日立L8900氨基酸分析仪培训讲义.pdf

日立氨基酸分析仪培训讲义日立氨基酸分析仪培训讲义天美科技有限公司市场部石欲容石欲容主要内容主要内容一一、氨基酸基础知识氨基酸基础知识二、二、氨基酸分析方法氨基酸分析方法三、三、L-8900氨基酸分析仪L-8900氨基酸分析仪四、四、样品的制备样品的制备五、五、影响氨基酸分析结果的各种因素影响氨基酸分析结果的各种因素六、六、试剂国产化交流试剂国产化交流七、七、应用应用八、八、软件使用软件使用九、九、仪器维护仪器维护一、氨基酸基础知识一、氨基酸基础知识1.1氨基酸的定义氨基酸的定义1.2氨基酸的分类氨基酸的分类1.1氨基酸定义氨基酸定义-结构结构结构中含有羧基和氨基的有机化合物构成蛋白质的基本单位是20种氨基酸血液中有超过40种以上的游离氨基酸谷氨酸会令食品的口味更好亮氨酸、异亮氨酸是运动饮料重要成分结构中含有羧基和氨基的有机化合物构成蛋白质的基本单位是20种氨基酸血液中有超过40种以上的游离氨基酸谷氨酸会令食品的口味更好亮氨酸、异亮氨酸是运动饮料重要成分广泛存在于：广泛存在于：-食品、药品、水产品食品、药品、水产品-饲料饲料-体液（血液、尿样等）体液（血液、尿样等）1.2氨基酸分类氨基酸分类甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、丝氨酸（以上七种又称脂肪族氨基酸）、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸（这三种又称芳香族氨基酸）、蛋氨酸、胱氨酸、半胱氨酸（含硫氨基酸）、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、丝氨酸（以上七种又称脂肪族氨基酸）、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸（这三种又称芳香族氨基酸）、蛋氨酸、胱氨酸、半胱氨酸（含硫氨基酸）、脯氨酸、氨基酸氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸中性氨基酸中性氨基酸碱性氨基酸碱性氨基酸天门冬氨酸、天门冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺天门冬氨酸、天门冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺赖氨酸、羟赖氨酸、组氨酸、精氨酸。赖氨酸、羟赖氨酸、组氨酸、精氨酸。必需氨基酸半必需氨基酸非必需氨基酸必需氨基酸半必需氨基酸非必需氨基酸赖氨酸组氨酸谷氨酸色氨酸精氨酸天门冬氨酸苯丙氨酸甘氨酸丙氨酸亮氨酸胱氨酸丝氨酸异亮氨酸酪氨酸脯氨酸苏氨酸羟脯氨酸蛋氨酸缬氨酸赖氨酸组氨酸谷氨酸色氨酸精氨酸天门冬氨酸苯丙氨酸甘氨酸丙氨酸亮氨酸胱氨酸丝氨酸异亮氨酸酪氨酸脯氨酸苏氨酸羟脯氨酸蛋氨酸缬氨酸二、氨基酸分析方法二、氨基酸分析方法2.1氨基酸分析方法氨基酸分析方法2.2氨基酸分析仪法与氨基酸分析仪法与HPLC法比较法比较2.3氨基酸分析仪法氨基酸分析仪法?基本原理基本原理?流程图流程图?特点特点2.1氨基酸分析方法氨基酸分析方法氨基酸分析氨基酸分析蛋白水解液蛋白水解液生理体液生理体液柱前衍生（反相柱分离）柱前衍生（反相柱分离）柱后衍生（离子交换柱分离）柱后衍生（离子交换柱分离）FMOC，PITC，OPA，AQC，etcOPA柱后衍生（离子交换柱分离）柱后衍生（离子交换柱分离NINOPANIN2.2氨基酸分析仪法氨基酸分析仪法-基本原理基本原理茚三酮与氨基酸一起加热，形成深兰紫色复合物茚三酮与氨基酸一起加热，形成深兰紫色复合物,最大吸收波长为最大吸收波长为570nm茚三酮与羟脯氨酸反应直接生成黄色化合物，吸收波长在茚三酮与羟脯氨酸反应直接生成黄色化合物，吸收波长在440nm离子交换柱离子交换柱树脂：强酸型阳离子交换树脂作用力：吸附、穿透、扩散、离子交换、离子亲和力决定作用：氨基酸与树脂间带有相反电荷之间的引力作用。