HIV实验室检测ppt课件.pptx

1 1HIVHIV实验室检测实验室检测2 2HIV病原学及流行病学特点HIV实验室检测方法罗氏第四代HIV检测试剂特点目录3 3HIV病原学HIV人类免疫缺陷病毒，由包膜及核心组成，为RNA病毒HIV核心部分包括两条单股RNA链，核心结构蛋白及复制所需酶类（蛋白酶、逆转录酶、整合酶）HIV病毒逆转录酶无校对功能，故病毒变异性强，导致检测结果假阴性4 4HIV病原学病毒识别易感细胞膜表面受体，在逆转录酶作用下由RNA逆转录为DNA经DNA转录及翻译后形成蛋白外壳，将病毒RNA包裹其中，生成新的HIV主要侵入T淋巴细胞及神经细胞，导致细胞免疫功能缺陷，增加机会性感染5 5HIV流行病学全国呈低流行态势，部分地区疫情严重HIV主要分为两种HIV-1和HIV-2两型；HIV-1类为全球主要流行类型，分为M、O、N三个亚型组 6 6HIV传播途径1、传染源：病人及无症状携带者血液、精子、子宫和阴道分泌物、唾液、眼泪和乳汁等传播2、传播途径性传播：同行、异性、双性性接触母婴传播：经胎盘、分娩及哺乳时传播血液制品传播：共用针具静脉注射毒品，介入性医疗操作，纹身，耳洞等 7 7HIV感染自然史急性期艾滋病期无症状期初次感染HIV 2-4周，传染性最强主要以发热、关节痛、淋巴结肿大为特征可检出HIV及p24抗原，CD4+/CD8+倒置可持续6-8年，HIV在感染者体内不断复制，具有传染性可检测HIV及抗体，CD4+T淋巴续保逐渐下降HIV感染最终阶段，HIV血浆病毒载量明显升高，CD4+T淋巴细胞200个/ul主要表现为各种机会性感染及肿瘤8 8血清学检测血清学检测备注备注HIVHIV抗体抗体筛查试验：筛查试验：ELISA,CIA,ECLIAELISA,CIA,ECLIA确证试验：确证试验：WB,RIBAWB,RIBA仅测抗体仅测抗体HIV p24HIV p24抗原抗原早期灵敏度更高早期灵敏度更高HIVHIV抗原抗原+抗体抗体HIV Ag/Ab combi PT:ELISA,ECLIA,CIAHIV Ag/Ab combi PT:ELISA,ECLIA,CIA核酸检测核酸检测备注备注HIV RNA HIV RNA 定性定性辅助确证试验辅助确证试验TaqmanTaqman荧光实时荧光实时PCRPCR试剂试剂HIV RNA HIV RNA 定量定量辅助确证试验，监测治疗效辅助确证试验，监测治疗效果与疾病进展果与疾病进展靶核酸扩增试剂靶核酸扩增试剂淋巴细胞检淋巴细胞检测测备注备注CD4CD4+和和CD8CD8+HIVHIV感染分期，抗病毒治疗指针感染分期，抗病毒治疗指针CD4CD4+/CD8/CD8+比值下降比值下降HIV实验室指标初筛试验+确证试验9 9HIV检测流程全国艾滋病检测技术规范-2015年修订版检测流程初筛试验筛查复检1010HIV检测流程全国艾滋病检测技术规范-2015年修订版检测流程 确证试验确证仅能检测HIV-1，不能检测HIV-2和HIV Ag，灵敏度有限，窗口期长，易错过早期感染样本 试剂成本高，操作繁琐，结果判定主观1111HIV检测流程初始反应必须使用抗原和抗体联合检测的第四代免疫学方法，这类方法可以同时检测HIV-1抗体、HIV-2抗体和HIV p24抗原，检测出HIV-1、HIV-2感染和急性HIV-1感染，初始检测无反应性则无需进行进一步检测初始反应阳性标本需经过FDA批准的抗体鉴别试剂进行HIV-1和HIV-2抗体鉴别试验，结果以HIV-1抗体阳性、HIV-2抗体阳性、HIV抗体阳性或无法鉴别来解释初始检测有反应，抗体鉴别检测无反应性或不明确标本须经HIV-1核酸检测，HIV-1 NAT有反应性而抗体鉴别无反应性为急性HIV-1感染；HIV-1 NAT有反应性而抗体鉴别试验不明确为HIV-1感染；HIV-1 NAT无反应性而抗体鉴别不明确为假阳性结果联合试验鉴别试验核酸试验美国CDC推荐HIV检测流程 2014修订版1212HIV检测HIV感染后首先检测到HIV RNA第四代HIV检测试剂检测到HIV p24抗原，为抗原抗体联合检测第三代及其以前的试剂均为只检测HIV抗体HIV-1/2/O抗体HIV-1/2/O抗体+HIV p24抗原13133rd 代抗体检测核酸检测方法4th 代抗原抗体检测周年24356789101 2435 6017 8 9p24 抗原检测p24 抗原检测从初始感染后的时间 无症状期急性期第一个血清转换窗口期核酸检测方法第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 罗氏HIV试剂艾滋病期缩短检测窗口期，早期诊断2nd 代抗体检测1414SeroconversioSeroconversion npanelpanelElecsys Elecsys HIVHIVcombi combi PTPTElecsyElecsys HIVs HIVcombicombiADVIA ADVIA Centaur Centaur HIVHIVAg/Ab Ag/Ab combocomboARCHITECARCHITECT HIVT HIVAg/Ab Ag/Ab combocomboVIRONOSTVIRONOSTIKA HIV IKA HIV