glycine Native Sample Buffer(2)Nupage Tris Glycine Native Running Buffer非变性NovexTris-Glycine Gel6-200KDaNovexTris-Glycine SDS Sample Buffer(2)NovexTris-Glycine SDS Running Buffer(10)变性6-200KDaNovexTris-Glycine Native Sample Buffer(2)NovexTris-Glycine Native Running Buffer(10)非变性Novex Tricine Gel2-200KDaTricine SDS Sample Buffer(2)Tricine SDS Running Buffer(10)变性注：Novex Tricine凝胶在分离2-20 kDa大小蛋白效果显著优于Tris-Glycine凝胶。上样孔数量/上样孔类型15910121517IPG2D凝胶厚度每孔最大上样体积1.0mm700 L60 L28 L25 L20 L15 L15 L7 cm IPG胶条400 L1.5mmn/an/an/a37 Ln/a25 Ln/an/a600 L样品类型获得最佳分辨率时建议的最大上样量+蛋白质*12 g2 g0.5 g0.5 g0.5 g0.5 g0.5 gn/a12 gDNA*2.4 g400 ng100 ng100 ng100 ng100 ngn/an/a2.0 g+NuPAGE凝胶的蛋白质上样量较Tris-甘氨酸或三羟甲基甘氨酸凝胶高。*Coomassie染色的蛋白质；*溴化乙锭染色的DNA上样孔数量12+2*2026*每孔最大上样体积*45 L样品+15 L标准品25 L15 L每个条带最大蛋白上样量*0.7 g0.5 g0.35 g每个条带最大蛋白上样量*1.4 ng1 ng0.7 ng*这些体积代表孔的实际最大体积的约60%。*与标准多孔加样器兼容；*Coomassie染色的蛋白质；*银染的蛋白质表2.Mini胶上样孔推荐上样体积及胶的样品容量表1.凝胶类型及配套缓冲液的选择表3.Midi胶上样孔推荐上样体积及胶的样品容量8登录我们的网站 制胶设备从高纯度丙烯酰胺到凝胶梳，我们提供的试剂和设备使制胶变得简单且高效。产品规格货号丙烯酰胺、聚合剂和缓冲液Rhinohide 聚丙烯酰胺凝胶聚合剂浓缩液，足以配制 1 L 30%的丙烯酰胺/bis-丙烯酰胺(37.5:1)200 mLR-33400UltraPure TEMED30 mL15524010UltraPure 丙烯酰胺500 g15512-023UltraPure N,N-亚甲基双丙烯酰胺100 g15516-024UltraPure Tris1 kg15504-020UltraPure 蔗糖5 kg15503-022UltraPure 10%SDS 溶液4 x 100 mL15553-0271 L24730-020UltraPure SDS500 g15525-017凝胶卡盒卡盒，1.0 mm25/包NC2010卡盒，1.5 mm25/包NC201512+2 孔10/包WC1012凝胶梳梳，1.0 mm，1 孔25/包NC3001梳，1.0 mm，10 孔25/包NC3010梳，1.0 mm，12 孔25/包NC3012梳，1.0 mm，15 孔25/包NC3015梳，1.0 mm，2 孔25/包NC3003梳，1.0 mm，2D 孔25/包NC3002梳，1.0 mm，5 孔25/包NC3005梳，1.5 mm，10 孔25/包NC3510梳，1.5 mm，15 孔25/包NC3515梳，1.5 mm，2D 孔25/包NC3502Midi Cassette Combs 20 孔10/包WC1020Midi Cassette Combs 26 孔 10/包WC1026变性剂UltraPure 尿素500 g15505-0352 kg15505-0509图4.利用NativePAGE凝胶提升分离效果。采用(A)412%Tris-甘氨酸凝胶和(B)NativePAGE 416%凝胶进行非变性电泳。上述两种凝胶中均加入NativeMARK标准品(泳道1)和分别溶解于0.25%、0.5%、1.0%和2.0%月桂酰基麦芽糖苷的18 mg菠菜叶绿体提取物(分别位于泳道25)。采用胶体蓝染料试剂盒进行凝胶染色。NativePure 亲和纯化试剂盒您可以利用NativePure亲和纯化试剂盒轻松纯化相互作用的蛋白复合物，以供分析。目前可提供两种试剂盒：NativePure哺乳动物亲和纯化试剂盒和 NativePure慢病毒表达和亲和纯化系统。