内源性雌激素及其受体与非妊娠期牙龈瘤的关系.pdf

第 卷第 期第 页 年 月 华中科技大学学报（医学版）Acta Med Univ Sci Technol Huazhong Vol畅 No畅 P畅Aug畅 李 明，男，年生，医学硕士，主治医师，Email：pporal com通讯作者，Corresponding author，Email：majingzhi com内源性雌激素及其受体与非妊娠期牙龈瘤的关系李 明，逄爱慧，李科珍，杨 焰，魏 婷，马净植华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心，妇产科，武汉 摘要：目的 研究雌激素受体 ER在牙龈瘤瘤体以及同体正常牙龈的表达，探讨其与牙龈瘤临床病理学特征和外周血雌激素（E）水平的关系。方法 实验组 例牙龈瘤瘤体及同体正常牙龈，行苏木精伊红（HE）染色和 ER免疫组化染色，酶联免疫吸附实验测定 例牙龈瘤组、例健康对照组雌激素水平。结果 牙龈瘤组 E水平（畅 畅）pgmL 略高于健康对照组（畅 畅）pgmL，但两组间血清 E水平差异无统计学意义（P 畅）。牙龈瘤瘤体与同体正常牙龈 ER表达差异有统计学意义（P 畅）；牙龈瘤患者血清雌激素水平术后（畅 畅）pgmL 较术前（畅 畅）pgmL 略有降低，但差异无统计学意义（P 畅）；等级资料的相关分析发现牙龈瘤组织中 ER的表达分级与外周血 E水平不呈线性相关（rs 畅 ，P 畅）。结论 非妊娠期牙龈瘤组织存在着较高含量的 ER，非妊娠期牙龈瘤的生长过程中可能存在一定程度的雌激素依赖性。外周血 E水平与 ER表达无关。关键词：牙龈瘤；雌激素；雌激素受体；免疫组织化学中图分类号：R畅 DOI：畅j畅issn畅畅畅畅Association between Endogenous EstrogenEstrogen Receptors and Epulis inNonpregnant WomenLi Ming，Pang Aihui，Li Kezhenet al1Stomatological Center，2Department of Gynecology and Obstetrics，Tongji Hospital，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，ChinaAbstract Objective To investigate the expression of estrogen receptor（ER）in epulis and normal gingival tissues innonpregnant women，and the association of the ERexpression with clinicopathological characteristics and the serum estradiol（E）level畅Methods The level of serum estradiol（E）was measured by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）in patients with epulis and subjects with normal gingival tissues畅The ERexpression was detected in epulis tissues normalgingival tissues by immunohistochemistry as well畅Results The level of serum Ewas（畅 畅）pgmL in patients withepulis，slightly higher than that in normal controls（畅 畅）pgmL，and there was no significant difference（P 畅）畅Significant difference in the ERexpressions was noted between the two groups（P 畅）畅The level of serum Ewas（畅 畅）pgmL in patients with epulis after operation，lower than before operation（畅 畅）pgmL，but no significantdifference was found（P 畅）畅 The level of serum Ehad no positive correlation with the expression of ERin patients withepulis（rs 畅 ，P 畅）畅Conclusion The ERexpression was elevated in epulis tissues of nonpregnant women，suggesting the development of epulis in nonpregnant women is estrogendependent to some degree畅Moreover，it was found that the serum Elevel is not related to the ERexpression in patients with epulis畅Key words epulis；estrogen；estrogen receptor；immunohistochemistry 牙龈瘤来源于牙周膜及颌骨牙槽突的结缔组织。