树脂：强酸型阳离子交换树脂作用力：吸附、穿透、扩散、离子交换、离子亲和力决定作用：氨基酸与树脂间带有相反电荷之间的引力作用。2.2氨基酸分析仪法氨基酸分析仪法-核心部件核心部件2.2氨基酸分析仪法氨基酸分析仪法-洗脱过程洗脱过程1.PH2.2氨基酸都带正电荷，均吸附于阳离子交换树脂上,强度各不相同。2.缓冲液在离子交换柱上流动，氨基酸不断地吸附、解吸附。但由于酸碱性、极性、分子大小差异,吸附强度有差异。3.不同氨基酸与离子交换树脂的亲和力不同：碱性 芳香族 中性 酸性及羟基氨基酸4.提高流动相PH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离子交换柱 上洗脱下来。5.洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基酸。2.2氨基酸分析仪法氨基酸分析仪法-流程图流程图2.2氨基酸分析仪法氨基酸分析仪法-特点特点?国际标准和国际仲裁标准国际标准和国际仲裁标准?仪器自动化水平高，稳定性强仪器自动化水平高，稳定性强 衍生时间、衍生温度等无样品间差异衍生时间、衍生温度等无样品间差异 保留时间和峰面积的重现性高保留时间和峰面积的重现性高?性能优异性能优异 高速，高分辨率，高灵敏度高速，高分辨率，高灵敏度?色谱柱寿命长色谱柱寿命长?单次分析成本低单次分析成本低2.3氨基酸分析仪法与氨基酸分析仪法与HPLC法比较法比较HPLC法 应用较广的衍生剂：法 应用较广的衍生剂：OPA（邻苯二甲醛）（邻苯二甲醛）FMOC（9-芴基甲氧羰酰氯）芴基甲氧羰酰氯）PITC（异硫氰酸酸苯酯）（异硫氰酸酸苯酯）FDNB（二硝基氟苯）（二硝基氟苯）NDA（2，3-萘二醛）萘二醛）DABS-Cl（二甲基氨基偶氮苯磺酰氯）（二甲基氨基偶氮苯磺酰氯）AQC(6-氨基氨基-喹啉基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺羟基琥珀酰亚胺-氨基甲酸酯）氨基甲酸酯）2.3氨基酸分析仪与HPLC法比较2.3氨基酸分析仪与HPLC法比较（一）OPA法（邻苯二甲醛）（一）OPA法（邻苯二甲醛）?全分析需全分析需配其他技术配其他技术，方与带仲氨基团的氨基酸反应，方与带仲氨基团的氨基酸反应?赖氨酸及胱氨酸衍生物荧光较弱，赖氨酸及胱氨酸衍生物荧光较弱，灵敏度低灵敏度低?OPA是快速反应剂，有些氨基酸反应极其OPA是快速反应剂，有些氨基酸反应极其不稳定不稳定（甘氨酸、赖氨酸衍生物的信号衰减很快，CV一般为5左右）（甘氨酸、赖氨酸衍生物的信号衰减很快，CV%一般为5左右）?盐分影响衍生，对带有盐分影响衍生，对带有盐分盐分的饲料氨基酸类样品特别不适合（紫外法基线不好）。的饲料氨基酸类样品特别不适合（紫外法基线不好）。2.3氨基酸分析仪与HPLC法比较氨基酸分析仪与HPLC法比较（二）PITC法（异硫氰酸苯脂）（二）PITC法（异硫氰酸苯脂）?衍生后可生成2个以上的衍生物，峰重叠，衍生后可生成2个以上的衍生物，峰重叠，灵敏度比较低灵敏度比较低?残留衍生剂，残留衍生剂，柱效与柱寿命降低柱效与柱寿命降低很快（做200左右样品）很快（做200左右样品）?