间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体.pdf

中 国 兽 医 学 报2 0 0 2 年 3 月第 2 2 卷第 2 期C h i n J V e t S c i Ma r 2 0 0 2 V o 1 2 2 No 1 间接 E L I S A检测猪伪狂 犬病血清抗体 邱德新 陈焕春，何启盖 吴 斌 曹胜波(华中农业大学 畜牧兽医学院 湖北 武汉 4 3 0 0 7 0)摘 要：用特 肾传 代 细 胞 I B R S 一 8增 殖猪 伪 狂 犬茹藉 毒(P R V)鄂 A 群，藉 毒 培 养上 清液 经硅 酸接 沉 淀、聚 乙二 醇(Mr 2 0 0 0 0)襄缩后作为 包被抗原。用地化的猪血清 1 g G克 疫家鬼，H RP标记提取 的免抗猪 1 g G 制备 出高效价的酶标 抗体，酶标 抗体 工作暾度为 1 5 O 0 0 0；经吝种条件 的选择 建立 丁捡 刹猪伪 征犬病血清抗体的间接 E I 1 S A。所建 立的 闻接 E L I S A抗原 包被浓度 为 3 9 2 mg L，血清 最佳稀释 度为 l 2 0，与猪 细小藉 毒、猪瘟、o 型 口蹄症、猪 表原津标准 阳性血清呈 阴性反 应，与标准用性血 清和：临床 未感 染 P RV 的猪血 清呈 阴性 反应；与猪 伪狂 犬茹持 隹 性 血清、免瘟猪 血 清和临床发 藉猪血 清呈 明显的阳性反应；与羲 国进 口的 P R V 抗体检 刹 E 1 1 s A诊 断试 剂盒拴 删结 果比较 d 5静楮 血 清的阴、阳性 捡 出井 争率均为 1 0 0 。丧 明建立的间接 E I 1 S A具 有敏感性 高、特异性强、重复性好 的优点 可用 于猪 伪征 犬病血 清抗体的定性和 定量检测。关t词：猪 伪狂犬病；间接 E L l S A；抗 津检测 中围分类号$8 5 4 4 文献标识码：A 文章编 号 l 0 0 5 4 5 4 5(2 0 0 2)0 2 0 1 4 9 0 4 目前，用 于猪伪狂 犬病诊 断的方；击，床上应用最广 泛的 是血清学诊断技术，除血清中和试 验(S NT)、琼脂免疫扩散 试 验(A GI D)、血凝(HA)和 血凝抑 制试 验(HI)外 本 研究 室 已 成功地建 立 了乳 胶凝 集试 验(L A T)用 于现 场 检测 P R V 抗 体 在此基础上，为能 建立 一种更敏感、特异，且重复性好，便于大规模血 清学调查及 免疫监测 的血清学方法，特 进行 了 本研究。1 材料与方法 1 1 细胞与培养基1 B R S 2细胞，由本室传代保存，用于增 殖病毒；DME M 培 养基，购 自 G 1 B C O公司 1 2 病毒 与血清猪伪 狂犬病病 毒(P R V)鄂 A 株，本室 分 离鉴定保存 P R V 鄂 A株 阳性血 清 由本室 自制保存；猪伪狂 犬病 标准j 丑性血清，中国兽药 监察 所和略尔滨兽医研究 所惠 赠；待检血清 采 自省 内外某些猪场 已发病的猪和基 层送 检的 猪 血清；猪 F 1 蹄 疫标准 阳性 血清(O 型)、猪瘟标准 阳性 血清，兰州兽 医研究所惠赠；猪 细小 病毒标准阳性血 清、猪 衣原 体标 准阳性血清，购 自湖北省畜牧普 压研究所；猪伪狂犬病 阴性【血 清，选 自从未发 生过 伪狂犬病 猪场的 2 月龄健康仔猪，并经 徽 量 中和试验检刹其 P R V 抗体为阴性。”1 3 主要试剂 和器材H RP，R Z一3 0，上海 伯奥生 物技术 公 司产品，批 号 9 4 1 2 0 2；过碘酸钠(N a l O)，北 京化 工厂生产 批号 8 3 0 1 1 0；牛血 清 白蛋 白(B S A)，购 自武 汉亚法 生 物技术 拓展公司；葡聚糖凝 胶 G 一 2 0 0(S e p h a d e x G一 2 0 0)上海 化学试 荆厂(P h a r ma d a进 口分装)P R V 抗体检测试剂 盒，购 自美 国 I DE X X 实验室 9 6孔酶标板，浙 江省玉环县康佳 医化器械厂 生产；D G一 3 0 2 2酶联免 疫检测仪 华东 电子管厂 生产 1 4 主要 溶液 的配制(1)包被液(O 0 5 mo l L p H9 6碳醢 盐缓 冲液)：无水 N a C O 1 5 9 g，Na H C O 2 9 3 g，蒸馏水溶解 后定容至1 0 0 0 mL。