多认为是机械刺激及慢性炎症刺激形成的反应性增生物，并非是真性肿瘤。根据病理组织结构不同，牙龈瘤通常可分为肉芽肿型、纤维型及血管型 类。除妊娠期牙龈瘤患者外，牙龈瘤一般均需要手术彻底治疗。手术时，将肿块完全切除，拔除波及的牙，并去除病变波及的牙周膜，骨膜及邻近的骨组织。从患者角度出发，探索牙龈瘤发病机制，尤其是内分泌与牙龈瘤的关系，可以减少患者牙龈瘤复发，尽量少拔牙或不拔牙，降低因失牙对患者生理及心理健康造成的影响。1 材料和方法1畅1 实验对象及分组 实验组：非妊娠期牙龈瘤患者 例，其中肉芽肿型 例，纤维型 例，血管瘤型 例；男 例，女 例，年龄 岁，平均（畅 畅）岁。非妊娠期牙龈瘤标本均来自同济医院 年至 年手术切除的标本，切片进行苏木精伊红（HE）染色，由 名有经验的病理学医师阅片确诊。治疗方案：术前行龈上洁治术后择期行牙龈万方数据+H _瘤摘除术，术中参照 Sumanth 等的治疗方案扩大切除牙龈瘤至牙槽骨水平，同期行根面平整。病例的纳入标准：参照牙龈瘤诊断标准，根据病史及临床检查确诊后纳入病例组。均满足以下要求：无全身系统性疾病；最近 个月未服用广谱抗生素、抗病毒药物；最近 个月未行专业牙周洁治术；无良恶性肿瘤，女性无妇科现病史。对照组的选择：采用双重对照。自身对照：术前术后的对照；同个体牙龈瘤瘤体以及同体正常牙龈的对照。健康对照组：正常牙龈 例，女 例，男 例，年龄 岁，平均（畅 畅）岁。来自临床非肿瘤且无明显炎症患者，入选条件为无良恶性肿瘤，女性无妇科现病史各组均排除孕妇、卵巢既往或现症患者及 年内避孕药或甾体类激素使用者。1畅2 资料收集畅畅 临床检查 包括每个患者的口腔卫生情况（PLI 指数，L迸e 法）、性别、年龄、吸烟状况、PD 范围、CAL 量、记录牙龈瘤部位、质地、大小。畅畅 实验室检查 兔抗人雌激素受体多克隆抗体，PA（美国 Affinity Bioreagents 公司）；SP 即用型试剂盒（美国 Zymed 公司）；DAB 显色剂及多聚赖氨酸（PolyLLysine）粘片剂（北京中山生物技术有限公司）；ELISA 检测试剂盒（美国Biocheck 公司）；PBS 替代一抗作为阴性对照。1畅3 实验步骤 女性患者空腹抽取卵泡期（月经周期第 天，处于较低的雌激素水平）肘静脉血，分离血清，置 保存待检；男性患者于术前清晨空腹时抽肘静脉血 mL，rmin 离心 min，吸取上层血清，置 保存待检。酶联免疫吸附实验（ELISA）测定雌激素水平：应用美国 Biocheck 公司生产的 ELISA 检测试剂盒，严格按照操作规程，批量测定血清中雌二醇（E）的含量。每块测定板均设双份标准系列和质控，利用伯乐 酶标仪，读取 nm 波长下各孔吸光度（A）值，绘制标准曲线，求得样本中 E的含量。苏木精伊红染色：gL 多聚甲醛中固定 h，脱水，石蜡包埋，m 切片，染色。采用免疫组织化学 SP 法（过氧化物酶标记的链酶卵白素法），每个蜡块均切 m 切片 张，张阴性对照，另 张做雌激素受体（ER）染色。ER免疫组织化学染色结果由 位固定研究人员独立按标准评价，如同一切片出现不同评定结果则共同读片讨论达成一致意见后再评价。染色分级标准：ER以细胞核内出现棕黄色颗粒，着色高于背景底色为阳性。无阳性细胞为阴性（），阳性细胞数 为弱阳性（），阳性细胞数在 为中度阳性（），阳性细胞数 为强阳性（）1畅4 统计学分析在 SPSS 畅 软件系统中进行数据处理：计量资料组间均数比较采用 t 检验，率的比较采用检验，各指标间的相互关系用列联表的检验，出现小值 频 数 时 用 Fisher 精 确 概 率 法 检 验。用Spearman 等级相关分析评价 ER表达与外周血 E水平的关系。以 P 畅 为差异具有统计学意义。2 结果2畅1 非妊娠期牙龈瘤组与健康对照组的均衡性分析非妊娠期牙龈瘤组 例，年龄（畅 畅）岁；健康对照组 例，年龄（畅 畅）岁。牙龈瘤组与健康对照组在年龄、出生地、种族、居住地（城乡）、婚姻状况、吸烟状况、口腔卫生情况方面的分布基本一致，差异均无统计学意义（P ）。2畅2 血清 E2的定量分析非妊娠期牙龈瘤组 E水平（畅 畅）pgmL 略高于健康对照组（畅 畅）pgmL，但两组间血清 E水平差异无统计学意义（P 畅）。2畅3 不同组织 ER表达分级非妊娠期牙龈瘤瘤体与同体正常牙龈 ER表达差异有统计学意义（P ），见表 。表 1 不同组织 ER表达分级Table 1 The expression of ERin epulis and normal gingivaltissues in the two groups组别例数ER表达分级牙龈瘤瘤体沣-寣 同体正常牙龈沣-寣 2畅4 在不同类型的牙龈瘤患者中 ER表达 例肉芽肿型牙龈瘤患者有 例 ER（）；例纤维型牙龈瘤患者有 例 ER（）；例血管瘤型牙龈瘤患者有 例 ER（）。