罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎的疗效及其机制.pdf

8 4罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎的疗效及其机制!蝤庄趟盟题壁查!Q 堕生筮!赞蔓2 塑周静平邓长生(武汉太学中南医院消化内科，武汉4 3 0 0 7 1)摘要：目的观察罗格列酮对大鼠溃疡性绍肠炎的疗效井探讨其可能存在的机制。方法应用三硝基苯磺酸(T l e)乙醇灌肠糊备大鼠绩疡性结肠炎模型。实验设正常对照组、模型对照组、阳性药物组(柳氮磺胺吡啶组，1 0 0m 5，k g)、罗格列酮给药组(2m g、4m g、8m k g)，每天灌胃给药1 次给药时间从造模后第2 天开始至实验结束共8d 观察大鼠疾病活动指数(D A I)、结肠黏膜损伤指数(C M D I)及组织学评分(H s)。生化法检测大鼠结肠组织髓过氧化物酶(M P O)、超氧化物歧化酶(s o s)活性及丙二醛(M D A)的含量。结果与正常组相比，模型组大鼠D A I、C M D I、H S 明显增加(P 00 1)，结肠组钗M P O 活性、M D A 水平显著升高(P n 0 1)S O D 括性下降(P n0 1)。罗格列酮4m g、8m s k g 和S A S P 可币同程度改善D A I、C M D I 和u s(P 00 5，P(n 0 1)，降低M P o 活性和M D A 水平(P(0 0 1)，增加S O D 活性(P 0 0 1)。结论罗格列酗对大鼠溃疡性结肠炎有保护作用，其机制可能与减少脂质氧化，增加清除氧自由基的能力璃关。关键词：溃疡性结肠炎；岁格列酮；氧自由基；过氧化物酶体增殖物激活受体C 中图分类号 R 5 7 46 2 义献标志码 A 文章编号 1 0 0 5-5 4 l X(2 0 0 6)0 2-0 8 4 4)3E f l e e to fR o s i g l i t a z o n eo nR a tU I c e r a t i v eC o l i t i sa n dP r o b a b l eM e c h a n l s mZ H O UJ i n g-p i n g D E N GC h a n g-妯e n g D e p a r t m e n to f C o s t r o c n t-r o l o g y Z h o n g n a u H o s p i t a lo f W t t h a n U n i v e r s i t y，W u h a n4 3 0 0 7 1，C h i n aA b s t r a c t：0 b j e c f i v e3 oi n v e s t i g a t et h ee f f e c to fm s i g l i l a m n co nr a lc o l i t i sa I l dm e c h a n i s mM e t h o d sR a t l i t i s e d e lHi n d u c e db y2，4，6-t r l n i t r o b e n z e n es u l f o n i ca c i d(悄B)w i t he t h a n 0 1 T h ee x p e r i m e n t a la n i m a l s r a n d o m l yd i v i d e d i n t 0 6g r o u p s：n 1 瑚g r o u p m a d e lg r o u p S A S Pg r v u p(1 0 0m k g)，r o s i g l i t a z o n eg r o u p(2m g，4m g，8m k g)T h es a l i n e，S A S P，r c i g i t a z o n e a d m i a l s t e r e db yg a r a g er e a e g e c t i v e l y 1t i m ep e rd a y，f r o m2 4hd t e r t h ee s t a b l i s h m e n to f m e d e t t o t h ee n do fe x m d m e n t，a d d e du p t o8d a y s T h ed l s e a 3 ea c t i v i t y i n d e x(D A I)，e o t o nn l u C O$Ud a m a g e i n d e x(C M D I)dh i s t o 晒c dS c o r e(a s)o f t h er a t s mo b s e r v e da n de v a l u a t e d P a e l e v e lo f m y