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2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体
课前预习学案
一、预习目标
预习动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程，了解单克隆抗体在医学实践中的应用，并说其应用实例。
“二、预习内容
㈠、动物细胞融合
1、概念：_______或_______动物细胞结合形一个细胞的过程，也称细胞杂交。
2、结果：形成___________；原理：细胞膜结构具有 性。
3、过程：两个或多个细胞______________________________。
4、意义：克服了___________的不亲和性，成为研究___________、___________、肿瘤和
_______________培育的重要手段。
㈡、单克隆抗体
1、抗体
⑴产生细胞：_________________。 ⑵成分：__________。
⑶特点：从__________中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
给小鼠注射特
定 培养骨髓瘤细胞

→
从________中分
离B淋巴细胞

→骨髓瘤细胞
未融合细胞
__________

__________
2、单克隆抗体的制备
(1)过程

能产生专一性抗体的杂交瘤细胞

小鼠体内培
养
体外培养

→
__________
抗体

⑵杂交瘤细胞的特点：____________________、____________________。
⑶单克隆抗体的优点：____________、____________、____________。
㈢、单克隆抗体的应用
1、作为诊断试剂，具有__________、__________、__________、__________的优点。
2、用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗_______、可制成___________。
三、问题导学
1、人体内抗体的种类是单一的还是多样的？产生这些抗体的浆细胞种类又是怎样的？
2、怎么确保体内会有某类抗体（如果需要能抵抗乙肝病毒的课题怎么处理）?

课内探究学案
一、学习目标
1、 掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。
2、 简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。
3、 了解单克隆抗体在医学实践中的应用，并说其应用实例。
学习重难点：单克隆抗体的制备
二、学习过程
(一) 动物细胞的融合
探究一：动物细胞的融合
1、植物体细胞杂交和动物细胞融合的主要区别是什么（过程、方法、结果）？

2、为什么可以使用灭活的病毒促进动物细胞融合？

3、不灭活的病毒能作为诱导剂吗？

知识阅读：阅读课本P52中的小字，了解一下动物细胞融合技术的发展简史。
（二）单克隆抗体
探究二：单克隆抗体制备的原理
1、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？抗体是从何来的？

2、能分泌抗体的B淋巴细胞有什么特点？

3、若要想获得大量的单一抗体，如何做呢？

4、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的，那么，怎样解决这一问题的呢？

5、小结以下内容：
◆ 利用____________________产生特异性抗体的功能。
◆ 利用____________________无限增殖的特性。
◆ 利用____________________技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。
◆ 利用____________________技术大量培养杂交瘤细胞。
探究三：单克隆抗体制备的过程
1、如何获得能分泌所需抗体B淋巴细胞？

2、 如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起时，会有几种融合方式（只考虑两两融合）？

3、 选择杂交瘤细胞的两步筛选的方法和目的各是什么？
第一次筛选目的： ，方法：
需要筛选的原因： 。
第二次筛选目的： ，方法：
需要筛选的原因： 。
4如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？（教师讲解为主）
融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞，但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔不超过一个细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那么上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。
探究四：单克隆抗体的应用
1、单克隆抗体的应用有哪些？
2、生物导弹的组成及优点：
练习提高
1、人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答：

(1)单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有________________________。
(2)若要分析杂交瘤细胞中染色体，可通过__________________________等过程制成装片，然后在显微镜下观察。杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是_______________________________________________在HAT培养基上存活的细胞可能包括________(填下列序号)。
①无抗体分泌的细胞　②抗HPV抗体的分泌细胞　③其他无关抗体的分泌细胞
(3)对于抗体检测呈________性的杂交克隆应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～10个/mL，每孔加入细胞稀释液________mL(填“0.1”“1”或“10”)，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。
(4)由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是__________。
(5)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的一种制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路：______________________________________________________________________
_____________________________________________________________________。
2、下图是制备分泌抗X(H1N1流感病毒)抗体的过程，根据图解回答问题：

(1)给小鼠注射抗原的目的是_________________ _______。
(2)在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有_____ _ ________________ _______的特性。
(3)由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了____ ____和____ ____的动物细胞工程技术手段。
(4)动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是还含有_____ ___。
(5)在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞分散开，以利于细胞融合，可用_____ ___ 处理离体组织细胞使之分散。
(6)图中有两次筛选过程，其中步骤④的目的是筛选出__ _____ _，步骤⑤⑥的目的是筛选出__________________ 。

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