检验质量对分析灵敏度(检出限)性能的要求.ppt

基础管理对分析灵敏度的要求基础管理对分析灵敏度的要求每个检测系统必须说明下列每个检测系统必须说明下列6 6个基本分析性能个基本分析性能:1.1.精密度。精密度。2.2.正确度。正确度。3.3.病人结果检测范围。病人结果检测范围。4.4.分析灵敏度分析灵敏度。5.5.分析特异性。分析特异性。6.6.参考范围。参考范围。(分析分析)检测范围表达的问题检测范围表达的问题ALTALT的检测范围为：的检测范围为：0 0400 U/L400 U/L。ALTALT的检测上限为：的检测上限为：400 U/L400 U/L。本试剂盒的检测限为本试剂盒的检测限为1.7 U/L1.7 U/L，所以，所以ALTALT的检测范围为：的检测范围为：1.71.7400 U/L400 U/L。本试剂盒的功能灵敏度为本试剂盒的功能灵敏度为4.5 U/L4.5 U/L，所，所以以ALTALT的检测范围为：的检测范围为：4.54.5400 U/L400 U/L 1.1.可可检检测测的的最最低低分分析析物物浓浓度度为为检检测测系系统统的的分分析析灵灵敏敏度度或称检出限。或称检出限。分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）毒毒品品检检验验;肿肿瘤瘤标标志志物物;特特定定蛋蛋白白;核核酸酸;激激素素;某某些些常常用用项项目目等等。需需要要有有可可检检出出的的最低浓度或某个量最低浓度或某个量.分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）2 2检检出出限限术术语语混混乱乱。厂厂商商使使用用各各种种词词语语，如：如：灵敏度灵敏度(Sensitivity)Sensitivity)，分析灵敏度分析灵敏度(Analytical sensitivity)Analytical sensitivity)，最小检出限最小检出限(Minimum detection limit)Minimum detection limit)，功能灵敏度功能灵敏度(Functional sensitivity)Functional sensitivity)，检出限度检出限度(Limit of detection)Limit of detection)，定量限度定量限度(Limit of quantitation)Limit of quantitation)等。等。分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）以下介绍的分析灵敏度分为以下介绍的分析灵敏度分为具具定性定性含义的检出低限；含义的检出低限；具具定量定量含义的生物检出限含义的生物检出限及功能灵敏度。及功能灵敏度。分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）临床检验的习惯临床检验的习惯一般的临床检验需要做空白、标准、和一般的临床检验需要做空白、标准、和测定。测定。基本上，空白、标准、和测定都只做一基本上，空白、标准、和测定都只做一份（一管）。份（一管）。实践说明，这三个检测都有变异，即：实践说明，这三个检测都有变异，即：“不稳定不稳定”。问题是：是否每个测定读数比空白读数问题是：是否每个测定读数比空白读数大的结果一定检出了标本中有分析物？大的结果一定检出了标本中有分析物？检检出出低低限限(LLD,Lower(LLD,Lower Limit Limit of of Detection)Detection)每每次次检检测测，总总是是做做一一个个空空白白样样品品。检检测测方方法法常常以以空空白白响响应应量量校校准准至至零零点点，再再检检测测各各个个检检测测样样品品的反应响应量。的反应响应量。定性的检出（低）限定性的检出（低）限 但但是是，空空白白响响应应量量也也有有波波动动.若若重重复复多多次次作作空空白白检检测测,，以以空空白白（响响应应量量）均均值值和和标标准准差差表表示示这这些些空空白白响响应应量量的的平平均均水水平平和和所所有有空空白白响响应应量量对对于于空空白白均均值值的的离离散散程度指标。