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阴道分泌物湿片（生理盐水直接涂片）检查
深圳市宝安区龙华人民医院检验科
体液检验室
阴道分泌物湿片（生理盐水直接涂片）检查
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版本1
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1 原理
通过理学方法及生物显微镜对新鲜阴道分泌物进行检查，以观查其颜色、PH、清洁度、和有无特殊细菌及细胞等。

2 标本采集
2．1标本采集前病人准备：在采集标本前24小时内无性交、无盆浴、无阴道灌洗、无阴道放置药物、近期内未服用激素药物。
2．2标本种类：新鲜阴道分泌物。
2．3标本要求：所用器具应清洁干燥、无污染、无化学药品（如酒精、肥皂水），标本采集时禁用各种润剂（如石蜡油）。
2．4 标采集：阴道分泌物由妇产科医师采集，用消毒棉拭子从阴道后穹窿部蘸取，并将其置入含有0.5ml～1.0ml生理盐水的试管内,或用璃吸管,插入阴道后穹窿部吸取分泌物,制成薄涂片,立即送检。也可用窥阴器扩张阴道后刮取子宫颈分泌物，加一滴生理盐水涂成薄片，立即送检。
3 标本存放：标应保持新鲜，温度应保持在25℃～37℃之间，一般不超过2小时。
4 标本运输：放入洁净玻璃试管内，室温运输。

5 标本拒收标准：标本污染、不新鲜，取材不当不能检测。
6 试剂：
6．1 生理盐水。
6．2 2.5mol/LKOH溶液(KOH140g溶于1000ml蒸馏水中)。
7 实验器材：生物显微镜载玻片。
8 操作步骤：
8．1 取阴道分泌物先作一般性外观检查。后滴加1滴生理盐水，制成涂片。低倍镜观察后，再用高倍镜检查，根据上皮细胞、白细胞（或脓细胞），杆菌、球菌的多少，判断阴道清洁度。
8．2检查清洁度的同时，高倍镜观察有无阴道毛滴虫。并查找线索细胞。
8．3 于阴道分泌物涂片上加1滴2.5mol/LKOH，闻一闻是否有鱼腥气味，混匀后加盖玻片，先用低倍镜观察，若发现有菌丝样物，再换高倍镜检查有无真菌。
9质量控制
9．1 要把好标本的采集送检关，按时按要求送检。如果取材不当，不及时送检，阳性结果可变成阴性结果。阴道分泌物应取自阴道后穹窿，采集后也要防止外来污染，及时送检，否则阴道滴虫将死去，淋病奈瑟双球菌会自溶，这些均可能影响阳性检出率。
9．2 要熟悉所做检查标本的各种正常成分及其数量变化，注意湿片中的异常，如红细胞，成堆的白细胞，真菌和阴道滴虫；熟悉所检病原体的形态特征，才能作出准确可靠的报告。
9．3注意治疗药物的影响。在取材检验前应停用对结果有干扰的一切药物，如抗生素和一切外用药。取阴道分泌物时应停外用药2～3d，24h内无性交，以提高阳性检出率。
9．4 涂片应厚薄适宜。
9．5 统一操作方法和报告方式，严格控制各种影响因素。如所用玻璃器材应干净；涂片做到取材统一或定量，检验及时，观察标准一致。掌握好方法学的各个环节，湿片检验应以高倍视野报告。并应加强与临床科室联系，注意复查。
10 检验结果的判断与分析
10．1 正常白带为乳白色、非均质性、粘稠、絮状、无臭味的分泌物，当女性生殖道发生病变时，白带也发生异常变化，常可以有如下改变：
①脓性白带（Leucorrhea with Pus）：黄色、黄绿色、有臭味，多为滴虫或化脓性细菌感染引起，泡沫状脓性白带常见于滴虫性阴道炎，其他脓性白带见于慢性阴道炎、阴道异物、子宫内膜炎等。
②血性白带（Leucorrhea with Blood）：白带内混有血液，量不定，有特殊臭味，可见于恶性肿瘤，如宫颈癌、宫体癌、子宫粘膜下肌瘤和宫内节育环等。