(2)洗涤液(p H7 4 P K S T)；N a C I 8 0 g，KC0 2 g，KHa P O 0 2 g，Na 2 HP O，l 2 H?O 2 9 g，吐 温 一 2 0 0 5 r a l，蒸馏水 溶解后再定容至l 0 o 0 mL。(3)封闭液：取 1 0 g牛血清 白蛋 白溶于 1 0 0 mI 洗 涤液。(4)磷酸盐 柠檬酸缓冲 液(p H5 0)：柠檬酸 1 9 2 g Na HP O 1 2 H 2 O 7 1 6 g，用蒸馏 收稿日期：2 0 0 0 一】2-】8 作者掩介：邱德赫(1 9 6 7 )男 t 讲师，博士 水 溶解后定容至1 0 0 0 mI 。(5)底物藩液：邻苯二胺(OP D)蚰 mg，溶于 1 0 0 mL磷 酸盐一 柠檬酸缓 冲液中 加 3 0 H 0：1 5 0 p 1 (现配 现用)。(6)终止液 2 mo 几 H 溶液。1 8 实验动4 钉体重 2 3 k g的健康成年 家兔，由华中农业 大学 实验动物场提供。1 6 P R V抗原 的制备 用 DME M 培 养基(禽 1 0 犊 牛血 清)培养 I B R S-2细胞，长成单 层后 倒掉 营养 液，按病 毒 与培 养 基 1 1 0的 比倒接种 P R V 鄂 A 株病 毒 3 7 C吸附 1 h，加 入 古 3 犊牛 血 清的 D ME M 维 持 液，置 3 7 C继 续培 养 当 7 细胞产生病变时收毒，2 0 C冻 融 3攻，6 0 0 0 r 2 1 i 1 4 C 离 心 3 0 mi n，去 沉 淀，按 每 1 0 0 mI 上 清 液 加 4 2 5 g (NH )S O 沉淀病毒，磁力搅拌器搅捧过 夜，6 0 0 0 r e m n 4 C 离心 3 0 rai n 弃上清，沉淀用少量生理 盐水溶解，装透析 袋用 生理盐水透析 除盐 直至检测不 出 NH；和 s o 一为止。以聚 乙二 醇(Mr 2 0 0 0 0)浓缩病 毒液 用紫外 分光 光度计 测定蛋 白 质含量后分装，置一7 O C冻存 对束 感染 P R V的 1 B R S 2细胞 作同样处理，作为细胞抗 原=1 7 兔抗猪 l g G 酶标抗体的制备 按文献：3，4 提取猪血清 l g G。取纯 化的猪 I g G与等量福 氏完全佐剂完全乳化后，在兔 颈部 皮下分 点注射 每周免疫 1攻，每次免疫前耳 静脉果 血分 离血清铡其效价 在第 6周，崩猪 l g G直接耳静 脉注射强化免 疫，当琼扩效 价选 1：3 2 时，即可放血分离血清 按文 献 3，4 方 珐粗提 兔抗 猪 I g G，经 S e p h a d e x G一 2 0 0过滤，收集峰 值 附 近的组分，浓缩 后测其蛋 白质含量 ，分装 置一7 0C保存 参 照文献 3 6 8 所述方法(过碘酸钠氧化法)并稍加改进标记 和纯化免抗猪 l g G 】3坷接 E L I s A最佳反应条件的选 择 酶 标抗 捧_ I。作浓度 的选择 按文献 3 所述方法进行。P R V 抗原最佳包被浓度和 血精最佳稀释度的选择：用 0 0 5mo I p H9 6碳酸盐缓冲液 将 P R V 抗 原 按】|2 0、l：4 0、：8 0、l l 6 0、l：3 2 0 l：6 4 0、1：1 2 8 0、1：2 5 6 0 稀释 分别加 到酶标板的 1 至 8行 每 孑 Ll l|一 3 7 C作用 1 h后，置 4 C冰箱 过夜，冼 涤和封 闭 后，将 P R V 阳性他 清作 l：l 0、1：2 0 1：4 0、1：8(3 1：1 6 0 稀 释后 t 分别 加 到酶标板第 1、3、5、?