上述两款试剂盒均提供Gateway载体，适用于多种表达系统中的轻松表达。如需了解天然蛋白分析的更多详情，请登录 NativePAGE、Tris-甘氨酸或 NuPAGE Tris-乙酸凝胶实现准确的蛋白质分子量估算。可在201,200 kDa范围内分离得到明显的蛋白条带。NativePAGE Bis-Tris凝胶可实现灵敏的高分辨率分离 NativeMARK未染色蛋白质标准品可实现准确的分子量 估算 NativePure纯化系统可实现天然蛋白复合物的高效纯化天然复合物纯化和分析系统是一套新型工具组合，适用于超大分子量蛋白复合物、膜蛋白复合物和超分子复合物的分析。NativePAGE Bis-Tris 凝胶系统NativePAGE Bis-Tris凝胶系统是一种预制聚丙烯酰胺小型胶，可用于对天然膜蛋白复合物、天然可溶性蛋白进行灵敏且高分辨率的分析、分子量估算和天然蛋白纯度评估等应用。该系统是基于Schgger和von Jagow开发的蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术。使用该系统可最大程度地提高大分子量蛋白(10,000 kDa)的分辨率，分析天然、未变性构象的膜蛋白复合物，达到比传统的Tris-甘氨酸非变性电泳更高的分辨率(图 4)。1 2 3 4 5B1,2361,0487204802421466620kDa1,2361,04872048024214666201 2 3 4 5AkDa产品规格货号天然蛋白分析NativePAGE 312%Bis-Tris 凝胶(10 孔)10 块凝胶BN1001NativePAGE 312%Bis-Tris 凝胶(15 孔)10 块凝胶BN1003NativePAGE 416%Bis-Tris 凝胶(10 孔)10 块凝胶BN1002NativePAGE 416%Bis-Tris 凝胶(15 孔)10 块凝胶BN1004NativeMARK 未染色蛋白标准品250 LLC0725NativePAGE 电泳缓冲液试剂盒1 套BN2007NativePAGE 样本制备试剂盒1 套BN2008NativePAGE 20X 电泳缓冲液1 LBN2001NativePAGE 20X 阴极缓冲液添加剂250 mLBN2002NativePAGE 4X 上样缓冲液10 mLBN2003NativePAGE 5%G-250 样品添加剂0.5 mLBN2004*NativePAGE 凝胶可提供 8 x 8 cm 小型尺寸胶。10准确估算蛋白分子量最清晰、最准确的预染和非预染分子量标准品我们全系列的Novex蛋白分子量标准品可实现方便且准确的电泳条带鉴别。如需了解蛋白分子量标准品的更多详情，请登录 预染和非预染分子量标准品蛋白质分离过程中通常涉及条带分辨。我们可提供各种 Novex分子量(MW)蛋白标准品，帮助您实现最准确的分子量估算。最锐利的条带-较厚条带相比，能够更清楚地估测分 子量 最宽的分子量范围-估测范围更宽(3.5260 kDa)梯形条带分离-在可辨范围内获得均匀分隔的图谱，轻松实现鉴别和比较SeeBlue 预染标准品BenchMark 预染蛋白质分子量标准HiMark 预染蛋白质标准品SeeBlue Plus2 预染标准品Sharp 预染蛋白质标准品应用基础、常规分子量仅适用于 Tris-甘氨酸凝胶的分子量标准品适用于大分子量蛋白多种颜色的条带，估算简单最简单的分子量分析方法；最佳的分子量估算#条带/#颜色9 个条带1 种颜色10 个条带2 种颜色9 个条带2 种颜色10 个条带3 种颜色12 个条带12 种颜色条带清晰度低低低中高分子量范围4250 kDa10190 kDa30460 kDa4250 kDa3.5260 kDa凝胶相容性NuPAGE Bis-TrisTricineTris-甘氨酸仅 Tris-甘氨酸Tris-乙酸Tris-甘氨酸NuPAGE Bis-TrisTricineTris-乙酸Tris-甘氨酸NuPAGE Bis-TrisTricineTris-甘氨酸产品规格货号预染蛋白质标准品SeeBlue500 LLC5625BenchMark2 x 250 L10748-010HiMark250 LLC5699SeeBlue Plus2500 LLC5925Sharp2 x 250 LLC5800Sharp预染LC5800SeeBlueLC59251989862493828171463kDa26016011080605040302015103.5kDaSeeBlueLC562518862493828181463kDaBenchMark10748-0101901208560504025201510kDaHiMarkLC5699kDa46026823817111771554131预染蛋白质标准品可实现简单且清晰的条带鉴别标准品货号NuPAGE4-12%Bis-Tris凝胶/MES