变异系数在变异系数在4%左右4%左右，某些氨基酸在24小时内即降解，某些氨基酸在24小时内即降解2.3氨基酸分析仪与HPLC法比较氨基酸分析仪与HPLC法比较AAA（NIN）HPLC蛋白水解液蛋白水解液30min50min生理体液生理体液110min135min分离度分离度95-98%85%检出限检出限3pmol3-50pmol峰面积重现性峰面积重现性CV1.0%CV3.0%操作/维护操作/维护简单复杂三、日立三、日立L-8900氨基酸分析仪氨基酸分析仪3.1发展历史发展历史3.2结构图结构图3.3管路连接图管路连接图3.4技术特点技术特点3.5应用应用3.1日立氨基酸分析仪的历史日立氨基酸分析仪的历史Sold KLAin 1962KLA-5835-50L-8500超过四十年的历史，拥有超过四十年的历史，拥有2200多用户多用户L-8800L-8900Detector/CellColumn Oven（Max.Temp 85N2Automatic Purge(NEW)Reactor(MAX.Temp 140Direct injection Auto Sampler(NEW)Pump1/2Degasser(NEW)Reagent and wash solution bottles（6 Buffers)Leak Sensor(NEW)NIN and Buffer3.2日立L-8900结构图日立L-8900结构图3.3管路连接图管路连接图3.4技术特点（一）-泵技术特点（一）-泵双柱塞串联式输液泵，基于日立专利“高速反馈，实时控制”技术制造，系统中无任何缓冲装置，流速精密度可达双柱塞串联式输液泵，基于日立专利“高速反馈，实时控制”技术制造，系统中无任何缓冲装置，流速精密度可达0.075%RSD！直接进样示意图直接进样示意图3.4技术特点（二）-自动进样器技术特点（二）-自动进样器最新“直接进样”技术自动进样器，标配最新“直接进样”技术自动进样器，标配200样品位，进样重复性达样品位，进样重复性达0.3%RSD，交叉污染低至，交叉污染低至0.01%。日立专利的日立专利的3m颗粒阳离子交换树脂，高灵敏度、高分离度的强有力保证颗粒阳离子交换树脂，高灵敏度、高分离度的强有力保证！色谱柱有色谱柱有3种规格：种规格：-4.660mm，常规分析，常规分析-4.640mm，快速分析，快速分析-4.660mm，高分辨分析色谱柱填料可以重复处理使用，高分辨分析色谱柱填料可以重复处理使用3.4技术特点（三）-3m分离柱技术特点（三）-3m分离柱3.4技术特点（四）-反应柱技术特点（四）-反应柱日立专利的日立专利的4cm反应柱，利用惰性小颗粒增大反应面积，有效避免反应盘管（线圈）带来的“边缘效应”，保证得到尖锐的色谱峰，提高分离效率。反应柱，利用惰性小颗粒增大反应面积，有效避免反应盘管（线圈）带来的“边缘效应”，保证得到尖锐的色谱峰，提高分离效率。3.4技术特点（五）-检测器技术特点（五）-检测器可见分光光度计检测，采用消相差凹面衍射光栅设计，高波长准确度，高灵敏度可见分光光度计检测，采用消相差凹面衍射光栅设计，高波长准确度，高灵敏度参比通道，参比通道，700nm通道通道1，570nm通道通道2，440nm流通池流通池光栅光栅高能量卤素灯高能量卤素灯3.4技术特点（六）-工作站技术特点（六）-工作站功能强大的色谱工作站功能强大的色谱工作站EZChrom Elite for L-8900Gray Backgraund:OFFYellow Backgraund:ONMaintenance buttonsManual control buttons3.4技术特点（七）-其他特点技术特点（七）-其他特点在线脱气与柱塞清洗功能在线脱氨柱，消除氨气干扰漏液传感器，全面安全保护措施在线脱气与柱塞清洗功能在线脱氨柱，消除氨气干扰漏液传感器，全面安全保护措施4种不同种不同pH值的缓冲液依次洗脱样品，不需混合衍生试剂实时混合，无需冷藏自动值的缓冲液依次洗脱样品，不需混合衍生试剂实时混合，无需冷藏自动N2压力调节试剂配方公开压力调节试剂配方公开1.