、9列，P R V 阴 性血清 作 同样处理加到酶标板第 2 6、8、1 0 列 第 1 、1 2列加血清 稀 释波(P B S T)作空 白对照，3 7 C作 用 l h，按 间接 E l 1 S A方 法进行 测定各 L 值，计算用性血 清与阴性血清 在不同抗 维普资讯 http:/ 1 5 0 中 国 兽 医 学 报2 0 0 2 年 3 月第 2 2 卷第 2 期C h i n J V e t S c i Ma r 2 o 0 2 V o 船No2 原 浓度下 的 D 值之差，以 D值 之差较 大的血清稀 释度 为 最适稀释度，以此稀 释度血清 DI g D 值之差对 应的 P RV抗 原稀 释度 为最佳 包被浓度。l 9间接 E L I S A方法 1 9 1 操作步骧(1)包被：将用 包被液稀 释的 P R V抗 原加 人酶 标板 孔 内 每孔 l 0 0 l ，3 7 e作 用 1 h后 置 4 C球 箱 过 夜。(2)洗 涤：弃去孔 内液体，用洗涤液洗 3次，每次 3 ml n，最 后 用 吸水 纸拍 干。(3)封闭：各 孔加入封 闭液 1 0 0 L-3 7 C作 用 1 h。(4)洗涤：同(2)。(5)加入待检血清；将 待检血 清用 洗 涤渡稀 释，每孔 1 0 0 【3 7 c 作 用 l h。(6)洗绦：弃去孔 内液 体，用洗 涤液洗 3戎，最后用吸永纸拍干。(7)加入酶标抗体 用 洗 涤液将 酶标抗体 按工作 浓度稀 释，每 孔 1 0 0 L，3 7 c作 用 1 h。(8)洗 涤：同(2)C 9)加入 底物(O P D-H：02)：每孔 1 0 0 L 室温避光显 色 2 5 rai n。(1 O)终止反应：每 孔加入 5 O 1 终 止 渡终止 反应。(儿)测定 D值 在酶联免疫检 测仪 4 9 O n r f l 波 长读 数。l _ 9 2 判 定标 准的确定取 6 0份经 中和试验 检测 为 P R V 抗 体阴性 的猪 血清，按 l：2 O稀 释后 进行 问接 E I I S A 测定 D啪值。规 定以 6 O份血清的平均 D 值()加 3倍标 准差(s)作为判定阴阳性的临界值 1 1 0间接 E L I S A敏 撼性试 验检 测 4 5份 猪血清 并 测出 P R V 抗体用性猪 血清 的教价 同美 国进 口试剂盘检测结 果比 较。进 口试剂盒操作步骤按说明进行。I 儿 间接 E L I S A特 异性试 验用 P R V抗 原包被 酶标 板，分别 加入猪细 小病毒、猪丧原体、猪 1 3蹄症()型)、猪瘟 等的 标 准阳性血清 f 同时用未感染 P RV 的 I B R S 一 2 细 胞抗原 包被 酶标 板，加入 P R V 标准阳性 血清，进行间接 EL S A 试验。1 1 2 间接 E L I S A重 复性试验对 l 6份猪血清样品 同样 条 件 下重 复检测 3 次，比较 3 次检测结果的阴阳性。1 1 3 间 接 E LI s A 的应 用 检测 蛄床送 检 猪血清 1 4 1 4 份，统计不 同抗体水平 酌血清数及其 占血清总数 的百 分比。2 结果 2 1 间接 E L I S A最佳 反应条 件酶标抗体 l：5 0 0 0 0 稀释 时 D值 仍 在 1 0以上，宴际应用 时选择 l：5 0 0 0 0 为工 作浓 度。当 P R V 抗原 1：6 4 O 稀释时，阴用性血 清的 D 值之 差仍 较大，从 l：l 2 8 O 开始 D 值之差 突然 碱小，故选 择 l：6 4 0 为 P R V抗 原最 佳包 被浓度(抗原 为 3 9 2 m g L)。当血清以 1 ：2 0稀释时，。值之差较大 1：4 O 则 D 啪值之差很 快碱小，所 以选择 l：2 0稀释为血清最佳稀 释度。2 2结 果判 定标 准 阴性血 清 n 值 上 限 一D 0 8 5 上3 0 0 3 8 3=0 2 0，故被 检血 清 D。