磷脂酰胆碱反应体系的建立.pdf

1 21 2 西南农业学报 S o u t h we s t Ch i n a J o u r n a l o f Ag r i c u l t u r a l S c i e n c e s 2 0 1 3年 2 6卷 3期 V0 I 2 6 N o 3 文章编号：1 0 0 1 4 8 2 9(2 0 1 3)0 31 2 1 2 0 6 磷脂酰胆碱反应体 系的建立 卞 欢，王道营，张牧晗，徐为民，刘 芳，诸永志，蒋 宁，曹建民(江苏省农业科 学院农产品加工研究所，江苏 南京2 1 0 0 1 4)摘要：采用 2 一 油酸-1 一 棕榈酸磷 脂酰胆碱 为表 面活性 剂、低级醇为助表面活性剂异辛烷为油相、蒸馏水为水相，以伪三元相 图微 乳面积大小为指标，考察磷脂酰胆碱微乳体系。结果表 明，磷i l l 正丙醇 异辛烷 水 W O微乳体 系、磷脂 正丁醇 异辛烷 水 W O 微乳体系以及磷脂 正丙醇 异辛烷 水 o w微乳体系均为稳定的磷脂酰胆碱微乳体系。3种微乳体系和脂质体分别与鸭肉肌内 磷脂酶振荡反应 1 0 h 后，采用T L C联用Q u a n t i ty O n e 软件鉴定反应产物中的脂肪酸，以脂肪酸斑点分析的T r a c e Q t y 值为指标，最 终确定磷脂酰胆碱反应体系。因此，以脂质体作为反应体系所产生的脂肪酸最多，即脂质体为磷脂酰胆碱最佳反应体系。为进一 步研究磷脂酰胆碱的酶解机制和磷脂酶的分离纯化提供技术方法。关键词：磷脂酰胆碱；磷脂酶；微乳；脂质体 中图分类号：S 8 5 8 3 文献标识码：A Es t a b l i s h i n g Re a c t i o n S y s t e m o f P h o s p h a t i d y l c h o l i n e B1 AN Hu a n，WANG Da o y i n g，ZHANG Mu h a n，XU Wc i rai n，LI U F a n g，ZHU Yo n g z h i，J I ANG Ni n g，C AO J i a n mi n (I n s t i tu t e o f A c u l tur a l P r o d u c t s P r o c e s s i n g，J i a n g s u A c a d e my o f A c u l t u r a l S c i e n c e s，J i a n g s u N a n j i n g 2 1 0 0 1 4，C h i n a)Ab s t r a c t：1 1 1 e d e s i r e d mi c r o e mu l s i o n s w e r e p r e p a r e d b y mi x i n g i s o o c t a n e a s o r g a n i c p h a s e。d i s t i l l e d wa t e r a S wa t e r p h a s e，2-o l e o y l-1 一 p almi t o y l s n g l y c e r o-3一 p h o s p h o c h o l i n e as s o l v e n t，l o w c a r b o n a l c o h o l s as C O s o l v e n t s Th e s i z e o f mi c r o e mu l s i o n r e g i o n of t h e p s e u d o-t e r n a r y p h a s e d i a g r a m Was u s e d a s t h e s ta b l e i n d e x o f mi c r o e mu l s i o n t o s t u d yp h o s ph a t i d y l c h o l i n e mi c r o e mu l s i o n s y s t e ms T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t p h o s p h a t i d y l e h o l i n e n pr o p a n o l i s o ectan e W O mi e r o e mu l s i o n，p h o s p h a t i d y l c h o l i n e n b u t a n o l i s o o c t a n e W O mi e r o e mu l s i o n，p h o s p h a t i d y l c h o l i n e n p r o p a n o l i s o o c t a n e o W mi c r ecmu l s i o n we re a l l s t a b l e s y s t e ms Th r e e mic r o e mu l s i o n s y s t e ms a n d l i p o some we re i n t o