不同类型的牙龈瘤患者比较，差异无统计学意义（P 畅）。2畅5 不同性别患者中 ER表达 名男性患者有 例 ER（）；名女性患者有 例 ER（）。不同性别的牙龈瘤患者比较，差异无统计学意义（P 畅）。2畅6 非妊娠期牙龈瘤患者术前术后血清雌激素水平全部牙龈瘤患者术前血清雌激素水平是（畅李 明等畅 内源性雌激素及其受体与非妊娠期牙龈瘤的关系万方数据+H _ 畅）pgmL，而术后血清雌激素水平为（畅 畅）pgmL。术前与术后比较，差异无统计学意义（P 畅）。2畅7 ER表达与外周血 E2水平的关系非妊娠期牙龈瘤组织中 ER的表达分级与外周血 E水平的关系见表 。经 Spearman 等级相关分析发现，非妊娠期牙龈瘤组织中 ER的表达分级与外周血 E水平不呈线性相关（rs 畅 ，P 畅）。表 2 ER表达与外周血 E水平的关系（珚x s）Table 2 The relationship between the serum Elevel and theERexpression in patients with epulis（珚x s）雌激素受体表达分级例数外周血 E水平（pgmL）8$畅 畅8$畅 畅8$畅 畅8$畅 畅3 讨论性激素水平的变化在牙龈疾病与牙周病的进展中扮演了重要角色。但关于牙龈瘤与雌激素的相关研究并不多，而且基本上围绕妊娠期牙龈瘤而展开。妊娠期牙龈瘤（pregnancy tumor）多为血管型牙龈瘤，并且随着妊娠结束后雌激素水平的回落，妊娠期牙龈瘤可能缩小或消失。正常牙龈组织中存在特异性 ER，但含量较低，本研究也证实了这一点：例同体正常牙龈中仅有 例 ER呈阳性表达。而对于同体的非妊娠期牙龈瘤则 ER表达明显上调，ER的表达阳性率差异有统计学意义（P 畅）。这说明 ER的局部高表达和非妊娠期牙龈瘤有一定联系，与妊娠期牙龈瘤的结论类似。牙龈瘤不是真性的肿瘤，但其发病与内分泌紊乱，尤其是性激素有一定的关系。从本研究的结果看，纤维型和肉芽肿型牙龈瘤的ER阳性率和阳性程度均明显高于正常牙龈上皮组织，细胞中性激素受体的存在反映该组织对性激素有应答反应，组织中性激素受体的有无及多少是判断患者肿瘤与性激素依赖关系的依据，牙龈瘤组织存在着高含量的 ER，则说明在牙龈瘤的生长过程中可能存在一定程度的雌激素依赖性，可以推测ER对牙龈瘤的发生、发展有作用，因此推论采用内分泌治疗 ER阳性的非妊娠期牙龈瘤可望有效。本研究的结果还发现肉芽肿型牙龈瘤 ER的阳性率高于纤维型牙龈瘤，这可能说明前者对雌激素的依赖性较后者更明显。在我们的研究中发现 例牙龈瘤患者中，ER表达的阳性部位主要位于鳞状上皮细胞的胞核中，从基底层到表层均有表达，棘层最多。例 ER强阳性染色均为肉芽肿型牙龈瘤，染色强度也比对照组及其它类型牙龈瘤深，这可能是由于肉芽肿型牙龈瘤大量炎性细胞浸润的关系，对此还需要用其它方法进行证实。牙龈瘤中，究竟是哪些因素影响局部雌激素的浓度，且牙龈瘤中 ER采用哪一种启动子发挥作用，何种因素影响 ER的表达及活性，这些都值得我们进一步深入研究。至于牙龈瘤组织中 ER的表达分级与外周血E水平不呈线性相关（rs 畅 ，P 畅），说明局部雌激素水平对非妊娠期牙龈瘤的发病机制更重要。本研究只是一个小样本的断面研究，年龄范围过大可能存在系统误差偏大，而激素水平是一个动态的过程，并且还存在各种激素的协同和（或）拮抗作用，因此还需要扩大样本以取得更多资料的支持。参 考 文 献 CarrillodeAlbornoz A，Figuero E，Herrera D，et al畅 Gingivalchanges during pregnancy：II畅Influence of hormonal variations on the subgingival biofilmJ J Clin Periodontol，（）：畅 Figuero E，CarrillodeAlbornoz A，Herrera D，et al畅 Gingivalchanges during pregnancy：I畅 Influence of hormonal variationson clinical and immunological parametersJ J Clin Periodontol，（）：畅 Sumanth S，Bhat K M，Bhat G S畅Clinical management of anunusual case of gingival enlargement J J Contemp DentPract，（）：畅 Foligno L，Forni F，DAddona A畅 Hormonal influence on thephysiology and pathology of the dental gingival unit：the preliminary results of a pilot study J Minerva Stomatol，（）：畅 Becerik S，Oz毕aka O，Nalbantsoy A，et al畅 Effects of menstrualcycle on periodontal health and gingival crevicular fluid markersJ J Periodontol，（）：畅 Orwoll E