o 2 0时判 为阳性，D 0 2 0 判 为阴性。2 3 间接 E L I S A的 敏 感性 在 4 5份血 清 中一 间 接 EL I S A 阳性 检出 翠为 9 5 6 (4 3 4 5)阴性 检出 率 4 4 (2 4 5)一 与 进 口试剂盒 的用性符合 率为 1 0 0 (4 3 4 3)t 胡性符 合率 l 0 O(2 2)，总符合率 1 0 0(4 5 4 5)间接 E L I S A效 价比进 口试剂盒效 价高 1 2十滴度，其 敏感 性比进 口试 剂盘高(见 表 1)2 4间接 E L I S A 的特异性用 P R V抗 原包被酶 标板检 测 猪细小病 毒、猪表原 体、猪瘟、口蹄疫(O型)4种标 准 阳性血 清 结果如表 2 它们 的 D螂值均低于临界值 0 2 O，证 明间接 E I r s A 特异性强。用正常 I B R s 一 2细胞抗原包被 酶标板，加入 P R V 标准阳性 血清，涮得 D u 值也低 于 0 2 O，说明 I B R S 一 2细 胞蛋 白与 P R V 标准阳性血清不存在交叉 反应。表 1闻接 E L I S A敏感性试验 血 j膏间摧进 m清问接进口 血 清问拄盎 号 EJ J I s A试剂盘 号 EL l S A试村盒 号 EL S A试剂盒 3 7 l 512 1 1 2 8 4 0 1 z 40 96 1 F1 024 注=一 表示阴性 结果 表 2 间接 E L I S A特 异性试验 2 5 间接 E L I S A的t 复性对 1 6 份送检猪血请重复检测 3 次，碉 阳性结果完全相同(见 表 3)。表 3间接 E 1 I S A重量牲试 验 注：表内数字为 值 2 6 间接 E L I S A 的应 用检 测临席送检 猪血清 l 4 l 4 份 结 在 1：3 2 1：5 1 2之问 的血 清 占被 检 血 清总 数 的 5 2 6 果 如表 4和 图 1。I 4 l 4 份 血清中，胡性 检 出率 为 2 9 (4 1(7 4 4 1 4 1 4)，总体来看，猪血清 内 P R V抗体水平井不 高。l 4 1 4)，阳性 检出率选 9 7 I (I 3 7 3 I 4 l 4)P R V 抗体 水平 维普资讯 http:/ 中 国 兽 医 学 报2 0 0 2年3 月第 2 2 卷第 2 期C h i n S c i Ma r 2 0 0 2 V o l 2 2 N o 2 1 5 1 注：“一”表示阴性结果 3 讨论 岳 1送 柠猪 血 请 梭 测 结 果 统 计 猪伪狂犬病是阻碍养猪业 发展 的主要疫病之一。猪感染 P R V 或免疫 之后 产生抗体水平 并不高 因此生 产上需 要敏 感的血清学方法来检测。间接 E I I S A 因敏感性高、特异性 强 等优点而被列 为国际贸易指定检测项 目之一 在 当前 我国 猪 伪狂犬病正处 在不断扩大蔓延 的形势下，国内未见有 关间 接 E L I S A检测 猪 伪狂犬病 血清抗 体的报道，而 进 口 E I I S A 试 剂盒 价格 昂贵 因此研 究我 国 自己的敏感性高、特 异性 强的 E I I s A技术 迫在眉 睫。参与 E L I S A的反应物较多 易受 多种 因素 干扰，我 们经过 选择 确 定 P R V抗 原 包被 浓度 为 3 9 2 mg L，酶标抗 体工 作 浓度 1：5 O 0 0 0，血 清晟佳 稀 释 度 1：2 0，从 特异性、敏感性及重复性结果看，这些 选择是 合理 的 间 接 E 1 I S A往往易 出现非特异性反 应。制备 P R V抗原 时，起初 用 B H K 细胞 增殖病毒，结 果出 现非 特 异性反 应较 多。后 来改用 I B R S 一 2细胞 就克 眠了这一缺点 这与用 B HK：细胞生产伪狂犬疫苗致 使猪血清中存在一定量的抗 B H K 细 胞抗体有关。