Univ-Form Univ-Form II plus OII plus OZhuhai Zhuhai Livzon Livzon anti-HIV anti-HIV SerodiaSerodia HIV1/2HIV1/2PRB 930PRB 9300 04 44 40 08 88 88 8PRB 958PRB 9588 8NANANANA8 8NANANANANANANabi 0759Nabi 07590 00 00 00 0NANA4 48 8Nabi 1436Nabi 14360 00 0NANA0 09 99 99 9Nabi 4009Nabi 40090 0NANA0 00 03 3NANANANANabi 9003Nabi 90036 66 6NANA6 610106 61010Nabi 25165Nabi 251650 00 00 00 0NANA4 44 4第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 罗氏HIV试剂缩短检测窗口期，早期诊断Elecsys HIV Combi PT阳转时间较PCR 方法平均晚2天，早于或等于其它方法与三种第三代检测方法相比，Elecsys Combi PT 是 1.2 days，优于Elecsys HIV combi(2.0 days),Zhuhai Livzon anti-HIV(6.2 days)and Serodia HIV1/2(7.8 days).与ADVIA Centaur相比,the Elecsys HIV combi PTs 的检出时间是 0 days，ADVIA Centarurs(1.0 days).与VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus O相比，Elecsys HIV combi PTs 是 1.5 days，VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus Os(7.5 days).1515罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 缩短检测窗口期，早期诊断5.478 days(Roche,data on file)1616罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT=诊断相关蛋白诊断相关蛋白p24gp120gp41/gp36p17（基质蛋白）RT(逆转录酶)RNAP24 抗原是HIV病毒的核心蛋白HIV-Ag的检测HIV-Ab的检测膜蛋白1717罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 包含包含检测物检测物功能功能抗原检测抗原检测p24 module p24 module 1 1p24 Agp24 Ag早期检测早期检测HIVHIV感染及终末期感染感染及终末期感染p24 module p24 module 2 2p24 Agp24 Ag检测检测OO亚型以及亚型以及HIV-2HIV-2抗体检测抗体检测gp41 module gp41 module 1 1HIV-1 IgM and IgGHIV-1 IgM and IgG 确保确保 HIV-1 HIV-1的检测高灵敏的检测高灵敏gp36 module gp36 module 1 1HIV-2 IgM and IgGHIV-2 IgM and IgG确保确保HIV-2HIV-2的检测高灵敏的检测高灵敏HIV-1 RTHIV-1 RTHIV-1 IgGHIV-1 IgG确保检测所有确保检测所有HIVHIV亚型的安全性亚型的安全性HIV-2 RTHIV-2 RTHIV-2 IgGHIV-2 IgG检测所有检测所有HIVHIV亚型的安全性亚型的安全性gp41 module gp41 module 2 2HIV-1 subtype OHIV-1 subtype O确保检测确保检测OO亚型的灵敏度亚型的灵敏度gp36 module gp36 module 2 2 HIV-2 IgGHIV-2 IgG 确保检测确保检测HIV-2HIV-2的备份的备份缓冲液缓冲液添加抗干扰物质添加抗干扰物质避免干扰避免干扰 可识别所有亚型1818罗氏HIV试剂可识别所有亚型第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 61984721919罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 9 min9 min9 min预处理裂解出p24抗原Ag-Ab复合物磁珠加入共27min孵育,测量池检测夹心法形成免疫复合物2020罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 早期感染血清转换期的检测不同时期HIV感染病人的检测高灵敏度不同亚型的检测2121ElecsysElecsys HIV HIV combi combi PTPTARCHITEARCHITECTCT HIV HIV Ag/Ab Ag/Ab