SDS缓冲液NuPAGE4-12%Bis-Tris凝胶/MES SDS缓冲液NuPAGE4-12%Bis-Tris凝胶/MES SDS缓冲液预染420%Tris-甘氨酸凝胶预染NuPAGE3-8%Tris-乙酸凝胶/Tris-乙酸SDS缓冲液Plus211未染色蛋白质标准品Mark12 未染色标准品BenchMark 蛋白质分子量标准Sharp 未染色蛋白标准品HiMark 未染色蛋白标准品NativeMark 未染色蛋白标准品应用变性凝胶电泳中的常规分子量估算分子量估算和快速定位分子量估算和条带分辨大分子量蛋白质的分子量估算非变性凝胶电泳的分子量估算条带数12151298 分子量范围2.5200 kDa10220 kDa3.5260 kDa40500 kDa201,200 kDa定位条带无有有无无定位条带数02(20 和 50 kDa 条带更明显)3(20、50 和 110 kDa 条带更明显)00凝胶相容性NuPAGE Bis-Tris；SDS-PAGE Tricine，Tris-乙酸，Tris-甘氨酸NuPAGE Bis-Tris；SDS-PAGE Tricine，Tris-乙酸，Tris-甘氨酸NuPAGE Bis-Tris；SDS-PAGE Tricine，Tris-乙酸，Tris-甘氨酸Tris-乙酸Tris-甘氨酸，NativePAGE Bis-Tris，Tris-乙酸条带清晰度低中高低低未染色蛋白质标准品规格货号Sharp2 x 250 LLC5801BenchMark 分子量标准2 x 250 L10747-012Mark121 mLLC5677HiMark HMW250 LLC5688MagicMark XP Western250 LLC5602BenchMark His 标签125 LLC5606BenchMark 荧光125 LLC5928IEF Marker 310500 L39212-01NativeMark250 LLC0725kDa26016011080605040302015103.5BenchMark10747-0122201601201009080706050403025201510kDaNovex SharpLC5801Mark12LC567731200116.397.466.355.436.521.514.463.52.5kDaHiMarkLC568850029024016011697665540kDaMagicMark XPLC5602203040506080100220120kDa未染色蛋白质标准品可实现准确的分子量估测蛋白质标准品适用于蛋白质印迹标准品货号NuPAGE4-12%Bis-Tris凝胶/MES，SimplyBlue SafeStain染色NuPAGE4-12%Bis-Tris凝胶/MES，CoomassieR-250染色NuPAGE412%Bis-Tris凝胶/MES，CoomassieR-250染色NuPAGE3-8%Tris-乙酸凝胶/SimplyBlueSafeStain染色的Tris-乙酸SDS缓冲液NuPAGEBis-Tris 凝胶，转印至硝酸纤维素膜，采用WesternBreeze化学发光试剂盒检测BenchMarkHis-taggedLC5606kDa16012080605040302015101601208060504030201510kDaBenchMarkFluorescentLC5928 155986340322111kDaIEF Marker31039212-01pI8.38.07.87.46.96.05.35.24.54.23.5kDa1,0487204802421466620NativeMarkUnstainedLC0725标准品货号IEF标准品非变性分子量标准特殊蛋白质标准品NuPAGE412%Bis-Tris凝胶/MES，InVisionIn-Gel His标签染料染色NuPAGE412%Bis-Tris凝胶/MES SDS缓冲液，转印至硝酸纤维素膜，采用抗His(羧基端)抗体和WesternBreeze化学发光试剂盒检测NuPAGE412%Bis-Tris凝胶/MES，采用紫外线透射仪显色(2 秒曝光)pH 310 IEF凝胶NativePAGE416%Bis-Tris凝胶12Novex 蛋白染料概述。