因此，用来增殖 P R V 的细胞 种类 的选择也是影 响 非 特异 性 反应 的 一个 环节 间接 E L I S A 主要 检测 血 清 I g G，出现非特异性 反应可 能与 血清 中 I g M 的存在有关 因为 I g G与 l g M 分 子间存在交叉反应。，所以被控血 清稀 释度的 选择也不可 忽视。为 了考棱 问接 E L I S A 的敏感性，用 4 5份猪血 清 的检测 结果 与进 口试剂盒检测 结果 比较。表明 2种方法的 阳性 符合 率、阴性 符合率 及总符 台率均 为 1 0 0 。并 且间接 E l I S A 的 敏感性 比进 1：1 试剂盒略 高，且 特异性、重复性均很 好。如 果将 本方法试剂盒化 可 以取代进 1 试剂盘在国内推广使用 对临 床送检的1 4 1 4 份猪血 清检 测。阴性检出率 为 2 9 阳性 幢出 率高达 9 7 1 。这与本研究 的敏感 性试验结果相似。由于是 墒床发病怀疑 为伪 狂犬病 的送 检血 清，出现如此高的 P R V抗 体阳性率也不足为怪 国外进 1：1 酶标抗体的工作浓度一般在 l：1 0 0 0 左右 为 建立 间接 日 I S A，我们 按照常 规方法 并稍加改 进 研 制 的酶 标抗 体工作浓度为 1：5 0 0 0 0。远高于国内外同类产 品的工作 浓度，且使用效果 良好 这不 但为猪伪狂犬病 间接 E【J】S A 的 建立提供 了重 要的试剂，同时也为猪其他疾病舶间接 E l 1 S A 诊 断方 法的建立打下 了基础：参考文献 1 何启盖 陈焕春 邱德新。等 乳腔凝集试验检 猪伪在犬病血清 抗体的研究 J 中国兽医科技，1 蚰9 朋(I)：7 9 2 方六荣 陈缺春，何启盖，等 应用懒量 中和试验进 行猪伪狂犬病 血清学调查 J 中国畜禽传染病。1 9 9 8，2 0(3)：1 5 1 1 i 3 0 藏华生 新宴验病毒学 M 北京：中国学术 出版牡，1 9 8 3 2 4 1 2 70，4 2 5 4 3 9 黄桢 祥 压学病毒 学基 础显 宴验 技术 M北 京：科学出版 社 1 99 0 2 1 0 2 1 2，2 20 2 2 2 5：张龙翔，张庭芳 李令握，等 生化实验方法 和技术 M北 京：高 等教育出版杜。1 9 8 5 1 6 6 1 6 8 B _ 程安春，汪铭书，范伟兴。等 现代禽 病谤 断和防浩全书 M 成 都：四，I l 大学出版社，1 9 9 7 1 3 2 1 3 3 洗关心 周坡麟 现代免疫学实验技术 M 武汉：湖北科学技 术 出版 社，1 9 9 8 1 1 2 1 1 9 8 殷震，刘 景华 动物病 毒学 M 第 2版 北 京：科 学出版 社 1 9 9 7 4l 4 41 7 _ g 国 兽疫局 诊断试剂和疫苗标准手册 M青 岛：新 闻出版 局，1 9 9 6 l 5 9 1 61 D0 W。J 1 e k P Mi c h s l s k 1 EL I S A检 耐鸡传染性 贫血病 病毒抗体 中 的非特异性反应问题 J 国外兽 医学一畜禽传染病，1 9 9 7、1 7 (2)4 3 4 5 一 I 一 I 一 J I 一 I 一 一 _ 一 I 一 一 一 崎埘 _ 古 维普资讯 http:/ l 5 2 中国兽医学报 2 0 0 2 年3 月 第2 2 卷 第2 期 C h in J !：!：!