e l o p e m x i d a s e(M P O)a n d m a l o a d i a d e h y d e(M O A)a l o n g“【hs u p e r o x i d ed i s m u t n s e(S O D)a c t i v i t y”e 陀m e a s u r e d 埽b i f，c h e m l c a lm e t h o d s R e 吼l l 括C o m p 曲a d 坼hn o r m a lg r o u p，t h eD A I，C M D Ia n dH S i n m o d e lg r o u p i n e T e a s a ds i g a i i q e a n d y，t h e l e v e lo fM P Oa n d M D Aw e 陀a u g m e n t e d h o w e v e r t h eS O Da c t i v i t yr e d u c e dr e m a r k a b l y R o s i g l l t a z o n ec a na m e l i o r a t eD A I，C M D l，H S，r e d u c et h el e v e lo f)。a n dM D A。e l e v a t et b eS O Da c t i v i t yC o n c l u s i o nR 帖i g l i t a z o n el u g sb e n e f i c i a le f f e c tO nr a ta l c e m t i v ec o l i t i s R e d u c i n gl i p i dp e r o x i d a l i o na n dr e s i s t i n go x y g e nf r e er a d i c a lm a yt h ep r o b a b l em e c h a n i s m K e yw o r d s：U l c e r a t i v ec o l i t i s；R a s i g l i t a z o n e；O x y g e nf r e er a d i c a l；P e r o x l s o m ep r o i f e x a t o r-a c t i v a t a dr e c e p t o r(P P A R)溃疡性结肠炎(U C)系大肠黏膜慢性非特异性炎症和病变，以往的报道较为少见。近年来，由于生活水平的提高和饮食结构的改变，其发病率有上升趋势。临床治疗药物以氨基水杨酸、糖皮质激素和免疫抑制剂为主，但存在副作用大，停药后易发的缺点。过氧化物酶体增殖物激活受体(P P A R)是一类配体活化的核转录因子，与相应的配体结合后可调节目的基因的表达，主要有3 个亚型：a、1 3、1。有研究表明，人和啮齿类动物结肠上皮细胞有大量P P A R“表达，在维持肠道正常生理功能和调节免疫反应方面发挥重要作用，其表达缺失或减少与u c 有关“2 1。噻唑烷酮类(T Z D)药物如罗格列酮、吡格列酮是P P A R l 合成配体，已作为薪一代糖尿病的治疗药物用于临床，可增加脂肪细胞对胰岛索的敏感性，发挥降糖疗效。新近研究表明，该类配体在炎症和免疫调节方面也具有独特的作用，在一些动物炎症模型中具有良好的抗炎效应”4 1。本实验拟通过大鼠三硝基苯磺酸(T N B)乙醇结肠炎模型，初探罗格列酮在大鼠实验性结肠炎中的治疗作用和可能机制。1 资料与方法1 1 实验动物S p r a g u e D a w l e y(s o)大鼠3 6 只，雌性，体重2 0 0 2 0g，购于武汉大学医学院实验动物中心，室温光照1 2h：1 2h 条件下饲养。1 2 主要试剂与仪器三硝基苯磺酸(T N B)购自S i g m a 公司。马来酸罗格列酮片(商品名文迪雅)，葛兰素史克有限公司生产。柳氮磺胺吡啶片(S A S P)，上海三维制药有限公司生产。M P O、S O D、M D A 试剂盒购自南京建成生物工程研究所。其他试剂为国产分析纯。7 2 2 分光光度仪，上海第三分析仪器厂产品。水浴箱，江苏红旗医疗器械厂产品。1 3 方法l _ 3 1 模型建立应用T N B 乙醇方法制备大鼠溃疡性结肠炎模型。实验前禁食2 4h，自由饮水，1 0 水合氯醛腹腔麻醉(3 0 0m g k g)，将T N B 溶于5 0 乙 万方数据堑鏖趟北瘟盘查!壁竖生蔓!鲞笙!塑醇至终浓度1 0 0m m l，取塑料导管1 根，术前石蜡油润滑，从大鼠肛门中插入深度约8c m，缓慢推注T N B 乙醇溶液，每只大鼠约0 3m l。1 3 2 分组实验设正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组(S A S P 组，1 0 0m g k g)、罗格列酮组(2m g、4m g、8m g k g)，每组大鼠6 只。