食品食品调料饮料调料饮料(营养营养,健康健康,运动运动)补品补品2.药剂药剂输液剂原材料输液剂原材料3.医学医学氨基酸代谢异常氨基酸代谢异常3.5应用领域应用领域5.动物饲料动物饲料4化妆品化妆品6.酒酒3.5应用领域应用领域四、样品的制备四、样品的制备4.1蛋白质的水解蛋白质的水解?酸水解酸水解?碱水解碱水解4.2生理体液样品的前处理生理体液样品的前处理 氨基酸的测定氨基酸总量的测定游离氨基酸的测定酸提取法酸 水 解 法碱 水 解 法测定游离氨基酸，主要是赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸等 测定色氨酸直接酸解氧化酸解除含硫氨基酸和色氨酸以外的蛋白水解氨基酸含硫氨基酸（胱氨酸、蛋氨酸）四、样品制备四、样品制备直接酸解法直接酸解法试样用试样用6mol/L的盐酸，在抽真空的条件下，的盐酸，在抽真空的条件下，110水解水解2224h优点：优点：HCL本身加热可以蒸发除掉HCL本身加热可以蒸发除掉缺点：缺点：?色氨酸遭破坏，无法测定色氨酸遭破坏，无法测定?含硫氨基酸（胱氨酸、蛋氨酸）被部分氧化，无法准确测定含硫氨基酸（胱氨酸、蛋氨酸）被部分氧化，无法准确测定?与含醛基化合物作用溶液显黒褐色与含醛基化合物作用溶液显黒褐色4.1蛋白质的水解-酸水解法蛋白质的水解-酸水解法氧化酸解法氧化酸解法测定含硫氨基酸，样品先用过甲酸氧化，把在酸水解中不稳定的胱氨酸和蛋氨酸氧化为在酸水解中稳定的半胱磺酸和蛋氨酸砜，再进行酸水解，单独测定试样中的胱氨酸和蛋氨酸。测定含硫氨基酸，样品先用过甲酸氧化，把在酸水解中不稳定的胱氨酸和蛋氨酸氧化为在酸水解中稳定的半胱磺酸和蛋氨酸砜，再进行酸水解，单独测定试样中的胱氨酸和蛋氨酸。4.1蛋白质的水解-酸水解法蛋白质的水解-酸水解法 10.00mL 置0冰水浴中 6 mol/L HCl 2mL预冷过甲酸 置1101烘箱 中水解2224h 60、抽真空 蒸发至干 混匀、过滤或离心 称取含蛋白7.525mg的试样称取含蛋白7.525mg的试样在0下，反应16h，加适量终止剂，静置15min 在液N2 中冷冻，抽真空至7Pa（510-2 mmHg）封管 加终止剂偏重亚硫酸钠加终止剂 冷却、混匀、开管、过滤取适量滤液加酸、1101水解2224h 60、减压浓缩至干加酸转移、封管 1101下水解2224h 加35mL稀释用柠檬酸钠缓冲液适量，使氨基酸浓度达50250nmol/mL 冷却、定容、过滤、取适量滤液，以下蒸干、稀释、上机等同直接酸解法 取上清液进样、测定4.1蛋白质的水解-酸水解法蛋白质的水解-酸水解法氧化水解 直接酸水解 样品名称 胱氨酸 蛋氨酸 胱氨酸 蛋氨酸 0.50 1.41 0.55 1.52 鱼粉 0.49 1.40 0.45 1.49 1.88 0.87 0.96 1.07 活性鱼粉 1.90 0.85 0.98 1.02 1.10 0.49 0.74 0.66 国产鱼粉 1.07 0.48 0.71 0.65 0.33 0.26 0.33 0.30 粉浆蛋白 0.32 0.26 0.36 0.32 0.64 1.50 0.49 1.44 蚕蛹 0.63 1.48 0.48 1.40 0.29 0.21 0.38 0.40 小麦籽实 0.29 0.21 0.30 0.27 0.20 0.34 0.13 0.21 草粉 0.19 0.32 0.13 0.23 0.12 0.13 0.20 0.34 稻草 0.13 0.14 0.28 0.40 0.13 0.14 0.12 0.20 稻草 0.12 0.13 0.14 0.20 氧化水解和直接酸水解含硫氨基酸测定结果比较氧化水解和直接酸水解含硫氨基酸测定结果比较用NaOH(LiOH、Ba(OH)用NaOH(LiOH、Ba(OH)2 2)作为水解剂)作为水解剂优点：优点：?