程度指标。定性的检出（低）限定性的检出（低）限 在在确确定定方方法法性性能能或或绘绘制制标标准准曲曲线线时时，常常常常以以空空白白均均值值表表示示空空白白响响应应量量。实实际际工工作作时时，每每次次只只做做一一个个空空白白，各各有有50%50%的的可可能能性性，这这个个空空白白响响应应量量大大于于或或小小于于空空白白均均值。值。定性的检出（低）限定性的检出（低）限 当当空空白白响响应应量量小小于于空空白白均均值值，对对同同一一个个样样品品检检测测响响应应量量（未未扣扣除除空空白白响响应应量量），似似乎乎反反映映分分析析物物要要多多一一点点，检检测测方方法法好好象灵敏些。象灵敏些。定性的检出（低）限定性的检出（低）限 当当空空白白响响应应量量大大于于空空白白均均值值，似似乎乎原原先先可可以以检检测测出出来来的分析物现在检测不出了。的分析物现在检测不出了。定性的检出（低）限定性的检出（低）限因此，检测方法必须要说清楚：因此，检测方法必须要说清楚：究究竟竟怎怎样样才才算算是是可可检检测测出出来来的的分分析析物量？物量？标标准准曲曲线线是是从从零零开开始始的的，是是不不是是分分析物量可以从零开始析物量可以从零开始？这就检出低限要回答的问题。这就检出低限要回答的问题。定性的检出（低）限定性的检出（低）限样品检测响应信号样品检测响应信号95%检出低限99.7%样品检测响应信号样品检测响应信号报告无分析物报告无分析物报告有分析物报告有分析物报告有分析物报告有分析物报告无分析物报告无分析物 所所以以若若检检测测样样品品的的反反应应响响应应量较空白均值大，但相差量较空白均值大，但相差2 2或或3 3 以以下下的的，只只能能说说这这些些响响应应量量是是空空白白样样品品单单次次检检测测的的响响应应量量，样样品品内内没没有有分分析析物物，或或者者表示分析物量为零表示分析物量为零。定性的检出（低）限定性的检出（低）限通常估计通常估计95%95%或或99.7%99.7%的两种可能性：的两种可能性：95%95%可能性：可能性：LLD=X LLD=X空白空白+2s+2s空白空白 99.7%99.7%可能性：可能性：LLD=X LLD=X空白空白+3s+3s空白空白定性的检出（低）限定性的检出（低）限 检测低限定义为样品单次检测检测低限定义为样品单次检测 可以达到的非空白检测响应量对可以达到的非空白检测响应量对 应的分析物量。应的分析物量。检测系统或方法对小于或等于检测系统或方法对小于或等于 检测低限的分析物量只能报告检测低限的分析物量只能报告“无无 分析物检出分析物检出”。定性的检出（低）限定性的检出（低）限 注注意意:直直接接读读出出浓浓度度单单位位的的检检测测系系统统对对低低于于零零的的检检测测将将报报告告零零，其其分分布布不不是是正正态态的的，因因此此计计算算的的均均值值和和标标准准差差不不能能如如实实表达检测低限的真实情况。表达检测低限的真实情况。定性的检出（低）限定性的检出（低）限 检检测测响响应应须须以以初初始始值值表表示示，如如：吸吸光光度度、荧荧光光、等等，此此时时s s空空白白是是有效的。有效的。由由初初始始值值计计算算均均值值和和标标准准差差，然然后再转换成浓度单位。后再转换成浓度单位。定性的检出（低）限定性的检出（低）限 检检测测生生物物限限（BLD,Biologic BLD,Biologic Limit Limit of Detection,of Detection,）大大于于检检测测低低限限的的响响应应信信号号，方方法法还还不不能能正正确确报报告告定定量量结结果果。因因为为在在这这样样低低的的浓浓度度或或其其他他量量值值的的范范围围内内，单单次次检检测测样样品品的的反反应应响响应应量量重重复复性性较较差差。那那么么在在多多少少检检测测响响应应量量时时才才能较好地报告定量结果呢？能较好地报告定量结果呢？定量可报告（低）限定量可报告（低）限介绍两种方式介绍两种方式:检测生物限检测生物限和功能灵敏度。