每天灌胃给药1次，给药时间从造模后第2 天至实验结束共8d；模型对照组给予生理盐水灌胃。每天观察大鼠一般状况及粪便性状，记录评分。评分标准采用疾病活动指数(D A D。见表1。D A I：(体重下降分数+大便性状分数+便血分数)3表1D A I 评分表1 3 3 标本收集实验结束后，水合氯醛麻醉大鼠，将其仰卧固定于手术台，腹部正中切口，分离结肠组织(从肛门至盲肠约8c m)，沿肠系膜纵轴剪开，冰生理盐水冲洗净，肉眼观察大体形态并进行评分(C M D I)，同时取病变最明显处组织置于1 0 中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，切片，H E 染色，光镜下观察组织学改变并评分(H S)。大体评分和组织学评分参照文献9。另取组织t 块置于一8 0 保存，留做M P O、S O D、M D A 检测。1 3 4M P O、S 0 1)、M D A 检测具体操作按试剂盒说明书进行。1 3 5 统计学处理实验数据以i s 表示，采用单因素方差分析。组问差异采用q 检验。P 0 0 5 差异有显著性。2 结果2 1 大鼠一般状况造模后第2 天，模型组大鼠出现腹泻，解黄色稀便、半稀便和(或)血便，粪便隐血试验(+)，精神倦怠，活动进食减少，体重下降。S A S P组和罗格列酮中、高剂量组一般情况及消化道症状好于模型组，D A I 评分明显降低(P 0 0 5)。S 5 2 2 大体形态及组织病理改变模型组大鼠肠黏膜有不同程度充血、水肿、糜烂及出血，浅小溃疡形成，病变以结肠下段最明显，并向上连续发展。镜下黏膜及下层血管高度扩张充血，大量炎细胞浸润，以中性粒细胞为主。罗格列酮及S A S P 可显著改善肠黏膜充血、水肿、糜烂；镜下黏膜及黏膜浅层仅有少量中性粒细胞、淋巴细胞浸澜组织学评分低于模型组。见表2。表2 各组大鼠D A I、C M D I 及H S 评分比较组别剂 D A IC M D I(n w 7 咯)+P(O0 1V 8 正常组，。P(00 5，P 00 5 岵罗格硎酮8n,e k g 组(采3 同)。2 3 罗格列酮对大鼠结肠M P O、M D A 含量及S O D 活性的影响如表3 所示，与正常组t 桕比，模型组M P O活性和M D A 含量均显著升高，而S O D 话性明显降低(p 0 0 5)。表3 各组大鼠M P O、S O D、M D A 比较组荆(t a 荆量k g)M P 0(u g)s O D(“g)M。A(n m 曲3 讨论本实验中模型组在造模后出现腹泻、血便、体重下降，肠黏膜充血水肿糜烂及浅溃疡形成，镜下黏膜 万方数据8 6 和黏膜浅层血管高度扩张充血，有大量炎细胞浸润，主要为中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞等，与人类U Cl 临床和病理表现相似，表明模型复制成功。U C 是炎症性肠病(I B D)中的一种独立疾病，病因不明。目前大多学者认为是遗传、环境、免疫等因素相互作用所致。肠道炎症损伤是其病理基础，该病理过程与氧化应激密切相关。有研究表明o。，氧自由基及其触发的脂质过氧化反应学说与U C 的发病相关。氧自由基具有杀菌、细胞毒及促进炎性渗出水肿等作用。其作用的靶细胞无特异选择性，因此氧自由基在参与杀菌等防御作用同时，也可对正常组织细胞造成损伤。正常情况下，体内存在清除氧自由基的防御系统，包括抗氧化酶(S O D，谷光甘肽还原酶等)和抗氧化剂(维生素C、维生素E)。当抗氧化系统削弱或氧自由基生成过度，氧自由基溢出细胞外对周围组织造成损伤，如与生物膜不饱和脂肪酸共价结合，激发连锁反应，生成脂质过氧化物及降解产物如丙二醛(M D A)，使膜流动性降低，通透性增加，大量c a“内流，胞内C a“负荷增加，致细胞死亡；作用于蛋白质分子使之变性，酶失活；促进炎性渗出和水肿。在U C中，组织可通过吞噬细胞“呼吸爆发”产生大量氧自由基“。本实验模型组中M D A 水平明显增加，S O D 活性显著下降，表明氧化应激及脂质过氧化，抗氧化能力下降与U C 的发生有关。T Z D 是P P A R l 的合成配体，与P P A R y 结合后可调节脂肪细胞分化和糖代谢，有胰岛素增敏的作用，用于2 型糖尿病的治疗。近年来其在抗炎、调节免疫反应方面的作用也受到关注”J。有研究证实”“，该类配体可显著改善葡聚糖硫酸钠(D S S)、T N B 诱导的小鼠结肠炎症状，改善肠黏膜充血水肿糜烂。T a k a g i等”“证实吡格列酮(3m g、1 0m g k g)可显著改善D S S诱导的小鼠结肠炎症状，减少脂质过氧化的产生。本实验结果表明，与模型组相比，罗格列酮组大鼠一般状况及腹泻血便症状明显减轻，结肠大体和组织学评分也有所改善，M D A 水平降低，S O D 活性增加，证实了罗格列酮具有一定的抗氧自由基及脂质过氧化作用。