色氨酸不被破坏色氨酸不被破坏?水解液清亮水解液清亮缺点：缺点：?有消旋作用有消旋作用?丝氨酸、苏氨酸、精氨酸、胱氨酸遭不同程度破坏丝氨酸、苏氨酸、精氨酸、胱氨酸遭不同程度破坏?放出氨气和硫化氢放出氨气和硫化氢4.1蛋白质的水解-碱水解法蛋白质的水解-碱水解法4.2生理体液样品的处理生理体液样品的处理除去样品中蛋白质，获得游离氨基酸除去样品中蛋白质，获得游离氨基酸?除蛋白方法：(1)化学法：苦味酸法，三氯醋酸法，磺基水杨酸法，乙醇沉淀法(2)煮沸法：先调至等电点，再煮沸(3)透析法：半透膜使游离氨基酸分离(4)分子筛法除蛋白方法：(1)化学法：苦味酸法，三氯醋酸法，磺基水杨酸法，乙醇沉淀法(2)煮沸法：先调至等电点，再煮沸(3)透析法：半透膜使游离氨基酸分离(4)分子筛法?脱盐脱盐?脱色脱色生理体液生理体液?血浆新鲜血浆血浆新鲜血浆1mL+1mLpH1.5柠檬酸缓冲液柠檬酸缓冲液-冰箱中放置冰箱中放置30min-高速离心（高速离心（18000g/30min 或或78000g/20min）?脑脊液、眼内液新鲜样液脑脊液、眼内液新鲜样液+等体积等体积8%磺基水杨酸（磺基水杨酸（1mL+6mL5%三氯乙酸，或三氯乙酸，或2mL+10倍体积的倍体积的80%乙醇），乙醇），10000rpm离心离心?尿液尿液5mL+4mol/LNaOH-pH11.512-置于盛有浓硫酸的干燥器中置于盛有浓硫酸的干燥器中-减压抽真空约减压抽真空约6h使氨气充分挥发，调使氨气充分挥发，调pH至至2.2,定容，上机定容，上机?酱油、果汁及含植物材料的液体食品样品酱油、果汁及含植物材料的液体食品样品+9倍倍1%磺基水杨酸磺基水杨酸-700010000rpm离心离心4.2生理体液样品的处理-示例生理体液样品的处理-示例4.2生理体液样品的处理-示例生理体液样品的处理-示例固体组织固体组织?动物组织2g+5倍体积的3%磺基水杨酸-高速组织捣碎机中捣碎-10000rpm离心15min-取上清液上机（1g+5mL柠檬酸缓冲液pH2.2-匀浆-1800078000g离心或0.5g+3ml5%三氯乙酸-离心除去蛋白）动物组织2g+5倍体积的3%磺基水杨酸-高速组织捣碎机中捣碎-10000rpm离心15min-取上清液上机（1g+5mL柠檬酸缓冲液pH2.2-匀浆-1800078000g离心或0.5g+3ml5%三氯乙酸-离心除去蛋白）?植物组织新鲜样品5g+7075%乙醇-沸水浴中回流提取20min-过滤-残渣重复提取3次-过滤，合并滤液-沸水浴中蒸去乙醇-用乙醚萃取-水层蒸干-+0.02mol/LHCl植物组织新鲜样品5g+7075%乙醇-沸水浴中回流提取20min-过滤-残渣重复提取3次-过滤，合并滤液-沸水浴中蒸去乙醇-用乙醚萃取-水层蒸干-+0.02mol/LHCl五、影响氨基酸分析的各种因素五、影响氨基酸分析的各种因素5.1 样品前处理样品前处理5.2 缓冲液PH值、钠离子浓度缓冲液PH值、钠离子浓度5.3 柱温柱温5.4 氨氨5.5 氧氧5.6 光源（钨灯）光源（钨灯）?仪器有比较合适的进样量仪器有比较合适的进样量?