和功能灵敏度。定量可报告（低）限定量可报告（低）限对对多多个个近近于于检检测测限限浓浓度度的的样样品品（肯肯定定不不是是空空白白样样品品）作作重重复复检检测测，扣扣除除了了空空白白响响应应量量后后的的样样品品检测响应量以均值和标准差归纳。检测响应量以均值和标准差归纳。定量可报告（低）限定量可报告（低）限按按正正态态分分布布规规律律，单单次次检检测测样样品品具具有有的的响响应应量量有有95%95%或或9 99.7%9.7%的的可可能能性性和和检检测测响响应应量量均均值值相相差差2 2或或3 3倍倍的的响响应应量量标标准准差差。较较均值大大的的单次响应量肯定没问题；单次响应量肯定没问题；定量可报告（低）限定量可报告（低）限但但是是较较均均值值小小的的那那些些单单次次响响应应量量，若若和和检检测测低低限限（空空白白响响应应量量上上限限）交交叉叉，说说明明检检测测方方法法还还不不能能单单凭凭一一次次检检测测区区分分出出这这是是空空白白还还是是有有分分析析物。物。定量可报告（低）限定量可报告（低）限 只有样品检测响应量的只有样品检测响应量的95%95%或或99.7%99.7%单次检测量最低值也较检测低限单次检测量最低值也较检测低限(LLD)大，这样就可保证样品在任何大，这样就可保证样品在任何情况下，单次检测响应量一定不是情况下，单次检测响应量一定不是空白的响应量；样品的分析物浓度空白的响应量；样品的分析物浓度可以定量地报告出来。可以定量地报告出来。定量可报告（低）限定量可报告（低）限检测低限+2s-2s生物检测限示意图 在多个近于检测限的样品中，符在多个近于检测限的样品中，符合这样条件的最低分析物浓度（或合这样条件的最低分析物浓度（或其他量值）就是检测系统方法的生其他量值）就是检测系统方法的生物检测低限。物检测低限。定量可报告（低）限定量可报告（低）限生生物物检检测测低低限限定定义义为为：某某样样品品单单次次检检测测可可能能具具有有的的最最小小响响应应量量刚刚大大于于空空白白检检出出底底线线响响应应量量，该该样样品品内内含含有有的的分分析析物物浓度或其他量值为生物检测低限。浓度或其他量值为生物检测低限。度度量量时时，以以检检测测低低限限加加2 2或或3 3倍倍检检测测限限样样品品标标准准差差的的响响应应量量所所对对应应的的分分析析物物量量，确确定定为为为为检检测测系系统统或或方方法法可可定定量量报报告告分分析物的最低浓度或其他量值的限值。析物的最低浓度或其他量值的限值。定量可报告（低）限定量可报告（低）限生物检测低限（生物检测低限（BLDBLD）的具体的具体 度量方式为：度量方式为：95%95%的可能性：的可能性：BLD=LLD+2sBLD=LLD+2s检测限样品检测限样品99.7%99.7%的可能性：的可能性：BLD=LLD+3sBLD=LLD+3s检测限样品检测限样品定量可报告（低）限定量可报告（低）限本本词词语语较较完完善善地地表表示示实实际际样样品品的的定定量量检检测测限限度度。在在证证实实厂厂商商的的BLDBLD说说明明时时，应应使使检检测测限限样样品品的的浓浓度度和厂商的说明相同。和厂商的说明相同。定量可报告（低）限定量可报告（低）限三三.功功能能灵灵敏敏度度（Functional Functional Sensitivity,FSSensitivity,FS）功功能能灵灵敏敏度度定定义义为为：以以天天间间重重复复CVCV为为20%20%时时对对应应检检测测限限样样品品具具有有的的平平均均浓浓度度，确确定定检检测测系系统统或或方方法法可可定定量量报报告告分分析析物物的的最最低低浓浓度度或或其其他他量量值值的的限限值值。这这是是目目前前确确定定定定量量可可报报告告低低限限最最常常用用的的方式。方式。定量可报告（低）限功能灵敏度定量可报告（低）限功能灵敏度为了估计为了估计FSFS，须用多个检测限浓度，须用多个检测限浓度来确定在低浓度处的精密度表现，来确定在低浓度处的精密度表现，从中选择具有或近似从中选择具有或近似20%CV20%CV的某检的某检测限浓度，确定为方法的功能灵敏测限浓度，确定为方法的功能灵敏度。