③豆腐渣样白带（Leucorrhea with Residue）：呈豆腐渣样或凝乳状小块，多见于念珠菌性阴道炎，并有外阴瘙痒。
④无色透明样白带（Colorless and Limpid Leucorrhea）：可见于应用雌激素药物和卵巢颗粒细胞瘤。
10．2 阴道清洁度结果判断见下表
清洁度 杆菌 球菌 上皮细胞 白细胞或脓细胞
Ⅰ　　　　4＋ －　　　　　4＋　　　　　　　0～5/HP
Ⅱ 2＋ 　－　　　　　2＋ 5～15/HP
Ⅲ 　－　　　2＋　　　　　－ 15～30/HP
Ⅳ　　　　－　　　4＋　　　　　－ >30/HP

10．3 滴虫检验：通常与清洁度过同时进行检验，阴道毛滴虫（trichomonas vaginalis，TV）为寄生于阴道的致病性原虫。镜下观察虫体运动活泼，鞭毛快速摆动，虫体呈梨形或椭圆形，无色透明，虫体比白细胞大2～3倍。在虫体前1/3处有一长圆形的细胞核，核的前端有4根鞭毛和1根后鞭毛，有1根细长的轴柱由前向后贯穿虫体并伸出体外。如发现滴虫，即可报告：滴虫阳性。
10．4真菌检查：阴道真菌亦称假丝酵母菌，种类繁多，但使人类致病者85％为白色念珠菌，是真菌性阴道炎的病原体，炎症较顽固，分泌物常呈“豆渣样”。检测方法同阴道滴虫检验。必要时于涂片上加一滴2.5ml/lKOH溶液，混匀并加盖玻片，先以低倍镜检查，发现菌丝样物，再转高倍镜检查，或直接用高倍镜检查。高倍镜下检见单个或成群卵圆形、无色透明的孢子，常为牙生或多个连成链状者，即可报告“发现真菌”。
10．5阴道菌群与线索细胞检验
细菌性阴道炎（bacterial vaginosis，BV），过去称为非特异性阴道炎，加特纳（gardnerlla）菌阴道炎嗜血杆菌阴道炎等。1984年国际会议定名为细菌性阴道炎。检查时将阴道分泌物与等渗盐水等量混合，制成厚薄适宜的涂片，加盖片于高倍下观察有无线索细胞。 线索细胞又称克鲁细胞（clue cells），乃是阴道鳞壮上皮细胞的胞质内寄生了大量加特纳菌及其他短小杆菌，上皮细胞互相粘连成团，细胞边缘不齐似锯齿壮，表面粗糙，有许多大小不等的颗粒或斑点，似撒有一层胡椒粉，核模糊不清或碎解，有时细胞呈溶解样。
细性阴道炎诊断标准：①　阴道分泌物稀薄均匀；② 分泌物的PH值（用PH试纸试之）>4.5；③　胺试验呈阳性（即向分泌物中滴加2.5mol/LKOH溶液时出现鱼腥气味）；④ 湿片检出线索细胞，Gram染色见特定菌群分布，凡检见线索细胞再加上上述任意两条，诊断即可成立。线索细胞是诊断的必要标准之一。
11 参考范围
外观为乳白色、非均质性、粘稠、絮状、无臭味的分泌物，清洁度Ⅰ～Ⅱ度，无致病菌和特殊细胞。滴虫、霉菌为阴性。
12 临床意义
12．1 阴道清洁度：⑴ 正常女性生殖系统的组织解剖学和生化特点，能防御外界病原微生物侵袭：从新生儿期到青春期，双侧大小阴唇合拢严密，处女膜完整，阴道前后壁贴接，宫腔闭合；在青春期，由于雌激素等作用，阴道上皮细胞（多含有不等程度的糖原）发生周期性变化，脱落后的细胞释出糖原，借阴道杆菌的作用，将糖原转化为乳酸，后者使阴道PH保持4～4.5之间，此种环境唯有阴道杆菌能生存。正常健康妇女，阴道本身有自净作用，阴道涂片见阴道杆菌和鳞状上皮细胞较多，而白细胞和脓细胞较少、球菌则更罕见；幼女及绝经期妇女，因缺乏雌激素作用，阴道内无阴道杆菌生存，PH可达7，易受病菌感染。
⑵病理情况，清洁度Ⅲ～Ⅳ为异常，主要见于各种阴道炎。如细菌性、霉菌性、滴虫性阴道炎，并同时可发现有关病原体；单纯清洁度改变常见于非特异性阴道炎，包括化脓性感染性阴道炎、嗜血杆菌性阴道炎、老年性或婴幼儿的阴道炎。
阴道清洁度差，还见于：输卵管或子宫腔炎症、异物、赘生物、宫颈内管及宫颈的炎症或赘生物，阴道本身的创伤（如流产、产后因产道创伤所致）。此外，正常女性在排卵前期清洁度好，在行经期和绝经期，清洁度差。