u c h wi t h t h e i n t r a mu s c u l a r p h o s p h o l i p a s e e x tr a c t e d f r o m d u c k mu 3 1 e r e s p e c t i v e l ya n d t h e r e a c ti o n t i me w a s t e n h o u r s F a R y a c i d s c o n t e n t s a s t h e ma i n h y d r o l y s a t e s w e r e i d e n t i fi ed w i t h T r a c t Qty b y T L C a n d Q u ant i t y O n e t o e s ti ma t e t h e o p ti ma l p h o s p h a t i d y l c h o l i n e r e a c ti o n s y s t e m I t s h o w ed t h a t t h e g e n e r a t i o n o f f a t t 7 a c i d s WaS mo l f r e q u e n t l y i n l i p o some 8 s r e a c t i o n s y s t e m F i n a l l y1 i p o some WaS d e t e r mi n ed a s p h o s p h a t i d y l c h o l i n e r e a c t i o n s y s t e m t o s e t u p a t e c h n i c a l me t h o d f o r p u r if i c a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a ti o n o f p h o s p h o l ip a s e an d t h e mech a ni s m o f p h o s p h o l ipi d h y d r o l y-s i s Ke y wo r d s：P bos p h a t i d 3 r l c h o l i n e；P h o s p h o l i p a s e；Mie ree mu l s io n；L i p o some 水解鸭肉肌内磷脂的内源酶主要有磷脂酶和脂 肪酶，其中磷脂酶可分为磷脂酶 A。、磷脂酶 A：、磷脂 酶 c和磷脂酶 D；脂肪酶按最适 p H可分为酸性脂 肪酶、中性脂肪酶和碱性脂肪酶。由于磷脂酶和脂 肪酶催化作用发生在油水界面上，是典型的界面酶，收稿 日期：2 0 1 2一l 1 1 2 基金项目：国家 自 然科学基金资助项目(3 1 2 7 1 8 9 1)；江苏省 自 然科学基金(B K 2 0 1 2 7 8 5)；江苏省农业 自主创新资金(c x(1 1)4 0 2 8)作者简介：卞欢(1 9 8 7 一)，男，江苏盐城人，硕士，从事肉品加 工 与质量 控制 研究，E ma i l：x u e h a n j a a s y a h o o c o m c n，为通 讯联系人。所以需要建立一个能在体系中建立良 好反应界面的 磷脂酰胆碱反应体系。磷脂酰胆碱反应体系主要可 分为缓冲水溶液、有机溶液、微乳和囊泡。目前 微乳体系和囊泡体 系的研究很多，由于 P C的两亲 性，所以能形成微乳和囊泡体系，进而增加 P C和酶 的接触面积，使反应速率提升。微乳是由美国化学 工程师 R o d a w a i d 在 1 9 2 8 年研制皮革光亮剂时意外 发现的，随后在 1 9 4 3年 H o a r 和 S c h u l ma n证 实了这 种“透明乳状液”是大小为 88 0 n m 的球形或 圆柱 形颗粒构成 的分 散体系，直到 1 9 5 8年 S c h u l m a n 才给它定名 为微 乳(Mi c r o e mu l s i o n)：即由油相、水 相、表面 活性剂(S u r f a c t a n t)和助表 面活 性剂(C o 3 期 卞欢等：g t 脂酰胆碱反应体系的建立 s u r f a c t a n t)4种 物质组成 的，透明或半透 明、各 向同 性的热力学稳定体 系 J。M A P Mo r g d a o等-5 运 用该体 系研 究 P L A 对 卵磷 脂催 化水 解 作用，N G a r t i l 等 在双连续 相 中研究 P L A 对卵磷脂 的催 化作用。囊泡是由两个表面活性剂疏水基团定向结 合成封闭单分子双层所构成 的外壳，和壳 内包藏 的 微水相构成。如果这些双亲分子是天然表面活性剂 卵磷脂，则形成 的结构就称为脂质体；若由合成表面 活性剂组成，则称之为囊泡 。K u p f e r b e r g等 运 用单层囊泡体系研究 P L A 催化鸡蛋卵磷脂的反应 动力 学，L a t h r o p等 采 用 小 单 层 囊 泡 体 系 研 究 C a“、Mg n对 P L A 2 水 解磷脂 的作用。