生化检验中的定标.docx

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生化检验中的定标

定标的意义：
定标就是要找出一个参考点，就是一个K值（或F值）。它是由仪器与试剂共同确定下来。当我们测定一个标本时，无论是手工或全自动生化分析仪，测出来的值只是一个吸光度，这个吸光度对我们没有什么意义，我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性，那就要乘上一个K值，计算出来的结果对我们就有意义了。K值就是我们通过定标找出来的。一般来说测定K值的最低要求是用标准品和试剂空白来测定，经过仪器测定出这两个吸光度，即标准品的吸光度和试剂空白的吸光度。
K=标准浓度/(A标准－A试剂空白) PS：A表示吸光度
标准液的浓度我们是知道的，这两个吸光度可以由仪器测出，这样就得出一个K值。任何标本，用其吸光度乘以K值就得到了其浓度值。因此，K值具有非常决定性的意义，可以决定标本的准确性。
K值的决定因素：
我们看看K值会受到什么影响呢？
第一，标准液的浓度一定要准确（标准液最好与标本一样是以血清为基质的）。
第二，标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。吸光度受仪器、试剂的影响，如果仪器稳定，试剂也稳定，那K值就稳定。仪器和试剂是影响K值的主要因素。
如何确定K值是准确的？
一般我们用质控血清来检查，最好是两种水平的质控来检查，如果质控结果很好，可以说K值是准确的，用这个K值计算出来病人的结果也是准确的，所以K值非常关键。
K值的真面目：
K值实际上代表了斜率，截距代表试剂空白，试剂空白每天都在变化，所以K值的稳定性由仪器与试剂决定，如果仪器与试剂都十分稳定，那K值也很稳定。
多长时间定一次标合适？
这要看您试剂的稳定性，质控结果不好，有些项目做试剂空白可以解决，有些项目要做两点定标。
酶的项目如何确定K值：
一是计算出来的理论K值；
K = (TV × 1000)/(SV × L × ε)
二是用有酶项目的定标液得出K值（K=标准浓度/(A标准－A试剂空白)）目前各公司可以提供多项目的定标液，不仅有底物类的项目，也有酶类的项目。
生化检验中的各种空白概念
时间:2009-5-8 9:54:09,点击:61
对所谓"试剂空白""样本空白""水空白""杯空白"等"空白"名词,有些同行可能感到困惑.特此汇集了一下各种言论(包括本论 坛高手们发表的一些意见)并结合自己的理解,总结如下,希望大家指正和补充:
空白概念区别要点:**空白=只含**的空白（只含**的吸光度）
1、试剂空白：
由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度，所以从理论上说，所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除，试剂本身的吸光度就是试剂空白。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把样本换成蒸馏水来测量。
在传统手工方法中,每次测定都要做至少三个管:测定管、标准管、空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水，测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异，所以要求每次都要测定试剂空白，称为实时试剂空白。
在全自动分析仪上，大体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追求速度，在设计上采用一些折中方法来测定试剂空白。以日立全系列生化仪为例。该系列分析仪是做不了实时试剂空白，因为它们全是先加入样本后加试剂，为了折中，只好在定标时做一个试剂空白，保存起来，需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。这种做法，对于比较稳定的试剂来讲，对结果影响不大。

通俗的讲，日立的仪器工作流程中首先是将标本加入到比色杯中，然后依次加入R1试剂、R2试剂，所以试剂空白在每个测定项目曲线中是无法看到的。但是7170从CALIBRATION中是可以看到的，S1ABS就是代表试剂空白吸光度，在CALIBRAT ION画面里的下方找到Reaction Monitor（反应监察），其中STD(1)就是代表试剂空白反应曲线.为了减小误差，日立仪器会连续做两次测定，所以你看到 FIRST和SECOND两条，计算时是取他们的平均值。做试剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定，积极采取措施纠正。对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法，也叫做试剂空白校准。
总的说来，自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度，该吸光度是通过校准确立的。
2、样本空白：
由于溶血、脂血、黄疸等情况，会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量，即样本空白，可以去除这 方面的影响。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上，很难界定样本空白。 消除样本空白有关的大约有如下几点:
a).在双试剂测定时，加入试剂1和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白，所以有单试剂不能扣除样本空白的说法。
b).现在优质的试剂的抗干扰能力都比较强，比如有些双试剂，R1加入后先和样本孵育一段时间，将血红蛋白脂肪、胆红素等反应 掉，再加入R2开始测定反应。在一定范围内都可以消除样本空白。
c).现代全自动生化仪大多采用双波长测定.双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征，选择两个波长和 ，使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等，而使待测物质在两波长处的吸光系数有显着差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度， 以两个吸光度值之差(△A)计算。这也可以扣除一部分样本空白.
d).有些仪器,例如日立系列,有专门的“血清信息”功能的设置。做法都是单 独占用一个空白通道来计算，这也叫做样品空白校准。
3、水空白：
比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意义主要是对光路系统进行检查和校正，如光源，比色杯等，同时在计算中起到消除“杯差”的 作用。日立7060中的Cell Blank（杯空白）测定的就是水空白。