combocomboADVIA ADVIA CentaurCentaur HIV HIV Ag/Ab Ag/Ab combocomboElecsysElecsys HIV HIV combicombiZhuhai Zhuhai Lizhu Lizhu anti-HIV anti-HIV EIAEIAVIRONOSVIRONOSTIKATIKA HIV Univ-HIV Univ-Form II Form II plus Oplus OTotal Total number number 4,4654,4652,7512,7511,0391,039675675675675703703IR(1 IR(1 s/co)s/co)515150505 51 10 02 2Confirmed Confirmed positivepositive454544440 00 00 02 2Number of Number of false false positives*positives*6 66 65 51 10 00 0Specificity Specificity(IR,1(IR,1 s/co)s/co)99.86%99.86%99.78%99.78%99.52%99.52%99.85%99.85%100.00%100.00%100.00%100.00%95%95%confidence confidence limit(IR,limit(IR,1 s/co)1 s/co)99.7199.71 99.9599.9599.5299.52 99.9299.9298.8898.88 99.8499.8499.1899.18 100.00100.0099.4599.45 100.00100.0099.4899.48 100.00100.00罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 高特异性2222罗氏HIV试剂排除类风湿因子、自身抗体、单克隆丙种球蛋白、EB病毒抗体、巨细胞病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体、流感疫苗等非特异性干扰、抗干扰能力强高特异性2323Case分享REN REN XX XX MenMen29 Y29 YDays since Days since first bleedfirst bleedHIV HIV Combi Combi PT(COI)PT(COI)HIV Combi HIV Combi(COI)(COI)ELISA ELISA(S/CO)(S/CO)HIV RNAHIV RNA（高精分析）（高精分析）WBWB01010 02011/08/02011/08/01 1/4.41/4.05 441/4.05(POS)(POS)0.04(NEG0.04(NEG)/P24 P24(不确定不确定)02021341342011/12/12011/12/12 2/4.49(POS)4.49(POS)0.01(NEG0.01(NEG)HIV RNAHIV RNA(NEG)(NEG)P24P24(不确定不确定)罗氏HIV Combi 试剂2次均出现阳性结果，P24抗原也均出现条带，但HIV-RNA分析病毒为阴性，最终报告为阴性，该患者实为淋巴瘤，分析时注意干扰因素淋巴瘤患者、孕妇、肿瘤病人、透析患者4种病人都可能出现HIV初筛阳性，需特别对待华西案例分析 CASE 12424Case分享华西案例分析 CASE 2WUXXWUXXMenMen30 Y30 YDays since Days since first bleedfirst bleedHIV Combi HIV Combi PT(COI)PT(COI)HIV HIV Combi Combi(COI)(COI)ELISA ELISA(S/CO)(S/CO)HIV RNAHIV RNA（高精分析）（高精分析）WBWB01010 0 2012/02/12012/02/10 051.15 51.15(POS)(POS)2.59(POS)2.59(POS)0.04 0.04(NEG)(NEG)/P24P24(不确定不确定)02021051052012/05/22012/05/25 5302.7(POS302.7(POS)/11.09 11.09(POS)(POS)1.8X101.8X105 5(POS)(POS)p24,p31p24,p31，p51,p51,p66,p66,gp120gp120，gp160gp160该患者第1次检测罗氏HIV Combi PT和HIV Combi均为阳性、ELISA为阴性、HIV-Ag检测阳性，患者不同意做确证实验，在105天后第2次采血，罗氏HIV Combi PT 和国产ELISA法检出阳性，WB分析检出较多抗原亚类，实验室作HIV-RNA高精分析证实病毒阳性，最终报告为阳性2525总结HIV感染自然史有急性期、无症状期、艾滋病期三个时期HIV检测需初筛试验和确证试验共同确认HIV RNA检测为最早识别HIV感染及辅助确诊的重要手段罗氏第四代HIV检测试剂缩短检测窗口期，可识别所有亚型2626Doing now what patients need next