尿液理学蛋白本周蛋白尿糖检测试验.ppt

尿液检验尿液检验2016Mar.1.1.1.1.尿液理学检查尿液理学检查尿液理学检查尿液理学检查 2.2.2.2.尿蛋白定性检尿蛋白定性检尿蛋白定性检尿蛋白定性检3.3.3.3.尿本周蛋白定性检查尿本周蛋白定性检查尿本周蛋白定性检查尿本周蛋白定性检查 4.4.4.4.尿糖定性检查尿糖定性检查尿糖定性检查尿糖定性检查1尿尿液液形形成成过过程程示示意意图图2 容器容器1、一般检查：清洁干燥2 2、细菌培养：有盖无菌大试管3 3、24小时尿：清洁干燥的大口瓶 常规检查可随时留取，但晨尿较浓缩、偏酸性，病理成分多且完整，可提高检查的阳性率。尿液保存尿液保存1、冷藏2、立即送检，夏季1h，冬季 2500 ml/24h 少尿：400 ml/24h 无尿：1.020，随机尿，随机尿1.0031.030 新生儿：新生儿：1.0021.004 临床意义：反映临床意义：反映肾小管肾小管的的浓缩稀释浓缩稀释功能功能比重慢性肾衰竭、尿崩症急性肾小球肾炎、心力衰竭、高热、脱水、出汗过多尿少尿多糖尿病14 【注意事项】注意事项】1尿比重计通过校正后才能使用。2尿液要求新鲜；尿液过少不足以浮起比重计时。3因低温所致的尿酸或其他盐类沉淀可水浴(37)使其溶解，待尿液温度降至比重计所标定的温度时即可测定。4尿液面应消除泡沫；比重计浮标要垂直悬浮于尿液中；读取比密值要准确。5校正结果 要进行蛋白尿、糖尿和温度的校正。6每次测定完毕都需用纯净水冲洗比重计，若有蛋白质及盐类物质沉积时，需用清洁液洗净后使用。15 【原理】【原理】pH广泛试纸是多种指示剂混合的试带,灵敏度约为pH1.0,显色范围为棕红至深黑色,试带蘸取尿液后即可显色,然后与标准色板比较即可测得尿液pH近似值 四、尿酸碱度四、尿酸碱度pHpH试纸法测定试纸法测定16【操作】【操作】1.1.取试纸取试纸 2.2.浸尿浸尿 3.3.读取结果读取结果 4.4.报告方式报告方式17 参考值参考值 新鲜晨尿pH值在5.56.5,平均值6.0 新鲜随机尿pH值在4.58.0 久置可变碱性 临床意义临床意义PH值酸中毒、发热、糖尿病、痛风或服用氯化铵等药物后碱中毒、尿潴留、肾小管酸中毒、服用碱性药物后18 【注意事项】【注意事项】1.1.试带试带 应避光,密封与干燥保存,远离酸性和碱性物质,以防失效2.2.标本标本 应新鲜,放置过久会因挥发性酸丧失或细菌繁殖而使pH增高,标本不能使用防腐剂,否则可能会影响检测结果3.3.比色时间比色时间 应在规定的时间内比色19第二节第二节 尿尿蛋白蛋白定性检查定性检查 【原理】【原理】生物碱试剂磺基水杨酸，在酸性条件下，其磺酸根阴离子与蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性蛋白盐沉淀。磺基水杨酸法20【操作】1.调pH:使尿液PH值在56 2.加尿液:取2支试管,加入1ml尿液 3.加试剂:第一支试管加试剂2滴,轻混 匀,另 一支试管不加做对照 4.判断结果:1min内观察结果 121 优点优点:简便快速，灵敏度高0.05-0.1g/L；缺点缺点:与清/球/本周蛋白反应；假阳性。干化学法的参考方法，NCCLS推荐的 确证实验。【评价】【评价】尿液中蛋白质含量150mg/24h 尿中蛋白质浓度100mg/L 蛋白定性为阳性，即蛋白尿。1.1.蛋白尿蛋白尿 (proteinuria,PROproteinuria,PRO)22【干扰因素】【干扰因素】干 扰 因 素假阳性 高浓度尿酸、尿酸盐、草酸盐碘造影剂、大剂量青霉素混入生殖系统分泌物假阴性 pH 9 或 323【注意事项】【注意事项】1.标本标本:尿液明显混浊，先离心或过滤。患者应用大剂量青霉素钾盐、庆大霉素、磺胺、含 碘造影剂时，应告知结果可能产生假阳性。正确采集中段尿，避免混有生殖系统分泌物。2.