：!De t e c t i o n of Po r c i ne S e r u m Ant i b o d y t o Ps e u d o r a b i e s Vi r u s b y En z y me Li nk e d I mmu n o s o r b e n t As s a y(ELI S A)QI u D e-x i n C HE N Hu a n c h u n，HE Qi g a i，WU B i n，C AO S h e n g b o(C o l l e g e o f An i ma l Hu s b a n d r y a n d Ve t e r i n a r y Me di c i n e，H u a z h o n g Ag r i c u l t u r a l Un i v e r s i t y，W u h a a 4 3 0 0 7 0，Ch i n a)Ab s t r a c t Th e p or c i n e p s e u d o r a b i e s v i r u s(P RV)o f t h e Ea s t r a i n wa s r e p r o d u c e d i n I B RS-2 p a s s a g e c e i l s，t h e s u p e r n a t a n t wa s p r e c i p i t a t e d b y(NHj)2 S 0 a n d c o n c e n t r a t e d b y PEG(Mr 2 0 0 0 0)，t h e n u s e d a s c o a t i n g a n t i g e n Th e r a b b i t a n t i p i g I g G o b t a 1 n ed f r o m t h e r a b b i t s i mmu n i z e d wi t h p u r i f i e d p o r c i n e s e r u m l g G wa s l a b e l l e d wi t h h o r s e r a d i s h p e r o x i d a s e(HRP)一 t h e h i g h t i t e r c o n j u g a t e wa s p r e p a r e d wi t h t h e wo r k c o n c e n t r a t i o n o f t h e c o n j u g a t e t o 1：5 O 0 0 0 T h e i n d i r e c t E L 1 S A me t h o d w fl 8 e s t a b I i s I d b y s e l e c t i“g t h e c 0 n d i t i 0 n s w i t h t h e c o a t i n g c o n c e n t r a t i o n o f P R V a n t i gen t o b e 3 9 2 mg L，t h e o p t i m a l d i l u t i o n o f s e r u m t o b e 1：2 0 I t r e v e a l e d a n e E a t i v e r e a e t i o n wi t h p os i t i v e s e r a o f p o r c i T t e p a r v o v i r u s(P PV)、s wi n e f e v e r v i r u s(S F V)、o t y p ef o o t a n d mo u t h v i r u s(FMDV)、c hl a my d i a、P RV s t a n d a r d n e g a t i v e s e r u m a n d s e r u m o f s wi n e u n i n f e c t ed b y PRV I t r v e a l e d a p u s i t i v e r e a c t i o n wi t h PRV s t a n d a r d p o s i t i v e s e r u m a n d s e r a f r o m p s e o d o r a b i e s s wi n e Th e t o t a l c o i n c i d e n c e r a