免疫学练习题7.pdf

免疫细胞的分离与检测免疫细胞的分离与检测 一、选择题一、选择题 （一）单项选择题（A（一）单项选择题（A 型题）型题）1外周血中的单个核细胞主要是指A淋巴细胞B嗜酸性粒细胞C单核细胞淋巴细胞D单核细胞E中性粒细胞2分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为A1.030 B1.035 C1.092 D1.020 E1.0773用 Ficollhypaque 分层液分离 PBMC，分离的 PBMC 层位于试管的A血浆层之上B血浆层之中C血浆层与分层液之间D分层液之中E试管底部4用玻璃纤维或葡聚糖凝胶 SephadexG10 柱分离细胞时，从柱上洗脱下的细胞主要是A粒细胞B淋巴细胞C单核细胞DT 细胞EB 细胞5能与 SRBC 结合形成 E 花环的细胞主要是AT 细胞BB 细胞C单核细胞D粒细胞E血小板6用小鼠抗人 CD3 单克隆抗体检测 T 细胞，其结果代表的是AT 细胞总数BTh 细胞数CTs 细胞数DCD4+细胞数ECD8+细胞数7用尼龙棉柱分离细胞时，不易黏附尼龙棉纤维而被洗脱的细胞是：A粒细胞BB 细胞C单核细胞DT 细胞E血小板8表示淋巴细胞的活力常用A活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比B活细胞浓度C淋巴细胞浓度D活细胞和总细胞的比值ET 细胞和 B 细胞的比例9用腹腔渗出法可从动物的腹腔渗出液中分离出A血小板BB 细胞C单核细胞DT 细胞E巨噬细胞10活细胞经台盼蓝染色后呈A蓝色B棕色C红色D不着色E天青色11荧光标记法计数外周血 B 淋巴细胞，检测的特有的表面标志是ACD19 BCD20 C补体受体DSmIg EFcR12NK 细胞特有的表面抗原是ACD2 BCD16 C无特异的表面抗原DCD23 ECD5613仅能使 T 细胞发生淋巴母细胞转化的因子是APHA BPWM CLPS DConA EEBV14能使 B 细胞和 T 细胞发生淋巴母细胞转化的因子是APHA BPWM CLPS DSPA EEBV15检查体液免疫功能最常用的方法是A血清免疫球蛋白定量测定B溶血空斑试验CB 淋巴细胞计数D淋巴母细胞转化试验ESmIgG 测定16溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能？AT 细胞BB 细胞C中性细胞D吞噬细胞ENK 细胞17测定 T 淋巴细胞功能的体内试验是A锡克试验B狄克试验C结核菌素试验D天然血型抗体滴度E血清 IgG 测定18正常人外周血 T 淋巴细胞转化率为A40%B4050%C6080%D80%E90%19常用检测细胞毒效应的方法是A3HTdR 掺入法B125I释放法C51Cr 释放法D形态学检测法ECD8 检测法20包被有抗 Ig 抗体的亲和板，其吸附的是AT 细胞BB 细胞CNK 细胞DNKT 细胞E吞噬细胞21Ficollhypaque 液分离淋巴细胞是一种A不连续密度梯度离心法B连续密度梯度离心法C亲和层析法D离子交换层析法E自然沉降法22Ficollhypaque 淋巴细胞分离液的主要成分是A聚蔗糖B泛影葡胺C聚乙二醇D聚蔗糖+泛影葡胺E聚蔗糖+聚乙二醇23Percoll 分离液的主要成分是A聚蔗糖B泛影葡胺C聚乙二醇D聚乙烯吡咯烷酮E经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒24检测中性粒细胞杀菌功能的方法是ANBT 还原试验B白细胞计数C溶血空斑试验D淋巴母细胞转化试验E补体介导的细胞毒试验25MTT 比色法检测 IL2 活性，下列哪项是错误的？