SimplyBlue SafeStainSilverQuest 银染试剂盒SYPRO Ruby 蛋白凝胶染料Coomassie Fluor Orange 蛋白凝胶染料染料类型比色法；即用型胶体 Coomassie G-250比色法；即用型银染荧光；即用型荧光；即用型所需仪器无无紫外线透射仪、蓝光透射仪或激光扫描仪紫外线透射仪、蓝光透射仪或激光扫描仪灵敏度7 ng BSA亚纳克亚纳克48 ng背景低低低低线性动态范围770 ng110 ng0.251,000 ng41,000 ng多重分析性能无无有无光密度测定有不推荐荧光信号集成荧光信号集成质谱兼容性有有有有染色膜PVDF无使用 SYPRO Ruby 印迹染料无总蛋白染色/脱色时间3 小时；采用微波实验方案仅需 12 分钟90 分钟；采用微波实验方案60 分钟90 分钟(在小型胶上采用新型实验方案进行)；大型胶需过夜3060 分钟实验方案总结冲洗、染色、水洗脱色10 种溶液固定、染色和冲洗一步法固定和染色货号LC6060，LC6065LC6070S12001，S12000，S21900C33250，C33251用于总蛋白检测的灵敏染料Life Technologies提供多种染色试剂，用于总蛋白和翻译后修饰蛋白染色，包括Coomassie G-250染料、银染和一序列可兼容的高灵敏度荧光染料，可直接定量检测在一块凝胶上同一样本的蛋白磷酸化、糖基化及总蛋白表达。利用下表查找适合您应用的染料。图5.采用SYPRO Ruby蛋白凝胶染料实现灵敏的荧光染色。总蛋白的超高灵敏度荧光检测SYPRO Ruby 蛋白凝胶染料 简单的染色步骤 3 个数量级的线性定量范围 与质谱和微量测序的线性兼容性SYPRO Ruby蛋白凝胶染料是一种高灵敏度荧光染料，可用于1D或2D凝胶中的蛋白质染色(图 5)。采用快速的微波小型胶实验方案，一般只需90分钟即可获得最佳的结果。为使用方便，SYPRO Ruby染料采用即用型配方，且可在室温下保存。13采用 SimplyBlue SafeStain 实现快速、灵敏且安全的 Coomassie 染色SimplyBlue SafeStain是一款配方独特的即用型Coomassie G-250染料，可实现快速、灵敏且安全的蛋白质染色。利用SimplyBlue SafeStain，采用快速的微波实验方案，只需几分钟即可染色条带，检测出低至7ng的蛋白质(图6)。SimplyBlue SafeStain完全无毒性，且无需酸/醇固定剂或脱色。SimplyBlue SafeStain可与质谱分析相结合。质谱-兼容的 SilverQuest 银染试剂盒SilverQuest银染试剂盒可提供高灵敏度的银染，且蛋白质修饰极少，可获得最佳的质谱结果。SilverQuest染料可检测出低至0.3 ng的蛋白质(图7)，一般只需不到90分钟即可完成。采用优化的微波步骤可在30分钟内获得结果。图6.利用 SimplyBlue SafeStain实现灵敏的染色。图7.利用 SilverQuest 银染试剂盒获得亚纳克级灵敏度。产品规格货号蛋白染料SimplyBlue SafeStain1 LLC60603.5 LLC6065SilverQuest 银染试剂盒1 套LC6070SYPRO Ruby 蛋白凝胶染料200 mLS120011 LS120005 LS21900Coomassie Fluor Orange 蛋白凝胶染料1 LC332505 LC33251Pro-Q Diamond 磷酸蛋白凝胶染色试剂盒1 套P33300Pro-Q Emerald 300 糖基化蛋白染色试剂盒1 套P2185714高效的蛋白质转移，成功的蛋白质印迹iBlot 7-分钟蛋白质印迹系统 在7分钟或更少的时间内实现蛋白的完全转移 高转印效率和高度的均匀性 改善了转印的可靠性及可重复性iBlot 7-分钟蛋白质印迹系统可在7分钟内高效且可靠地实现聚丙烯酰胺凝胶蛋白质转印，无需缓冲液或外部电源。iBlot装置是一种独立式设备(图9)，它采用一次性硝酸纤维素或PVDF转印膜组，提供了便于使用，无需缓冲液的即插即用系统。iBlot系统不但使用简单便捷，还可高效转移蛋白(图8)，具有较高的下游检测灵敏度-在大多数情况下的灵敏度较传统方法更高。最终，您将通过较少的样品获得更准确的检测结果。iBlot 7-分钟蛋白质印迹系统适用于多种聚丙烯酰胺凝胶尺寸，包括中型尺寸、中型凝胶(8 x 13 cm)及E-PAGE 48和96凝胶和小型凝胶(8 x 8 cm)。预先剪切的转印膜利用预先剪切的膜/滤纸夹层简化转印的准备过程。Life Technologies可提供各种预先切好及预先装配好的膜/滤纸夹层，适于小型胶和中型胶/E-PAGE胶，从而使整个转印变得更容易(图10)。