1、T淋巴细胞的分离、计数中山医学院免疫学教研室 实验目的和要求掌握 外周血淋巴细胞分离的方法外周血淋巴细胞分离的方法掌握 细胞计数的方法 实验原理 外周血中细胞种类外周血中细胞种类 细胞细胞密度密度 红细胞和多核白细胞 1.090 淋巴细胞和单核细胞 1.075-1.090 血小板 1.030-1.035 密度梯度离心法：利用一种密度介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种细胞各种细胞加以分离。本实验：淋巴细胞 实验方案抽取外周血分离淋巴细胞 细胞计数 实验材料1.肝素抗凝血肝素抗凝血2.Hanks液液3.淋巴细胞分离液淋巴细胞
2、分离液4.水平离心机5.显微镜6.细胞计数板细胞计数板实验步骤实验步骤肝素抗凝静脉血1.5ml加加1.5mlHanks液稀释液稀释置于2ml淋巴细胞分离液上(交界液面：一定交界液面：一定不要打乱不要打乱)稀释后的抗凝血淋巴细胞分离液用Hanks液洗、离心(1000rpm，5min)重复2次血浆血浆分层液分层液红细胞红细胞粒细胞粒细胞离心（2000rpm，25min）淋巴细胞与单淋巴细胞与单核细胞层核细胞层 用Hanks液重悬细胞取取10ul细胞悬液与细胞悬液与90ul白细胞白细胞计数液或台盼兰计数液混合计数液或台盼兰计数液混合 取10ul于细胞计数板上 细胞计数细胞计数板细胞计数数上不数下，数
3、左不数右。数上不数下，数左不数右。实验结果22个大方格内细胞总数单个核细胞浓度（细胞数/ml)10410=(稀释倍数）活细胞百分率=活细胞数细胞总数100%细胞活力检测：（死细胞被染成蓝色，活细胞不着色）细胞数量：u 纯度在90%以上u 淋巴细胞约占90-95%u 细胞收获率可达80-90%u 活细胞百分率在95%以上密度梯度离心法分离外周血单个核细胞：注意事项 稀释的肝素抗凝血，沿管壁轻轻叠加于分离液上，使两者形成一个清晰地界面。细胞经离心分层后，缓慢小心吸取，切勿打破形成的细胞层。细胞计数的仪器血细胞分析仪，临床常用血细胞分析仪，临床常用装有自动显微镜观察系统装有自动显微镜观察系统自动细胞计数仪自动细胞计数仪
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