郑碧 云 在 卵磷脂 十六烷基三甲基溴化胺(C T A B)庚烷 水 形成的泡囊水溶液中，通过在线检测产物与酚红的 作用物在5 5 9 n m处的吸光度变化，研究了磷脂酶 P L A 催化水解蛋黄卵磷脂 的行为。本试验以磷脂酰胆碱为表面活性剂、低级醇为 助表面活性剂、异辛烷为油相、蒸馏水为水相建立磷 脂酰胆碱微乳体系，采用 O D 伽值和伪三元相图的微 乳面积为指标，建立稳定的微乳体系；并以脂肪酸斑 点分析的 T r a c e Q t y 值为指标，比较建立好的微乳磷 脂酰胆碱微乳体系与脂质体，最终筛选出鸭肉肌内 磷脂酶解的最佳反应体系。1 材料与方法 1 1材料 鸭肉原料品种为麻鸭(2 5 k g 左右)，购于南京 孝陵卫农贸市场。1 2 试验方法 1 2 1 滴定方法的选择加水法：将卵磷脂与助表 面活性剂按照=1：3 混合，用磁力搅拌器充分混 合均匀得混合表面活性剂，再与油分别按照质量比 为 9：1、8：2、7：3、6：4、5：5、4：6、3：7、2：8、1：9混合均 匀，在旋涡振荡下逐滴加人水，观察体系由清至浊的 现象，记录临界点时的各组分百分比，并将相应的点 绘制在相图上n。加油法与之相反。1 2 2 助表面活性剂的选择按照 1 2 1所述 的 方法，分别将乙醇、正丙醇、正丁醇、正戊醇和正 己醇 作为助表面活性剂制备微乳体系，观察体系 由清至 浊的现象，记录临界点时的各组分百分比，并将相应 的点绘制在相图上。I 2 3 微乳类型的鉴定取相同体积的水溶性亚 甲基蓝和油溶性苏丹红染色液，同时滴入微乳体系 中，通过 比较 染色 液 的扩 散 速度来 判断 样 品的类 型 1 2 。1 2 4 稳定性研 究离心处理：在 1 0 0 0 0 r mi n转 速下离心 2 0 rai n，观察所配制的微乳体系是否分层，同时 比较该微乳体系离心前后的吸光度。冷藏冷冻 处理：在 2 5和 4 o C下分别放置 7和 3 0 d，观察所配 制的微乳体系是否分层，同时比较该微乳体系在不 同时间内的吸光度。1 2 5 微乳体 系最佳配方的确定正丙醇 W O微 乳体系：称取卵磷脂 0 0 5 g，用 0 9 mL正丙醇充分 溶解，再加 1 0 5 m L异辛烷混匀，最后缓慢滴加 0 0 5 m L双蒸水振荡均匀即可。正丁醇 W O微乳体 系：称取卵磷脂0 0 5 g，用0 9 m L正丁醇充分溶解，再加 1 0 5 m L异辛烷混匀，最后缓慢滴 加 0 0 5 m L 双蒸水振荡 均匀即可。正丙醇 O W 微 乳体系：称 取卵磷脂 0 0 5 g，用 0 9 5 m L正丁醇充分溶解，再加 1 m L双蒸水混匀，最后缓慢滴加 0 0 5 m L异辛烷振 荡均匀即可。三种微乳体系的最终浓度均为 2 5 m g mL。1 2 6 鸭 肉肌 内磷脂水解酶的提取参 考汪家政 的方法 o 1 2 7 脂质体的配制 参照刘小龙等 的方 法。1 2 8 鸭肉 肌 内磷脂反应体 系的确定分别取磷 脂 正丙醇 异辛烷 水 W O微 乳体 系、磷 脂 正丁 醇 异辛烷 水 W O微乳体系、磷脂 正丙醇 异辛 烷 水 O W 微乳体系、脂质体各 2 0 0 I x l，加入 2 0 0 Ix l 鸭肉肌 内粗酶液或 1 0 l 蜂毒 P L A 2，在 2 5下振荡 培养 1 0 h，再加入 6 0 0 l 氯仿终止反应，离心 4 0 0 0 r m i n、1 0 ra i n，吸取下层液体用于 T L C鉴定。T L C 展开剂为氯仿：甲醇：水=6 5：2 5：4，展开后经溴百 里香酚蓝染色常温风干形成斑点，拍照。2 结果与分析 2 1 滴定方法的选择 滴水法易于形成 W O微乳体系，而滴油法易 于形成 O W微乳体系。这主要是 由于采用滴水法 0 0 0 3 。0 6 0 9 图 1 异辛烷 P C+正丙酉 莹 水 O W 微乳体系的伪三元 相 图 F i g 1 P s e u d o t e r n a r y p h a s e d i a g r a ms o f i s o o c ta n e P C+n=p r o-p a n o l w a t e r Q W mi c r o e mu l s i o n s y s t e m 西南农业学报 2 6卷 达到滴定终点即溶液浑浊时，油相含量较大，易于形 成 W O微乳体系，滴油法则正好相反。但当助表 面活性剂为正丙醇时，在磷脂和正丙醇含量较大(9 ：1、8：2)时，由于正丙醇能与水和异辛烷任何 比例 互溶，所以出现浑浊时滴水法所形成的溶液已为 O w微乳体系。同样滴油法在磷脂 和正丙醇含量较 大(9：1、8：2)的情况下，最终形成 的溶液则为 W O 微乳体系。2 2 助表面活性剂的选择 从 图 1可以看 出，正丙醇能够形成较为稳定的 0 w微乳体系，而正丁醇、正戊醇、正己醇则不能形 成稳定 的 O W 微乳体 系。这 主要是 因为正 丁醇、正戊醇以及正己醇的溶解性很低，不易互溶；再加上 0 O 0 3 S 06 O9 O 磷脂本身带有的疏水基团，也不易溶于水，导致不能 形成稳定的 O W微乳体系。