蛋白的某些性质(如电荷、疏水性等)均可影响它结合在膜表面的能力。您可能需要将目标蛋白在不同种类的膜上进行实验以选择最合适的膜类型。如需了解有关Life Technologies蛋白质印迹分析产品的更多信息，请登录 7分钟蛋白质印迹系统获得高转移效率。将Nupage 12%Bis-Tris小型凝胶中的蛋白分别经(A)iBlot干式转印系统及(B)半干式转印系统转移至硝酸纤维素膜上。泳道16：0.0625 g、0.125 g、0.25 g、0.5 g、1.0 g和2.0 g SW480人结肠癌细胞裂解液(Alexis)(对照)；第7和第12泳道：5 l SeeBlue Plus2预染的蛋白质分子量标准；第811泳道：0.5 l、1.0 l、2.0 l和4.0 l MagicMark XP蛋白质印迹分子量标准。图 9.iBlot 7-Minute Blotting System。图10.利用Invitrolon PVDF可获得高强度信号。将含有c-myc抗原表位的53 kDa蛋白转移至(A)Invitrolon PVDF和(B)其它制造商的0.45 m PVDF膜上。利用1:500稀释的小鼠抗myc抗体检测两种PVDF膜，然后使用WesternBreeze化学发光抗小鼠试剂盒检测。均在X线胶片曝光两分钟。泳道1-4：2 ng、1 ng、0.5 ng和0.2 ng的蛋白质。A1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12B1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12其它1 2 3 4Invitrolon PVDFA 1 2 3 4B15产品规格货号蛋白质印迹干电转印iBlot 凝胶转移设备1 台IB1001iBlot 转印膜组(普通型，硝酸纤维素)10 套/盒IB3010-01iBlot 转印膜组(迷你型，硝酸纤维素)10 套/盒IB3010-02iBlot 转印膜组(PVDF，普通型)10 套/盒IB4010-01iBlot 转印膜组(PVDF，迷你型)10 套/盒IB4010-02印迹滚筒，8.6 cm 宽1 台LC2100孵育托盘，10 x 14 x 3 cm(L x W x D)8 个托盘和盖子/套LC2102高效的半干式转印半干式转印仪1 台SD1000转印滤纸，2.5 mm 厚，8.6 x 13.5 cm50 张滤纸LC2008转印滤纸，2.5 mm 厚，7.5 x 8.4 cm50 张滤纸LC2010Invitrolon PVDF/滤纸夹层，0.45 m 孔径，8.3 x 7.3 cm20 组/套LC2002Invitrolon PVDF/滤纸夹层，0.45 m 孔径，8.5 x 13.5 cm16 组/套LC2007硝酸纤维素/滤纸夹层，0.45 m 孔径，8.5 x 13.5 cm16 组/套LC2006硝酸纤维素/滤纸夹层，0.2 m 孔径，8.5 x 13.5 cm16 组/套LC2009NativePure Lentiviral Gateway 载体试剂盒1 套BN3001预先剪切的转印膜产品应用规格膜/滤纸 夹层数量货号硝酸纤维素，0.2 m 孔径蛋白质转移，固相分析系统，氨基酸分析8.3 x 7.3 cm(迷你型)20LC20008.5 x 13.5 cm(中型)16LC2009硝酸纤维素，0.45 m 孔径蛋白质转移，固相分析系统，氨基酸分析8.3 x 7.3 cm(迷你型)20LC20018.5 x 13.5 cm(中型)16LC2006Invitrolon PVDF，0.45 m 孔径蛋白质转移，固相分析系统，氨基酸分析，再标记8.3 x 7.3 cm(迷你型)20LC20058.5 x 13.5 cm(中型)16LC2007PVDF，0.2 m 孔径蛋白质转移，固相分析系统，氨基酸分析，再标记8.3 x 7.3 cm(迷你型)20LC2002尼龙，0.45 m 孔径DNA，RNA，蛋白质转移，固相固化，干化学试纸条，酶固化，基因探针分析8.3 x 7.3 cm(迷你型)20LC2003每个 iBlot底部膜组均包含一张用于蛋白质固化的0.2 m孔径硝酸纤维素或聚偏乙烯双氟化物(PVDF)膜。观看iBlot操作视频，请登录 4100 全自动蛋白质印迹处理系统只需按下“run”即可自动操作 减少繁琐的操作工作和人为误差 最大程度降低交叉污染，无需纯化 无需更改实验方案即可进行自动化操作 适用于所有化学发光、呈色和荧光免疫检测试剂和实验方案BenchPro 4100蛋白质印迹处理系统(图11)能够在精确的时间点将