进样浓度都有一定的范围（坐标的高度进样浓度都有一定的范围（坐标的高度100mv为宜）为宜）?高浓度的样品造成仪器管路堵塞、柱子污染、负荷也较大高浓度的样品造成仪器管路堵塞、柱子污染、负荷也较大5.1 样品前处理样品前处理?样品中氨基酸浓度样品中氨基酸浓度?不同氨基酸及其间的肽链的稳定程度不同不同氨基酸及其间的肽链的稳定程度不同?1101、2224h，对大多数氨基酸是适宜的，但苏氨酸、丝氨酸已有所破坏，而缬氨酸和异亮氨酸则水解不足，严格说应校正，对大多数氨基酸是适宜的，但苏氨酸、丝氨酸已有所破坏，而缬氨酸和异亮氨酸则水解不足，严格说应校正?水解时间水解时间?蒸发去酸温度蒸发去酸温度缓冲液的PH值和钠离子对分离起着重要的作用缓冲液的PH值和钠离子对分离起着重要的作用5.2 缓冲液PH值与钠离子浓度缓冲液PH值与钠离子浓度柱温影响保留时间、柱压、峰形及分离度影响比较大：柱温影响保留时间、柱压、峰形及分离度影响比较大：蛋氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸等蛋氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸等5.3 柱温柱温?现象：现象：碱性氨基酸碱性氨基酸出峰处基线抬高，影响碱性氨基酸分离效果和准确定量出峰处基线抬高，影响碱性氨基酸分离效果和准确定量?主要来源主要来源?离子水、试剂离子水、试剂?随着缓冲液PH值升高，氨逐渐从树脂洗脱下来随着缓冲液PH值升高，氨逐渐从树脂洗脱下来?解决措施：除氨柱（可重复使用但有一定的寿命期限）解决措施：除氨柱（可重复使用但有一定的寿命期限）5.4 氨氨?茚三酮最忌氧，氧化后即变质失效，直接影响出峰面积的大小、直接影响氨基酸分析的结果茚三酮最忌氧，氧化后即变质失效，直接影响出峰面积的大小、直接影响氨基酸分析的结果?注意事项注意事项?缓冲液、反应液、再生液等容器的液面上都充满氮气缓冲液、反应液、再生液等容器的液面上都充满氮气?茚三酮购入后一定要妥善保管，不能在空气中长时间暴露茚三酮购入后一定要妥善保管，不能在空气中长时间暴露?配茚三酮试剂时应注意要通入足够时间的氮气以排除氧配茚三酮试剂时应注意要通入足够时间的氮气以排除氧?不能将配好的R1、R2开盖暴露在空气中不能将配好的R1、R2开盖暴露在空气中?乙二醇甲醚亦要求含过氧化物指标要低（乙二醇甲醚亦要求含过氧化物指标要低（如用KI检验变黄色即不能使用如用KI检验变黄色即不能使用）5.5 氧氧?影响吸收率影响氨基酸浓度影响吸收率影响氨基酸浓度?影响准确度影响准确度?降低灵敏度灯到寿命后该换就得换降低灵敏度灯到寿命后该换就得换（使用期限以灯能量为准）（使用期限以灯能量为准）5.6 光源钨灯）光源（钨灯）六 试剂国产化交流-1六 试剂国产化交流-1缓冲液中每种试剂所起的作用缓冲液中每种试剂所起的作用?主要试剂?柠檬酸三钠、柠檬酸、氯化钠分离分离作用?其他几种成份?苯甲醇防氧化防氧化作用?聚氧乙烯十二烷基醚Birj-35 表面活性剂，起滑润剂滑润剂作用，减少流动相的黏度?硫代双乙醇抗氧化作用，可除去溶液中溶解氧除去溶液中溶解氧?辛酸去泡，溶液中杀菌剂杀菌剂六 试剂国产化交流-2六 试剂国产化交流-2缓冲液缓冲液pH值及离子浓度值及离子浓度?标准：胱氨酸出峰位置和时间标准：胱氨酸出峰位置和时间?胱氨酸出峰在丙氨酸与颉氨酸中间?丙氨酸与胱氨酸之间应有半分钟左右的距离?天门冬、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸5.3分钟-7.5分钟左右出完?甘氨酸控制在10.60分钟左右，保证后面几个中性氨基酸分离?pH值偏酸值偏酸?