t e o l t h e n e 口 a t i v e a n d p o s i t i v e r e a c t i o n r e a c h ed 1 0 0 (4 5 4 5)Th e r e$u l t s s h o we d t h a t t h e e s t a b l i s h ed i n d i r e c t ELI S A h a s t h e a d v a n-t a g e s s u c h a s h i g h s e n s i b i l i t y，s t r o n g s p e c i f i c i t y a n d g o o d r e p e a t a b i l i t y a n d c a n b e u s e d t o d e t e c t t h e p o r c i n e s e r u m a n t i b o d i e s t o PRV K wo r d s：p o r c i n e p s e u d o r a b i e s i i n d i r e c t E Ll S A a n t i b od i e s d e t e c t i o n 脂肪细胞发育的关键基因被发现 肥胖是影响人类健 康的一大疾病，随着肥胖病 人越来越 多，科学家正试图揖开脂肪细胞发育的分子机制。最近，2 个独立 的 研究组(分别 是美 国 H a r v a r dMe d i c a l S c h o o l 和 P f i z e r l n c的研究人员)发现 了在脂肪细胞发育 中趋关键 作用 的编码 P P AR g a m m a蛋 白(P P A Rg a mm a p r o t e i n)的基因。P P A R g a mma是一种细胞核激素受体，调控核内对细胞外信号产 生应答 基因的表选。脂 肪细胞 发育关键 蛋 白的确认，为抗 肥胖 的靶向药物设计 提供 了新 的依据 脂肪形成是一个两步分化的过程。首先是束分化 的间质细胞(me s e n c h y ma l c e l l s)分 化戚前脂肪细胞(p r e-a d i p o c y t e c e l 1)，然后 前 脂 肪 细胞 分 化 成脂 质充 盈 的脂肪 细 胞，而 P P A R g a mma是 在 前脂 肪 细 胞 变成 脂 肪 细 胞 过 程 中趋 关 键 作 用，缺 少 P P AR g a mma蛋 白时不能形成脂肪细 胞。而 P P AR g a mma基 因表达 出 2种不 同的同功 型蛋 白(i s o f o r m)，即 P P AR g a mma l 和 P P A R g a mma 2。目前对这 2 种 同功型蛋 白的功 能还不清楚，但单独 P P AR g a m ma 2 就对脂肪形成起着关键作用(郭志儒摘 自：WWW c s h 1 o r g 2 0 0 2 1 2 1)用哺乳动物细胞表达可形成高强度纤维的蜘蛛牵引丝蛋白 蜘蛛牵 引壁蛋 白以其超强 的弹性、强度和韧虚 以及超轻的重量受到了人们 的广泛关注 长期以来，们一 直想用 基因工程 的方法，制作出这种 超强 度的蛋 白纤 维。人们曾尝试在太肠 杆菌、酵母 和转基 因植 物中表达重组 的蜘蛛牵 引丝 蛋 白，但表选的重 组 蛋 白都不能形成如天然牵引丝蛋白形成舶那 种强 度的纤维。加拿 大 N e a B i o t e c h n o l o g l e s的研究人 员在 Sci e n c e 杂志报道，他 们首次用牛乳腺上 皮细胞和幼仓 鼠肾(B HK)细胞 表达的重组 蛋 白，在 定条件 下形成了高强 度的纤 维，从而 为人类开 发这 一有重大应用前景的产品迈出了重要一步。(郭志信摘 自：Sci e n c e，2 0 0 2，2 9 5：4 7 2 4 7 6，4 1 9 4 2 1)维普资讯 http:/