在证实厂商的度。在证实厂商的FSFS的说明时，使的说明时，使用的检测限样品浓度应和厂商的说用的检测限样品浓度应和厂商的说明相同。明相同。定量可报告（低）限功能灵敏度定量可报告（低）限功能灵敏度四实验须考虑的因素四实验须考虑的因素一般制备两种不同类型的样品。一般制备两种不同类型的样品。一一个个是是“空空白白”样样品品，即即不不含含有有分分析物，分析物浓度为零。析物，分析物浓度为零。第第二二个个是是”检检测测限限”样样品品，即即含含有有低浓度的分析物。低浓度的分析物。分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）在在有有些些场场合合下下，需需要要备备几几份份”检检测测限限”样样品品。空空白白和和检检测测限限样样品品由由检检验验方方法法作作重重复复检检测测，计计算算各各自自的的均均值值和和标标准准差差。不不同同的的检检测测限限由由空空白和检测限样品数据计算出来。白和检测限样品数据计算出来。分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）1.1.空空白白液液：一一份份空空白白液液用用作作空空白白检检测测，其其他他用用于于制制备备检检测测限限样样品品。理理想想的的空空白白液液应应具具有有和和检检验验的的病病人人样品相同的基体。样品相同的基体。分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）理理想想的的空空白白液液应应具具有有和和检检验验的的病病人人样样品品相相同同的的基基体体。常常使使用用检检测测系系统统的的系系列列校校准准品品中中的的“零零标标准准”作作为为空空白白。对对某某些些项项目目，可可使使用用术术后后已已无无某某疾疾病病的的病病人人样样品品（如如：前前列列腺腺瘤瘤术术后后病病人人的的PSAPSA血清）为空白样品。血清）为空白样品。分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）2.2.检出限样品：在证实某方法的检出限样品：在证实某方法的灵敏度性能时，对空白液加入分灵敏度性能时，对空白液加入分析物配制成检测样品。加入的分析物配制成检测样品。加入的分析物量应是厂商说明的检测浓度。析物量应是厂商说明的检测浓度。在建立检测限度时，应制备几份在建立检测限度时，应制备几份检测限样品，浓度在预期检测限检测限样品，浓度在预期检测限度的高低一些的范围内。度的高低一些的范围内。分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）重重复复检检测测数数：没没有有具具体体规规定定，但但常常推推荐荐做做2020次次。这这对对检检出出限限度度实实验验也是合理的。也是合理的。厂厂商商常常推推荐荐1010次次，是是减减少少开开支支。实验室常采纳作实验室常采纳作1010次。次。分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）3.3.实验需要的时间：如果主要从实验需要的时间：如果主要从空白液的重复性了解检测低限，空白液的重复性了解检测低限，常常就做批内或短期实验。如果常常就做批内或短期实验。如果主要从主要从“检出限检出限”样品的重复性样品的重复性了解定量的检出限，推荐作较长了解定量的检出限，推荐作较长时间的实验，代表天间测定性能。时间的实验，代表天间测定性能。实际就做实际就做1010次检测（次检测（1010天）。天）。分析灵敏度（检出限）分析灵敏度（检出限）TSHTSH的功能灵敏度的功能灵敏度摘自：美国摘自：美国NACBNACB文件文件 甲状腺病的诊断和监视对实验室的甲状腺病的诊断和监视对实验室的要求。要求。NACB NACB美国临床生物化学学会。是美国临床生物化学学会。是 美国临床化学学会（美国临床化学学会（AACCAACC）的高层）的高层学会。学会。