A需要 IL2 依赖细胞株B增殖细胞具有吸收 MTT 的能力C颜色的深浅代表细胞代谢活性的强弱D可反映 B 细胞的功能E可反映 T 细胞的功能（二）多项选择题（二）多项选择题（X 型题型题）1淋巴细胞分离液要求符合的条件有A对细胞无毒B高渗C不溶于血液D无色E有合适的比重2与 T 细胞计数有关的表面抗原是ACD2 BCD3 CCD4 DCD8 ECD193与 B 细胞计数有关的表面标志是ASmIg BCD19 CCD20 DCD21 ECD24符合淋巴母细胞转化的形态学特征有A细胞体积变小B核仁明显、核染质疏松C可见有丝分裂D胞浆极少，呈天青色E胞内可见空泡5用酶联免疫斑点试验检测 B 细胞功能的优点有A稳定、特异B可检测抗体分泌细胞C可检测抗体的分泌量D可同时进行 B 细胞计数E可同时检测不同抗原诱导的不同抗体的分泌6细胞免疫功能测定包括以下哪些？AT 细胞计数BB 细胞计数CT 细胞功能测定DTc 细胞效应测定E细胞因子测定7检测淋巴细胞亚群常用的方法有A免疫荧光法B流式细胞仪测定C酶免疫组化法D放射免疫法E免疫金染色法8细胞免疫功能体内试验方法有A细胞毒试验B混合淋巴细胞反应C皮肤试验D淋巴细胞增殖试验E接触性过敏试验9T 细胞增殖试验常用的检测方法有A流式细胞仪法B形态学方法C51Cr 释放法DMTT 检测法E3HTdR 掺入法10检测吞噬细胞功能的方法有A吞噬试验B杀菌试验CNBT 还原试验D化学发光测定法E趋化功能测定法 11淋巴细胞亚群的分离方法有 AE 花环分离法 B尼龙棉柱分离法 C亲和板结合分离法 D免疫磁珠分离法 E超速离心分离法 12.T 细胞数量检测包括 A.T 细胞增殖试验 B.间接荧光免疫法 C.酶免疫组织化学法 D.微量细胞毒试验 E.花环技术 13.检测 T 细胞数量的花环试验有 A.酵毌菌花环试验 B.补体 C3b 花环试验 C.E 花环试验 D.葡萄球菌花环法 E.抗体致敏细胞花环法 14.B 细胞表面具有 A.mIg B.CD 抗原 C.Fc 受体 D.补体受体 E.EB 病毒受体 15.B 细胞数量检测的方法包括 A.mIg 的检测法 B.CD 抗原检测法 C.Fc 受体检测法 D.补体受体检测法 E.小鼠红细胞受体检测法 16.B 淋巴细胞功能的测定方法有 A.B 细胞增殖试验 B.溶血空斑试验 C.酶联免疫斑点法 D.体内测定法 E.形态学检查法 17.中性粒细胞吞噬和杀菌功能的测定方法 A.形态学检查法 B.显微镜检查法 C.溶菌法 D.NBT 还原试验 E.化学发光测定法 18.巨噬细胞功能的检测方法包括 A.炭粒廓清试验 B.吞噬功能检测 C.巨噬细胞溶酶体酶测定 D.细胞毒作用测定 E.巨噬细胞促凝血活性测定 二、填空题二、填空题1PBMC 包括 和。2在反相溶血空斑试验中，每一个空斑代表一个。3B 细胞表面特异的标志有。4常用的测定淋巴细胞活力的方法是。5淋巴细胞转化情况的判定方法有、和。6淋巴细胞转化试验应用的同位素是，细胞毒试验应用的同位素是。7分离外周血白细胞常用的方法是 和。8去除白细胞悬液中残留红细胞的常用方法有 和。9去除单个核细胞悬液中单核细胞的常用方法有 和。10检测 T 细胞数量的花环技术包括、和；检测 B 细胞数量的花环技 术主要有 和。三、名词解释三、名词解释1外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）2E 花环试验（erythrocyterosettetest）3淋巴母细胞转化试验(lymphoblasttransformationassay)4溶血空斑试验(hemolyticplaqueassay)5四唑氮蓝还原试验(nitroblueterazoliumrecoveryassay，NBT 还原试验)四、问答题四、问答题1简述 T 淋巴细胞转化的试验原理和镜下淋巴细胞转化形态学特征。