酸性氨基酸出峰时间推后，?甘，丙，胱，颉等氨基酸出峰时间后移?丙氨酸与胱氨酸峰重合分离不好?亮氨酸与酪氨酸也没完全分开pH值恰当值恰当pH值偏酸值偏酸?pH值偏碱值偏碱?酸性氨基酸向前移动，天门冬氨酸可提前到4.6分钟左右?苏、丝、谷氨酸三个组份不能完全分离?甘、丙、胱形成溶连峰?颉、蛋氨酸峰非常不好看?酪、苯丙氨酸不能完全分离?离子浓度离子浓度?离子浓度小，样品分离不好、峰形加宽、出峰推迟?离子浓度高，出峰快，影响分离pH值偏碱值偏碱根据进口缓冲液配方选取主要成分配置标样分离图根据进口缓冲液配方选取主要成分配置标样分离图根据进口缓冲液要求对配置缓冲液的PH进行调整标样分离图根据进口缓冲液要求对配置缓冲液的PH进行调整标样分离图调节离子浓度分析程序后标样图调节离子浓度分析程序后标样图六 试剂国产化交流-3六 试剂国产化交流-3试剂要求试剂要求?纯化水纯化水?试剂标准：试剂标准：胱氨酸处是否有较大的小尖峰出现?试剂不好试剂不好?胱氨酸出峰处有明显的小尖峰出现?胱氨酸与颉氨酸分不到基线?20分钟后有明显的基线抬高现象?精氨酸出峰后，基线上翘水中氨的存在直接影响峰形基线的好坏及分离效果，最好使用带有除氨装置的制水设备?乙二醇甲醚：乙二醇甲醚：过氧化物含量低?过氧化物首先与茚三酮进行氧化反应，这样会降低反应液的显色效果?茚三酮茚三酮?级别高一些?颜色浅黄色粉末状?避光保存?配制溶液颜色为淡淡的浅黄色（上海产品可供参考）?缓冲液试剂缓冲液试剂柠檬酸三钠：分析纯以上柠檬酸：优级纯氯化钠：基准试剂无水乙醇：色谱纯氢氧化钠：优级纯硫代双乙醇：进口试剂（或不加）苯甲醇：色谱试剂辛酸：分析纯以上Birj-35：分析纯以上?反应液试剂反应液试剂乙二醇甲醚：分析纯以上（过氧化物指标要小）茚三酮：分析纯以上（浅黄粉末状）醋酸钠：分析纯以上冰醋酸：分析纯以上硼氢化钠：分析纯以上，必要时可使用进口试剂六 试剂国产化交流-4六 试剂国产化交流-4试剂级别建议试剂级别建议?天津光复精细化工研究所天津光复精细化工研究所、国药集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司、天津化学试剂研究所天津化学试剂研究所、天津化学试剂一厂天津化学试剂一厂、北京化工厂北京化工厂、北京化学试剂公司北京化学试剂公司等多家公司的试剂，进行比较试验?天津、上海几家试剂所配置的缓冲液天津、上海几家试剂所配置的缓冲液?在胱氨酸出峰有明显小尖峰?胱氨酸与缬氨酸分不到基线?20分钟后有明显的基线抬高?精氨酸出峰后基线上翘?北京化工厂、北京试剂公司所产试剂为其组成，有效的解决了上述问题北京化工厂、北京试剂公司所产试剂为其组成，有效的解决了上述问题六 试剂国产化交流-5六 试剂国产化交流-5试剂公司推荐试剂公司推荐根据实际情况，调节缓冲液配制及分析程序，以达到最佳分离效果根据实际情况，调节缓冲液配制及分析程序，以达到最佳分离效果青岛黄海所国产化试剂青岛黄海所国产化试剂福州农副产品检测中心国产化试剂福州农副产品检测中心国产化试剂浙江丝绸科学研究院国产化试剂浙江丝绸科学研究院国产化试剂哈尔滨工业大学国产化试剂（含硫氨基酸）哈尔滨工业大学国产化试剂（含硫氨基酸）两种缓冲系统样品保留时间、峰面积比较两种缓冲系统样品保留时间、峰面积比较两种缓冲系统样品保留时间、峰面积比较两种缓冲系统样品保留时间、峰面积比较日间进样三次峰面积、保留时间比较日间进样三次峰面积、保留时间比较周间不同日进样三次峰面积、保留时间比较周间不同日进样三次峰面积、保留时间比较七、应用七、应用7.1医学上的应用医学上的应用7.2饲料中的应用饲料中的应用7.3农业、食品、饮料及其它农业、食品、饮料及其它7.1医学上的应用医学上的应用?