还原糖_脂肪_蛋白质的鉴定.doc

一、教学目标
知识目标
识记：记住鉴定所用材料，学会选材，明白选材的依据。
理解：通过预习，初步理解实验的目的、原理和方法步骤，进一步归纳出生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质的鉴定原理。
能力目标
1.学会制备生物组织试样。
2.能正确选取鉴定试剂，并能进行规范操作。
3.明确观察对象，能正确说出鉴定过程中试样的颜色变化，并能用准确的语言解释实验现象，得出结论，填写实验报告册。
4.能熟练使用低倍镜、制作徒手切片、临时装片，学会规范使用高倍镜。
情感目标
养成科学的思考和发现问题，研究问题和解决问题的好习惯。
二、教学重点
掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
教师可事先配制好已知待测样品，如葡萄液、植物油滴、鸡蛋蛋白稀释液。让学生按要求加入相应试剂，观察颜色变化，从而让学生自己归纳出本实验的简单原理。
三、教学难点·
实验内容较多，实验时间长，必须周密安排，才能按时完成。
四、【1】实验原理
1.可溶性还原糖鉴定原理
生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。
斐林试剂为一定浓度的氢氧化钠和硫酸铜配制而成的淡蓝色Cu (OH) 2沉淀的悬浊液，葡萄糖溶液在加入斐林试剂后，在加热条件下还原为砖红色的沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反应式为：
CH2OH－（CHOH）4－CHO＋2Cu（OH）2 CH2OH－（CHOH）4－COOH＋Cu2O＋2H2O

用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色 棕色 砖红色沉淀
2.脂肪鉴定原理
苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ为一种橙黄色脂肪染色剂，苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。
3.蛋白质鉴定原理
将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。

双缩脲在碱性环境中能和硫酸铜结合成红紫色的络化物。蛋白质分子中含有的肽链与双缩脲结构相似，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。
【2】材料用具
实验材料：葡萄糖液、苹果组织液，植物油滴、浸泡过的花生种子或新鲜的花生种子，鸡蛋蛋白稀释液、黄豆组织液。
仪器：徒手切片刀，试管架，试管夹，大小烧杯，小量筒，滴管，酒精灯，三脚架，石棉网，火柴，载玻片，盖玻片，毛笔，吸水纸，显微镜。
试剂：斐林试剂，苏丹Ⅲ染液或苏丹Ⅳ染液，双缩脲试剂，体积分数为50%的酒精溶液，蒸馏水。
【3】实验指导
“生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定”实验，实际上是三个独立的实验。在实验中，如注意以下问题，效果则更好。
1.在做可溶性还原糖的鉴定实验中，一是选材最好是白色或近于白色的植物组织，这样可以避免材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。二是斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。
2.在做脂肪的鉴定实验中，切取花生子叶薄片，要求实验技能较高，不妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。
3.在做糖和蛋白质的实验时，鉴定之前需要留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色做比较，这样可增强说服力。
五、课时安排
1课时
六、教学过程
新课引入：我们在化学中学习过物质的鉴定，其原理是被鉴定的物质与所用的化学试剂要么发生颜色反应，要么产生沉淀，我们生物学上也采用此原理，在生物学中物质鉴定的理念是：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。
新课教学：（具体原理）
①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。（水浴加热）
②脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。（要显微镜观察）
③蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色反应。（要先加A液NaOH 溶液再加B液CuSO4 溶液）
教师提问：在我们高中生物中还学习过那些利用颜色反应鉴定物质的？用到了那些化学试剂？由产生了那些特定的颜色呢？
学生回答：略。如果回答不全教师补充：
④染色（质）体+ 醋酸洋红（或龙胆紫） 红色（或紫色）
⑤ 淀粉+碘液 蓝色
⑥ DNA+二苯胺试剂 蓝色（水浴加热）
⑦ 大肠杆菌+伊红-美蓝 产生紫色，略带金属光泽
今天，我们学习鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
（一）、还原糖的鉴定
1、还原糖的鉴定步骤:
选材： 苹果：洗净、去皮、切块，取5g放如研钵中
制备组织样液 研磨成浆：加石英砂，加5 ml水研磨
注入组织样液2ml 过滤：将玻璃漏斗插入试管中，漏斗上垫一层纱布
加斐林试剂：2ml（由斐林试剂甲液和乙液充分混合而成，不能分别加入）
水浴加热：煮沸2min
观察溶液颜色变化：浅蓝色→棕色→砖红色。

结论：还原糖与斐林试剂在加热煮沸的过程中生成砖红色沉淀
无色

蓝色
砖红色
加热2min
刚配制斐
林试剂2ml
组织样液2ml
开水

2、实验成功的要点：
①还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。
②斐林试剂要两液混合均匀且现配现用。
斐林试剂的配制过程示意：
斐林试剂

按一定比例混合均匀
斐林试剂甲液（ 0.1 g/ml的 NaOH 溶液）
斐林试剂乙液（ 0.05 g/ml的 CuSO4 溶液）
③在鉴定尿液中是否含有葡萄糖时还能用其他那些鉴定方法？
学生回答：还可以用斑氏试剂产生砖红色沉淀；及糖尿试纸据糖的由少到多产生浅蓝、浅绿、棕或深棕色。
（二）、脂肪的鉴定
1、脂肪的鉴定步骤:
取材：花生种子（浸泡3-4h）,将子叶削成薄片
取理想薄片
制片

在薄片上滴2-3滴苏丹Ⅲ染液
去浮色
制成临时装片
观察：先在低倍镜下，找到材料的脂肪滴，然后，转为高倍镜观察。
结论：细胞中的圆形脂肪小颗粒已经被染成橘黄色。
2、实验成功的要点：
①.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。
②该试验成功的关键是获得只含有单层细胞理想薄片。
③滴苏丹Ⅲ染液染液染色2-3min，时间不宜过长，以防细胞的其他部分被染色。
（三）、蛋白质的鉴定
1、            蛋白质的鉴定步骤：
呈色反应

选材：卵清稀释液或黄豆（浸泡1-2d） 豆浆 滤液
双缩脲试剂B液4 –5滴

双缩脲试剂A液2ml
组织样液 （或蛋白稀释液）2ml

紫色
无颜色变化

结论：蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应。
2、实验成功的要点：
①蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白稀释液)。
②双缩脲试剂的使用，一定要先加入A液(即0.1 g/ml的 NaOH 溶液)，再加入双缩脲试剂B液(即0.01 g/ml的 CuSO4 溶液)。
③还可设计一只加底物的试管，不加双缩脲试剂，进行空白对照，说明颜色反应的引起是蛋白质的存在与双缩脲试剂发生反应，而不是空气的氧化引起。
七、板书设计
一、操作要点及注意事项
1.往试管中加入试剂时，要使试管倾斜，用滴管沿试管壁加入。
2.斐林试剂A和B，必须混合后方可使用。
3.加热时试管口不要朝向实验者。
二、结论
试剂
已知待测样品
未知待测样品
颜色反应
斐林试剂
葡萄糖液
苹果组织液
砖红色
苏丹Ⅲ染液
植物油滴
花生子叶
橘黄色
双缩脲试剂
鸡蛋白稀释液
黄豆组织液
紫色
三、讨论
鉴定生物组织中含有糖、脂肪、蛋白质的根据是什么?