由图2可知，乙醇虽然能与水互溶，但是磷脂在 乙醇中的溶解性很小，所以形成的微乳体系比正丙 醇中的小。但是由于磷脂和正丙醇含量较大时很难 确定终点，所 以正丙醇所形成的微乳面积不仅代表 W O微乳面积，还代表一部分 O W 微乳面积。从 正丁醇开始，随着碳链 的延长，所形成的微乳面积越 小。这是由于随着碳链 的增加，助表面活性剂对水 的溶解性降低，界面的疏水性增加，导致水核的体积 变小，微乳区域面积反而变小 引。这与 Y a m a z a k i 等 的结论是一致的。0 O O3 S O 6 O 9 0 0 O 3 S O 6 O 9 O O 0 3 S 0 6 O 9 O 0 0 3 S 0 6 O 9 d 图2 不同助表面活性剂体系的伪三元相图。a：乙醇 b：正丙醇 c：正丁醇 d：正戊醇 e：正己醇 Fi g 2 P s e u d o t e r n a r y ph a s e d i a g r a ms o f s y s t e m c o mp o s e d b y d iffe r e n t C O-s u r f a c t a n t a：e t h a n o l b：n p r o p a n o l c：n b u t a n o l d：n-p e n t a n o l e：n-h e x-a n o l 3期 卞欢等：磷脂酰胆碱反应体系的建立 1 2 1 5 2 0 1 8 1 6 l 4 1 2 晴 叠1,0 0,8 06 0 4 0 2 0 0 4 0 0 4 2 0 4 4 0 4 6 0 4 8 0 5 0 0 5 2 0 X(n m)图3 不同 值异辛烷 P C+正丙酉 拿 水 W O微乳体 系的吸光值 F i g 3 A b s o r b a n e e v a l u e s o f d i ff e r e n t J，m v a l u e 8 o fi s o o c t a n e P C+n-p r o p a n o l wa t e r WO ml c r o e mu l s l o n s y s t e m 1 6 1 4 1 2 1 0 差 o 8 O6 O4 0 2 0 0 4 0 0 4 2 O 4 4 0 4 6O 4 8 0 5 0 0 5 2 0 X(n m)图4 不同 值异辛烷 P C+正丁酉 辜 水 W O 微乳体 系的吸光值 F i g 4 Ab s o r b a n c e v a l u e s o f d i ff e r e n t v a l u e s o f i s o o c t a n e P C+n-b u t a n o L wa【e r WO mi c r o e mu l s i o n s y s t e m 2 2 2 0 1 8 1 6 1 4 皇 1 2 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 O 0 4 0 0 42 0 4 4 0 4 6 0 4 8 0 5 0 0 5 2 0 X(n m)图5 不同 值异辛烷 P C+正丙醇 水 O W 微乳体 系的吸光值 F i g 5 A b s o r b a n e e v a l u e s o f d i ff e r e n t J c 爪V U e S o f i s o o c t a n e P C+n-p r o p a n o l wa t e r O W ml c r o e mu l s i o n s y s t e m 2 3 稳定性研究 由图3 5可知，3种微乳体系结果基本一致，随着波长的增加，吸光度值越低。由于在检测其稳 定性时需要合适的波长，使得其检测值在 O 2 0 8，所以选择 4 7 0 n m为3 种微乳体系的检测波长。从表 1 3可以看 出，3种微乳 体系在 不 同 下处理后 的 O D 7 0 值变化不大，在 1 0 0 0 0 r m i n离心 处理后还能保持良好的稳定性；常温 7 d和低温 3 0 d也能保持其稳定性。2 4 鸭肉肌内磷脂反应体 系的确定 从 图 6可以看出，在脂质体体系中产生 了大量 脂肪酸，而 3 种微乳体系中则几乎没有脂肪酸的产 生。但是在脂质体中没有检测到 L P C，这可 能是 由 于实验所采用 的酶液为粗酶液，它包含可能存在 的 许多酶，L P C在脂肪酶或 P L A 1 和 P L A 的作用下还 会进一步水解，故没有发现 L P C的生成。表 1 不同处理条件下异辛 r P C正丙醇 水 W O微乳体系的吸光值 T a b l e 1 Ab s o r h a n e e v a l u e s o f i s o o c ta n e P C+n-p mp a n o l wa t e r W O mi e r o e mu l s i o n s y s t e m i n d i ff e r e n t t r e a t me n t c o n d i t i o n s 3 期 卞欢等：磷脂酰胆碱反应体系的建立 1 2 1 7 分层现象则消失。这可能是 由于超声波 的作用，使 得聚集在一起的单层脂质体又重新分离开来，进而 重新建立新的磷脂脂质体。