S，Chan B K，Lambert L C，et al畅Sex steroids，periodontal health，and tooth loss in older men J J Dent Res，（）：畅 沈娜，宋海平，赵月，等 乳腺癌雌激素受体阳性细胞对雌激素受体阴性细胞增殖的影响J 华中科技大学学报：医学版，（）：畅 McLeod D E，Stoeckel D，Contreras J，et al畅Severe postpartum gingival Enlargement J J Periodontol，（）：畅 Domingues R S，Ferraz B F，Greghi S L，et al畅 Influence ofcombined oral contraceptives on the periodontal condition J J Appl Oral Sci，（）：畅 Baser U，Cekici A，TanrikuluKucuk S，et al畅 Gingival inflammation and interleukin beta and tumor necrosis factoralphalevels in gingival crevicular fluid during the menstrual cycleJ J Periodontol，（）：畅（收稿）华中科技大学学报（医学版）年 月第 卷第 期万方数据内源性雌激素及其受体与非妊娠期牙龈瘤的关系内源性雌激素及其受体与非妊娠期牙龈瘤的关系作者：李明，逄爱慧，李科珍，杨焰，魏婷，马净植作者单位：李明,逄爱慧,杨焰,魏婷,马净植(华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心,武汉,430030)，李科珍(华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科,武汉,430030)刊名：华中科技大学学报（医学版）英文刊名：ACTA MEDICINAE UNIVERSITATIS SCIENTIAE ET TECHNOLOGIAE HUAZHONG年，卷(期)：2013,42(4)参考文献(10条)参考文献(10条)1.Carrillo-de-Albornoz A.Figuero E.Herrera D Gingival changes during pregnancy:II.Influence ofhormonal variations on the subgingival biofilm 2010(03)2.Figuero E.Carrillo-de-Albornoz A.Herrera D Gingival changes during pregnancy:I.Influence ofhormonal variations on clinical and immunological parameters 2010(03)3.Sumanth S.Bhat K M.Bhat G S Clinical management of an unusual case of gingival enlargement2007(04)4.Foligno L.Forni F.DAddona A Hormonal influence on the physiology and pathology of the dentalgingival unit:the preliminary results of a pilot study 2010(1/2)5.Becerik S.Ozaka O.Nalbantsoy A Effects of menstrual cycle on periodontal health and gingivalcrevicular fluid markers 2010(05)6.Orwoll E S.Chan B K.Lambert L C Sex steroids,periodontal health,and tooth loss in older men2009(08)7.沈娜.宋海平.赵月 乳腺癌雌激素受体阳性细胞对雌激素受体阴性细胞增殖的影响期刊论文-华中科技大学学报(医学版)2012(01)8.McLeod D E.Stoeckel D.Contreras J Severe postpartum gingival Enlargement 2009(08)9.Domingues R S.Ferraz B F.Greghi S L Influence of combined oral contraceptives on the periodontalcondition 2012(02)10.Baser U.Cekici A.Tanrikulu-Kucuk S Gingival inflammation and interleukin-1 beta and tumornecrosis factor-alpha levels in gingival crevicular fluid during the menstrual cycle外文期刊2009(12)本文链接：http:/