氨基酸代谢与肝脑病氨基酸代谢与肝脑病苏州大学医学院苏州大学医学院?氨基酸代谢异常角度阐述了氨基酸与肝性脑病的关系氨基酸代谢异常角度阐述了氨基酸与肝性脑病的关系?脑疾病与游离氨基酸的研究脑疾病与游离氨基酸的研究?肝性脑病与氨基酸的关系肝性脑病与氨基酸的关系?乙型脑炎与氨基酸的关系乙型脑炎与氨基酸的关系?儿童智力发育不全与氨基酸的关系儿童智力发育不全与氨基酸的关系?脑瘫与氨基酸的关系脑瘫与氨基酸的关系脑衰老与氨基酸的关系等方面都有相当水平的可喜成果脑衰老与氨基酸的关系等方面都有相当水平的可喜成果?低智儿童与正常儿童中氨基酸的比较研究低智儿童与正常儿童中氨基酸的比较研究山东大学生命科学院山东大学生命科学院?阐述了血清中11种游离氨基酸的降低可直接影响人体组织的正常发育、生长，从而导致儿童智力发育不全阐述了血清中11种游离氨基酸的降低可直接影响人体组织的正常发育、生长，从而导致儿童智力发育不全?条件性必需氨基酸在创伤愈合中的作用条件性必需氨基酸在创伤愈合中的作用军事医科院军事医科院?叙述了条件性必需氨基酸在创伤愈合中的关系叙述了条件性必需氨基酸在创伤愈合中的关系?人胃癌组织及胃正常组织氨基酸的差异研究人胃癌组织及胃正常组织氨基酸的差异研究北京军区总医院北京军区总医院?通过对胃癌组织及自身胃正常组织氨基酸的测定，探讨了肿瘤组织氨基酸代谢的变化规律通过对胃癌组织及自身胃正常组织氨基酸的测定，探讨了肿瘤组织氨基酸代谢的变化规律?多家医学单位利用氨基酸分析技术多家医学单位利用氨基酸分析技术二军大、天津总医院二军大、天津总医院?人体血高半胱氨酸含量的升高可导致动脉硬化及血栓的形成,为医疗诊断提供可靠依据人体血高半胱氨酸含量的升高可导致动脉硬化及血栓的形成,为医疗诊断提供可靠依据分离柱分离柱：2622#4.6 x 60mm id除氨柱除氨柱：2650#4.6 x 40mm id老鼠血清老鼠血清分离柱分离柱：2622#4.6 x 60mm id除氨柱除氨柱：2650#4.6 x 40mm id人血清人血清健康者的血清和尿样中游离氨基酸的分析健康者的血清和尿样中游离氨基酸的分析分离柱分离柱：2622#4.6 x 60mm id除氨柱除氨柱：2650#4.6 x 40mm id?质量控制质量控制?测定饲料原料和产品中氨基酸含量，达到保证质量?真伪鉴别真伪鉴别?进口鱼粉含粗蛋白60以上，国产鱼粉也在50%以上?鱼粉赖氨酸、蛋氨酸含量高（进口鱼粉赖氨酸4.5%以上、蛋氨酸1.5%以上，国产鱼粉赖氨酸4%以上、蛋氨酸1%以上）?氨基酸分析结果很容易区别鱼粉真伪7.2饲料中的应用饲料中的应用饲料中水解蛋白的分析饲料中水解蛋白的分析分离柱分离柱：2622#4.6 x 60mm id除氨柱除氨柱：2650#4.6 x 40mm id?在农业农业上的应用很广泛，各种农作物的果实都含有一定数量的蛋白质，对玉米、大豆、小麦等农作物的氨基酸含量进行检测司空见惯?强化食品食品中氨基酸检测分析?果汁、饮料、茶叶等进行真伪鉴别真伪鉴别?检验酱油、醋中氨基酸成分,定级定级7.3农业、食品、饮料及其它农业、食品、饮料及其它谷物中水解蛋白的分析谷物中水解蛋白的分析分离柱分离柱：2622#4.6 x 60mm id除氨柱除氨柱：2650#4.6 x 40mm id酱油中水解蛋白的分析酱油中水解蛋白的分析分离柱分离柱：2622#4.6 x 60mm id除氨柱除氨柱：2650#4.6 x 40mm id绿茶树叶中氨基酸的分析绿茶树叶中氨基酸的分析西红柿酱中氨基酸的分析西红柿酱中氨基酸的分析果汁中氨基酸的分析果汁中氨基酸的分析苹果醋中氨基酸的分析苹果醋中氨基酸的分析谢谢大家！谢谢大家！