参考文献：1 郑碧云 在泡囊水溶液 中磷脂酶 A 2水解卵磷脂反应 的研究 D 南京师范大学，2 0 0 5 2 H o a r T P，S e h u l m a n J H T r a n s p a r e n t w a t e r-i n-o i l d i s p e m i o n s：t h e o l e o p a t h i e h y d r o m i e e l l e J N a t u r e，1 9 4 3，1 5 2(3 8 4 7)：1 0 2 1 0 3 3 S e h u l m a n J H，S t o eck e n i u s W，P r i n c e L M M e c h a n i s m o f f o r m a t i o n a n d s t r u c t u re o f m i c r o e m u l s i o n s b y e l ec t r o n m i c r o s c o p y【J T h e J o u rna l o f P h y s i c a l C h e m i s t r y，1 9 5 9，6 3(1 0)：1 6 7 71 6 8 0 4 D j e k i e L，P r i m o r a cM T h e i n f l u e n c e o f c o s u r f a c t a n t s and o i l s o nt h e f o r ma t i o n o f p h a r ma c e u t i c a l mi c r o e mu l s i o n s b a s e d o n PE G-8 c a p r y l i e c a p r i e g l y e e ri d e s J I n t e r n a t i o n a l J o u r n al of P h a r m a c e u t i c s，2 0 0 8。3 5 2(1-2)：2 3 1 2 3 9 5 M o r g a d o MC a b r a l J，P r a z e re s D H y d r o l y s i s ofl e c i t h i n b y p h o s p h o-l i p a s eA2 i n mi x e d r e v e r s e d mi c e l l es o fle c i t h i n a n d s o d i u m d i ect y l s u l p h o s u c c i n a t e J J o u rnal o f C h e m i c al T e c h n o l o g yB i o t e c h n o l o-g Y，1 9 9 5，6 3(2)：1 8 1 1 8 9 6 G a r t i N，L i c h t e n b e r g D，S i l b e r s t e i n T The h y d r o l y s i s of p h es p h a t i-d y l c h o l i n e b y p h esp h o l i p a s e A2 i n mi e r o e mu l s i o n a s mi c ror e a e t o r J C o l l o i d s a n d S u r f a c e s A：P h y s i e oc h e m i c al a n d E n g in e e r i n g A s p ect s，1 9 9 7，1 2 8(1 3)：1 7 2 5 7 翟利民，李干佐，郑立强 囊泡研究进展 J 日用化学品科学，1 9 9 9(1)：2 1 2 3 8 K u p f e x b e r g J P，Y o k o y a m a S，K e z d y F J e k i n e t i c s o f t h e p h o s p h o l i p a s e A2-c a t aly z e d h y d r o l y s i s o f Eg g p h o s ph a t i d y l c h o l i n e i n u n i l-a me l l a r v e s i c l e s Pr o d u c t i n h i b i t i o n a n d i t s r e l i e f b y s e rnm alb u mi n J J o u r n a l of B i o l o gi c al c h e I I l i s 町，1 9 8 1，2 5 6(1 2)：6 2 7 4 6 2 81 9 L a t h r o p B K，B i h o n e n R L C al c i u m a n d m a g n e s i u m d e p e n d e n c e o f p h o s p h o l i p a s e A2-c a ta l