非特异性阴道炎，常见链球菌、葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌等；特异性阴道炎：主要有滴虫性、霉菌性、阿米巴性及加特纳菌等。
依据清洁度的高低可以估计：如有病原体侵袭，是否容易发生感染；如在阴道手术前发现为第三或第四清洁度时，应先治疗炎症，然后手术；当阴道杆菌少时，表示阴道的酸碱度高，其抗病力降低，易引起感染。
12．2阴道分泌物霉菌检查：
⑴阴道霉菌多为白色念珠菌，诊断以找到霉菌为依据。白色念珠菌平时可寄生在阴道内，当阴道内糖原增多，酸度上升时，可迅速繁殖。其形态，在生长受抑制环境中，以短杆状存在，而在有利于繁殖的环境中，则变成有丝的霉菌；在这两种形态之间，还有其他形态，故作显微镜检查时，应慎重。
⑵阴道白色念珠菌感染，常见于：糖尿病患者、孕妇、大量使用广谱抗生素或肾上腺皮质激素造成阴道菌群紊乱者。白色念珠菌的寄生率：非孕妇16％，孕妇50％；发病率：非孕妇1％～2％，孕妇5％～10％，糖尿病患者5.3％。长期使用含葡萄糖溶液维持营养的患者也易罹患。此外，维生素B缺乏，免疫机制减弱或使用免疫抑制剂者也可发生阴道白念珠菌感染。
12．3 阴道菌群和线索细胞：
⑴生理条件下，阴道的PH为酸性（4～4.5），只有阴道杆菌能存活，而其他球、杆菌均不能生存。在显微镜油镜下，可见阴道杆菌6～30个，而加特纳菌则无或极少。
⑵病理情况下，细菌性阴道炎时（1984年国际定名为BV如加特纳菌等感染，阴道炎症不明显，白细胞不多。
12．4 阴道毛滴虫：
⑴生理情况下，阴道PH为4～4.5,不适宜阴道毛滴虫生存(其最适PH为5.5～6.0),故不引起女性生殖道滴虫性阴道炎。
⑵ 病理情况下，滴虫可寄生于阴道后穹隆，常引起滴虫性阴道炎，可合并邻近器官的感染，如尿道和尿道旁腺感染。滴虫能利用上皮细胞内糖原作为能源进行直接分裂，主要传播途径是通过衣物和性交。在男性，滴虫可寄生于包皮下、前后尿道、前列腺（最多见，占90％）、精囊内，可长时间持续存在，具感染性，经直接或间接方法传播。阴道毛滴虫感染的发病率，在男性可达2％～15％，女性则达10％～25％。男性常为携带者。滴虫也引起泌尿道症状和不孕症。
13 操作性能
快速简便、特异性强、准确度高。
14 超出范围结果处理
⑴阴道清洁度检查，应配合微生物、寄生虫检查，以明确阴道炎的性质，有利于临床诊断和治疗；还可结合尿液检查，观察泌尿生殖系统有无互相影响。
⑵阴道菌群和线索细胞可作革兰染色油镜下观察，见阴道杆菌每视野只有1～5个或缺如，而其他杂菌增高，即有助于诊断；必要时做细菌培养，并结合阴道清洁度检查，可对细菌性阴道炎作出诊断。
⑶阴道分泌物霉菌检查可作阴分泌物霉菌培养检查，并选用适当培养基以提高阳性检出率。
⑷阴道毛滴虫采用涂片染色，敏感性和阳性检出率高；此外免疫法（胶乳凝集快速试验LAT），简便快速，阳性检出率比培养法高；培养法，使用于轻症、带虫或慢性感染患者，阳性检出率可达98％，但操作繁杂时间长；必要时，可用荧光抗体、DNA探针等检测，以提高敏感性。
15 方法局限性
⑴取材要准确，并及时送检。否则会导致阴道毛滴虫死亡、淋病奈瑟菌自溶。
⑵标本必须新鲜，防止污染（包括药物和润滑剂等）；
⑶标本应注意保温，迅速送检，不能冷藏，以便发现活动状态的滴虫；
⑷湿片检查为阴性时，应再用瑞氏染色或革兰染色，一次阴性检查不能排除诊断。
16 当检验系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施
检查电路及光源，注意是否灯泡烧坏，如灯泡烧坏，则更换灯泡。如一时不能修好，更换同类生物显微镜检验。
17参考文献
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