M P O 主要存在于中性粒细胞，其水平高低间接反映中性粒细胞的浸润程度。本实验中模型组M P O 水平明显高于正常组，表明组织中有大量中性粒细胞浸I 堕匪拦焦基盘查!Q 堂生塑!鲞筻2 翅润。罗格列酮各剂量组M P O 有不同程度下降，说明罗格列酮可降低M P O 水乎，减轻炎细胞的浸润，从而减轻肠道炎症。参考文献 1 D U B U Q U O YI 一J A S S O NE A，D E E BS，a tdI m p a i r e de x p r e s s i o no fp e r o x i s o m ep r t h f f e m t o r-a c t i v a t e dI；e e e p t o r，i nu l c e r a t i v ec o l i t i s J 3 G m m m e n t e o l o g y，2 0 0 3，1 2 4：1 2 6 5 2 D E S R E U M A U XP，D U B U Q U O YL，N U T T E NSa ta 1 A t t e n u a t i o no fo ni a f l a m m a d o nt h m u 曲a c t i v a t o r so ft h er e t h i n o i d1r e c e p t o r(R X R)p e r o x i s o m ep m l i f e m t o r-a e f i v a t e dr e c e p t o r1(P P A R l)h a t-e r o d i m e r：ab a s i sf o rn c wt h e r a p e u t i cs t n t e g i e s J JE x pM O d，2 0 0 1，1 9 3：8 2 7 3 C U Z Z O C R F 认S，P I S A NB，D U G OLa td R 0 6 i g t i t a w n e，al i g a n do ft h ep e r o：d 日o m ep m l i f e r a t o ra c t i v a t e dr e c e p t o r 一1 r e d u 胎si l C L!t ei n-1 a m i n a t i o n J】E u rJP h t m a c d，2 0 0 4，4 8 3：7 9 4 N A K A J I M AA W A D AK M I K IHe ta lE n d o g e n o u sP P A R m o d i a t e,Ra n t i-i n f l a m m a t o r ya c t i v i t yi nm u r l n ei s c h e m i a r e p o f f u s i o ni n j u r y J G l a o e n t e r o l o g y，2 0 0 1，1 2 0：4 6 0 5 邓长生，夏冰，陈德基章超氧化物歧化酶对大鼠乙酸性貉肠炎黏膜的保护作用 J 中国病理生理杂志，1 9 9 4，1 0：2 3 6 P A V L I C KK P，I A R O U X 巧，F U S E L E RJ，目a 1 R o l eo fr e a c t i v e t a b o l i t e s0 fo x y g e na n dn i t r o g e ni ni n f l a m m a t o r yb o w e ld i s e a s e J F r e e 岫cB i dM e d 2 0 0 2 3 3：3 1 1 7 邓长生，夏冰炎症性肠病【M 匕京：人民卫生出版社。1 9 9 8，9 7 8 C H I N 啪G F R U C H A R TJ C，S T A E L SBP e r o x i s c m ep r o l i f e r a t o r-a c t i v a t e dr e c e p t o r s(P P A R s)：n u c l e a rr e c e p t o r sa tt h ee r o s s r o e d sb e-t w e e nl i p i dm e t a b o l i s ma n di n f l a m m t i o n JJ 1 R f l a m mR c s，2 0 0 0 4 9：4 9 7 9 S UC G，W E Nx，B A I L E YS T，e fd An o v e lt h e r a p yf o rc o l i t i su t i l i i n gP P A RTl i g m d 导t oi n h i b i tt h ee p i t h e l i a li