2简述 Ficollhypaque 分离液分离 PBMC 的原理、步骤和注意事项。3叙述 T 细胞介导的细胞毒试验的原理、意义和方法分类。4测定吞噬细胞功能有哪些常用方法？参考答案与题解 参考答案与题解 一、选择题 一、选择题（一）单项选择题（一）单项选择题（A型题）型题）1.C 2.E3.C4.B5.A 6.A 7.D 8.A 9.E 10.D11.D 12.C 13.A 14.B 15.A 16.B 17.C 18.C 19.C 20.B21.A 22.D 23.E 24.A 25.D（二）多项选择题（二）多项选择题（X 型题型题）1.ACDE 2.ABCD 3.ABCD 4.BCE 5.ABCDE 6.ACDE 7.ABCE8.CE 9.BDE10.ABCDE 11.ABCD 12.BCDE 13.CDE 14.ABCDE 15.ABCDE 16.ABCD 17.BCDE 18.ABCDE 二、填空题二、填空题1.淋巴细胞、单核细胞。2.分泌 Ig 的细胞。3.SmIg。4.台盼蓝染色法。5.形态学方法、3HTdR 掺入法、MTT 检测法。6.3H，51Cr。7.自然沉降法、聚合物加速沉降法。8.无菌蒸馏水低渗裂解法、0.83氯化铵处理法。9.粘附去除法、羰基铁粉吞噬去除法。10.E 花环试验、葡萄球菌花环法、抗体致敏红细胞花环法，EA花环试验、EAC 花环试验。三、名词解释三、名词解释1PBMC：外周血单个核细胞主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验中最常用的细胞群，也是进行T细胞和 B 细胞分离纯化的重要环节。2E花环试验：T细胞表面有特异性绵羊红细胞(SRBC)受体，即E受体。将T细胞与SRBC按一定比 例混匀，置 4至少 2h 或过夜，T 细胞表面的 E 受体能与 SRBC 结合形成以 T 细胞为中心，四周环绕 SRBC的花环样结构，镜检计数可得总花环(Et)形成率，亦即 T 细胞的百分率。3淋巴母细胞转化试验：细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后，细胞出现一系列的增殖反应，主要 表现为胞内蛋白质和核酸合成增加，并发生形态返祖变化，如细胞变大、胞质增多、胞质出现空泡、核染 色质疏松、核仁明显，这种淋巴细胞增殖反应又称淋巴细胞母细胞转化(lymphoblasttransformation)。4溶血空斑试验：该方法用于检测实验动物抗体形成细胞数目。其基本原理是抗体形成细胞分泌的Ig与SRBC上的抗原结合，在补体作用下出现溶血反应。方法是将SRBC与其免疫的小鼠脾细胞、补体及适量 琼脂糖液混合倾注平板，或者将吸附有已知抗原的 SRBC 与待检 B 细胞、补体及适量琼脂糖液混合倾注平 板，温育一定时间，抗体形成细胞释放的抗体会使周围SRBC致敏，并在补体作用下出现肉眼可见的溶血 空斑，每一空斑中央含有一个抗体形成细胞，因此空斑数量即代表抗体形成细胞数。5NBT 还原试验：活化的中性粒细胞与 NBT 一起温育，由于中性粒细胞吞噬杀菌过程中产生超氧阴离子（O2），使被吞进细胞内的NBT由原来呈淡黄色还原成不溶性的蓝黑色颗粒,沉积在细胞浆中，称为 NBT 阳性细胞。光学显微镜下计数 NBT 阳性细胞，其百分率可反映中性粒细胞的杀菌功能。四、问答题四、问答题1 T 淋巴细胞转化试验原理：T 淋巴细胞在受到非特异性有丝分裂原或特异性抗原刺激后能发生增殖反应，细胞代谢旺盛，蛋白质和核酸合成增加；与此同时细胞体积增大，分裂呈母细胞样，此为淋巴细胞转化现 象。