y z e d h y d r o l y s i s o f p h o s p h a fi d y l e h o l i n e s mall u n i l a r n e l l a r v e s i c l e s J J o u rna l o f B i o l o gi c a l C h e m i s t r y，1 9 9 2，2 6 7 (3 0)：2 1 4 2 52 1 4 3 1 1 O 姚静，周建平，平其能，等 辅助表 面活性剂对微乳相 行 为的 影响 J 中国现代应用药学，2 0 0 8，2 5(1)：3 9-4 3 1 1 潘国梁，贾晓斌，魏惠华，等 药用微乳伪三元相图的几种制备 方法比较研究 J 中国药房，2 0 0 6，1 7(1)：2 1-2 3 1 2 刘玮琳，刘成梅，刘伟，等 o w 型中链脂肪酸微乳的制备 及其性质研究 J 食品科学，2 0 0 9，3 0(6)：1 0 2 1 0 5 1 3 汪家政，范明，等 蛋白质技术手册 M 科学出版社，2 0 0 0 1 4 P a n H，u u xL，O u Y a n g L L，e t a 1 D i v e r s i t y o f c D N A s e n c o d i n g p h o s p h o l i pa s e A2 f r o m Ag k i s t r o d o n h a l y s pa l l a s v e n o m，a n d i t s e x-p r e s s i o n i n E c o l i J T o x i c o n，1 9 9 8，3 6(8)：1 1 5 5 1 1 6 3 1 5 L i u X，P a n H，Y a n g G，e t a1 C l o n i n g，e x p r e s s i o n and b i o c h e m i c a l c h a r a c t e riz a t i o n o f a b a s i c-a c i d i c h y b rid p h o s ph o l i p a s e A2-I I f r o m A g k i s t r o d o n h al y s P a l l as J B i o c h i m i c a e t B i o p h y s i c a A c t a(B B A)一 P r o t e i n S t r u c t u r e a n d Mo l e c u l a r E n z y m o l ogy，1 9 9 9，1 4 3 1(1)：1 5 7 1 6 5 1 6 L e s e r M E，S a g a l o w i c z L，M i c h e l M，e t a 1 S e rf-a s s e m b l y o f p o l a r f o o d l i p i d s J A d v anc e s i n C o l l o i d and I n t e rf a c e S c i e n c e，2 0 0 6，1 2 3：1 2 5 1 3 6 1 7 Y a m as a k i K，I m a i M，S u z u k i I b e a n l e c i t h i n h y d r o l y s i s u s i n g ho g p a n c r e a s p h o s p h o l i p a s e A2 i n f l u e n c e d b y t h e h y d rop h o b i c c h a r a c t e r o f W O m i c r o e m u l s i o n s y s t e m s J B i o c h e m i c a l E n g i n e e ri n g J o u rnal，2 0 0 4，1 9(2)：1 7 11 7 9 1 8 T ro t t a M，G a l l a r a t e M，P a t t a r i n o F，e t a 1 I n v e s t i g a t i o n o f t h e p h a s e b e h a v i o u r o f s y s t e ms c o n t a in i n g l e c i t h i n a n d 2-a c y l l y s o l eci t h i n d e riv-a t i v e s J I n t e rn a t i o n al J o u r n a l of P h a r m a c e u t i e s，1 9 9 9，1 9 0(1)：8 38 9 1 9 龚福忠，唐艳霞 非离子型微乳液的形成及其相行为研究 J 广西大学学报：自然科学版，2 0 0 2，2 7(2)：1 2 8 1 3 2 2 0 彭一鸣，蒋笃孝，宋龄瑛 改性卵磷脂作为生物表面活性剂对 胆固醇的微乳化研究 J 食品科技，2 0 0 3(6)：3 5 3 7 (责任编辑李洁)