n f l a m m a t o r yR 8 p o r l 日e J J C l i nI n f e s t，1 9 9 9，1 0 4：3 8 3 1 0 S A U B E R M A N NL J N A K A J I M AA W A D AK，da lp e r o：d s o m ep r o-l i f e m t o r-a e t i v a t e dr e c e p t o rg a m m aa g o n i s tl i g a n d ss g m u M t e T h 2c y t o k i n er e s p o n s ea n dp r e v e n ta e l l t ec o l i t i s j 1 i d l a m m B o w e lD，2 0 0 2，8：3 3 0 1 1 K A T A Y A M AK，W A D AK。N A K A J I M AA，e tdAn o v e lP P A R，g e n et h e r a p yt oc o n t r o lh d l a m m a t o n s o c l 毗e dw i t hi n f l a m m a t o r yb o w e ld i s e a s ei nar o u t i n em o d e l J G a s t r o e n t e r o l o g y，2 0 0 3，1 2 4：1 3 1 5 1 2 I A K A G IT N A I T OY。I O M A I S U F dN e la lP i 础i t a z o n e aP F A R ll i g a n d，p m v i d 钓p r o t e c t i o nf r o md e x t r a ns u l f a t es o d i u m i n d u c e de o l i 一1 i si nm i c ei na s s o c i a t i o nw i t hi n h i b i t i o n o ft h eN F K Be y t o k i nc a 争e a d e J R e d o x R e p o r t，2 0 0 2，7：2 8 3(收稿日期：2 0 0 5 1 0 2 5 一)万方数据罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎的疗效及其机制罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎的疗效及其机制作者：周静平，邓长生，ZHOU Jing-ping，DENG Chang-sheng作者单位：武汉大学中南医院消化内科,武汉,430071刊名：临床消化病杂志英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CLINICAL GASTROENTEROLOGY年，卷(期)：2006,18(2)被引用次数：6次 参考文献(12条)参考文献(12条)1.DUBUQUOY L;JASSON EA;DEEB S Impaired expression of peroxisome proliferator-activated receptor inulcerative colitis 20032.DESREUMAUX P;DUBUQUOY L;NUTTEN S Attenuation of colon inflammation through activators of therethinoid x receptor(RXR)/peroxisome proliferator-activated receptor(PPAR)heterodimer:a basisfor new therapeutic strategies外文期刊 20013.CUZZOCREA S;PISAN B;DUGO L Rosiglitazone,a ligand of the peroxisome proliferator activatedreceptor-,reduces acute inflammation外文期刊 2004(1)4.NAKAJIMA A;WADA K;MIKI H Endogenous PPAR mediates anti-inflammatory activity in murine ischemia-reperfusion 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2010(3)引用本文格式：周静平.邓长生.ZHOU Jing-ping.DENG Chang-sheng 罗格列酮对大鼠溃疡性结肠炎的疗效及其机制期刊论文-临床消化病杂志 2006(2)