调调pH pH 本法在尿液偏碱或偏酸时（pH9，pH3）可呈 假阴性，检测前先测试尿pH(56).3掌握好结果判断时间,对于微弱阳性的判断，可选用黑色衬纸作背景，以提高分辨力。24第三节第三节 尿本周蛋白定性检查尿本周蛋白定性检查一、凝溶法一、凝溶法【原理】【原理】本周蛋白在pH4.90.1条件下，加热至 4060时可发生凝固，温度升至90100时沉淀消失，当温度降低恢复至4060时又可重新凝固。25【操作】（详见实验课本【操作】（详见实验课本 P90 P90）1标本处理 2加入试剂 3观察结果 4验证结果 26 【注意事项】【注意事项】1收集已诊断轻链疾病患者的尿液做此试验。尿液新鲜，减少清蛋白、球蛋白分解变性产生的干扰。混浊尿液须先离心取上清液。2严格控制或调节pH，凝溶法最适pH为4.55.5。3煮沸过滤时，动作迅速，保持高温，不要振荡，防止BJP夹杂于其他沉淀蛋白中被过滤除掉而造成假阴性。过滤用漏斗、滤纸、试管等用品，需保持高温状态，以避免温度降低使BJP凝固。4凝溶法特异性高，操作繁琐、费时，灵敏度低（0.32.0）g/L。5.操作时一定注意安全!27二、对二、对-甲苯磺酸法甲苯磺酸法【原理】【原理】对-甲苯磺酸能沉淀相对分子质量较小的本周蛋白，而对相对分子质量较大的清蛋白和球蛋白不起反应。28【操作】【操作】1.1.加尿液加尿液:取2支试管，分别加尿液1ml 2.2.加试剂加试剂:测定管加0.5ml试剂,对照管加 0.5ml冰醋酸,轻混匀静置5min 3.3.观察结果观察结果:阳性阳性:测定管浑浊加重或有沉淀,对照管清晰透明或轻度浑浊 阴性阴性:测定管清晰透明或与对照管相似29 【注意事项】【注意事项】1收集已诊断轻链疾病患者的尿液做此试验。尿液应新鲜，混浊尿液须先行离心取上清液。服用利福平类抗结核药物患者可能出现周蛋白假阳性。2尿液中其他球蛋白5.0g/L可出现假阳性，需进行验证。如果尿液中本周蛋白含量低，则需先对尿液进行浓缩。30第四节第四节 尿葡萄糖班氏法定性检查尿葡萄糖班氏法定性检查【原理】【原理】CuCu2+2+-CuCu+蓝色蓝色 黄色黄色至砖红色至砖红色.简易步骤简易步骤:班氏试剂1ml(煮沸不变色)+尿4滴煮沸1-2min 冷却后观察.碱性条件碱性条件+葡萄糖葡萄糖31操作：操作：ml班氏试剂，加热试管底部，煮沸，观察，再加尿液2滴，继续煮沸min，冷却后观察结果。结果判断：结果判断：1.蓝色不变:-2.蓝中略带绿无沉淀:+/-3.绿色有少许黄绿色沉淀:+4.较多黄绿色沉淀:+5.土黄色浑浊,大量沉淀:+6.大量红棕/砖红色沉淀:+32【干扰因素干扰因素】标本因素标本因素假阳性：还原性糖假阳性：还原性糖假阴性：假阴性：大量铵盐，预先加碱煮沸大量铵盐，预先加碱煮沸 去氨后再检验；去氨后再检验；蛋白蛋白0.5g/L,0.5g/L,加热乙酸加热乙酸法去蛋白取滤液检验法去蛋白取滤液检验;药物因素药物因素假阳性：假阳性：VitCVitC,青青/链霉素链霉素,头孢菌素头孢菌素,异烟肼异烟肼,水杨酸盐水杨酸盐,氨苄西林氨苄西林【评价评价】缺乏特异性,灵敏度低33 【注意事项】【注意事项】1、试剂与尿液的比例为101。2、煮混时应不时摇动试管以防爆沸喷出，试管口朝向无人处。3、检验糖尿病患者尿液中葡萄糖，空腹或餐后2h留取尿标本。4、大量铵盐，易致假阴性，应预先加碱煮沸去氨后再检验。5、蛋白0.5g/L,易致假阴性，加热乙酸法去蛋白取滤液检验。6、VitC,青/链霉素,头孢菌素,异烟肼,水杨酸盐,氨苄西林等 药物易致假阳性，应停药一段时间再行检测。34 【实验报告格式】【实验报告格式】一、实验原理一、实验原理二、器材与试剂二、器材与试剂三、操作步骤三、操作步骤四、实验结果与分析四、实验结果与分析（实验报告的重点内容，具体分析自己所做的实验结果，结果与书本原理不相符时，到底什么原因自己要去思考分析）五、注意事项五、注意事项3536