因此可借助形态学方法观测淋巴细胞形态变化情况，3H胸腺嘧啶核苷(3HTdR)掺入法测定DNA合成 情况，或 MTT 比色法测定线粒体代谢活性即可判定淋巴细胞转化程度。镜下淋巴细胞形态可以见到以下几种类型。(1)淋巴母细胞 胞体比未转化淋巴细胞大 34 倍，呈圆形或椭圆形，胞浆染色淡蓝，可有伪足、空泡，细胞核增大，核质疏松，呈细网状，可见分裂现象。(2)过渡型淋巴细胞 形态介于淋巴母细胞和正常淋巴细胞之间，体积稍大，多为 1215m，胞浆稍多，淡蓝色，核稍大，核质疏松。注意与大淋巴细胞区别，后者虽然体积较大，但核质致密，胞浆较少，嗜碱 性强。(3)正常淋巴细胞 与未经刺激的淋巴细胞一样，体积小，核质致密，胞浆少，嗜碱性强。2Ficollhypaque分离液分离PBMC的原理：血液单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。人外周血单个核 细胞的密度为 1.0501.077，而粒细胞和红细胞的密度在 1.0801.110。利用密度为 1.0770.001 的Ficollhypaque 分层液，将待分离的细胞悬液小心铺于其上，经离心后单个核细胞悬浮于分层液上层界面，而红细胞与粒细胞沉于管底，据此可将血液中的单个核细胞与其他细胞分离开。Ficollhypaque 分离液分离 PBMC 的步骤：（1）取静脉血，加肝素溶液抗凝，再加入等量 Hanks 液，混匀。（2）取分层液置于离心管中，将稀释血液沿管壁缓缓叠加于分层液上，形成清晰界面。稀释血液与分 层液的容积比例以 2:13:1 为宜。（3）置水平离心机中离心 2000r/min20min。（4）离心后从离心管底部到液面分为五层，依次为红细胞沉淀层、粒细胞层、分层液层、白雾状单 个核细胞层、血浆层(含血小板和破碎细胞)。（5）用滴管直接吸出单个核细胞层，置于另一离心管中。（6）加入 5 倍量以上的 Hanks 液，充分混匀，离心 1000r/min10min。离心后倾弃上清液，再用 Hanks液洗涤 2 次。（7）用含 1020灭活小牛血清的 Hanks 液或培养液配制细胞悬液。计数，并分别计数粒细胞和单 个核细胞数，同时用台盼蓝染色检测细胞活力，最后按实验要求将细胞悬液调整到适当浓度。注意事项：（1）将血液适当稀释，减低血液粘稠度有利于提高单个核细胞的收获率。（2）温度变化可直接影响分层液的密度，即影响细胞的收获率和纯度。故应在室温(1825)下进行 实验，分层液使用前应预温至室温。（3）分层液应直接加入管底，防止浸沾四周管壁。（4）将细胞悬液叠加于分层液上时务必小心，不要扰乱界面以影响分离效果。（5）分离时的转速与时间应根据不同标本作相应调整。离心后若见白雾状细胞层中仍掺杂红细胞，应 提高转速或延长离心时间；若淋巴细胞丢失过多，则应适当降低转速或缩短离心时间。3细胞毒T细胞(CTL)在体外能特异性杀伤带有相同抗原的某些敏感传代瘤细胞株(靶细胞)。将适当的靶 细胞悬液按一定比例与受检淋巴细胞混合，培养数小时后观察靶细胞的破坏情况可判断受检者的 CTL杀伤 能力，进而判断其细胞免疫状态。常用方法有形态学检查法和51Cr 释放法。CTL 杀伤功能测定是体外检测机体细胞免疫功能的一种常用方法。利用靶抗原与淋巴细胞的相互关系 阐明靶细胞的抗原性；用于判断肿瘤患者的预后及免疫治疗效果；观察药物、肿瘤抗原以及其它抗原对 CTL杀伤功能的影响；鉴定淋巴细胞的功能性亚群等。4 吞噬细胞功能测定从趋化、吞噬和杀菌三个方面进行检测。常用的方法：趋化功能测定的有滤膜渗透法、琼脂平板法，吞噬功能测定的有吞噬试验，杀菌功能测定的有 NBT 还原试验、杀菌功能试验、化学发光试 验等方法。(张学宁)