TSHTSH的功能灵敏度的功能灵敏度历史上，血清历史上，血清TSHTSH方法的方法的“质量质量”由临由临床确定能否将正常水平（床确定能否将正常水平（0.40.44.0 4.0 mIU/LmIU/L）和典型）和典型GravesGraves甲状腺毒症的特甲状腺毒症的特别低的别低的TSHTSH浓度（浓度（0.01 mIU/L0.01 mIU/L）区分）区分出来。目前，大多出来。目前，大多TSHTSH方法说明检出限方法说明检出限在在0.02 mIU/L0.02 mIU/L或更小的水平（或更小的水平（“第三代第三代”方法）。方法）。现状现状许多厂商滥用许多厂商滥用“分析灵敏度分析灵敏度”来确定来确定TSHTSH检测灵敏度。以检测灵敏度。以“0”“0”校准品批内精校准品批内精密度结果（检出低限）代表，从概念上密度结果（检出低限）代表，从概念上模糊了定性检出低限和定量可报告低限模糊了定性检出低限和定量可报告低限的差别。检出低限并不代表临床实际定的差别。检出低限并不代表临床实际定量可以检测出的灵敏度。应使用量可以检测出的灵敏度。应使用“功能功能灵敏度灵敏度”。功能灵敏度用于确定检测系统可报告的功能灵敏度用于确定检测系统可报告的最低限值。最低限值。使用功能灵敏度的好处使用功能灵敏度的好处以功能灵敏度为最小的定量检出限以功能灵敏度为最小的定量检出限很保险，确保很保险，确保TSHTSH结果的报告不会是结果的报告不会是假的。假的。天间天间CVCV为为2020大致上是诊断实验要大致上是诊断实验要求的最大不精密度。求的最大不精密度。TSHTSH的功能灵敏度的功能灵敏度功能灵敏度的定义：确定检测方法功能灵敏度的定义：确定检测方法在定量上的最低检出限。在定量上的最低检出限。TSHTSH的功能灵敏度为：按照推荐方案的功能灵敏度为：按照推荐方案确定的天间确定的天间CVCV为为2020相应的相应的TSHTSH浓度。浓度。TSHTSH功能灵敏度和天间精密度的方案功能灵敏度和天间精密度的方案对一批内含对一批内含TSHTSH在分析范围的人在分析范围的人混合血清进行至少混合血清进行至少1010批批天间检测天间检测。混合血清中的最低混合血清中的最低TSHTSH浓度应高浓度应高于检测限于检测限1010；最高；最高TSHTSH浓度的浓度的应是分析范围高限的应是分析范围高限的9090。TSHTSH功能灵敏度的实验要求功能灵敏度的实验要求文件导则文件导则2020用最高浓度样品和最低浓度样品进行交用最高浓度样品和最低浓度样品进行交叉污染的评价。叉污染的评价。按照检测病人标本的方式进行实验（即：按照检测病人标本的方式进行实验（即：单次或双份检测）。单次或双份检测）。仪器操作人员不知道每批样品安排的顺仪器操作人员不知道每批样品安排的顺序。序。批间间隔的时间应和日常检测安排一致批间间隔的时间应和日常检测安排一致（即：例如平时每（即：例如平时每6 68 8周对门诊病人作周对门诊病人作TSHTSH检测，则批间间隔为检测，则批间间隔为6 68 8周）。周）。TSHTSH功能灵敏度的实验要求功能灵敏度的实验要求文件导则文件导则2020在实验评价中至少使用在实验评价中至少使用2 2批不同批号的批不同批号的试剂，进行试剂，进行2 2次仪器校准。次仪器校准。如果在如果在2 2个相似仪器上进行相同的检测，个相似仪器上进行相同的检测，应定期对每台仪器进行双盲检测，以确应定期对每台仪器进行双盲检测，以确认相关。认相关。影响影响TSHTSH检测方法不精密度的因素检测方法不精密度的因素病人标本和标准稀释液间的基体差病人标本和标准稀释液间的基体差异。异。精密度随使用时间的变化。精密度随使用时间的变化。厂商提供试剂批间的变异。厂商提供试剂批间的变异。仪器校准和操作人员间的变异。仪器校准和操作人员间的变异。高低标本间的交叉污染。高低标本间的交叉污染。TSHTSH检测的注意点检测的注意点 文件导则文件导则2121功能灵敏度是选择方法最重要的性能治功能灵敏度是选择方法最重要的性能治标。其它如：仪器、保温时间、费用、标。其它如：仪器、保温时间、费用、和技术支持等虽然重要，但是属第二位和技术支持等虽然重要，但是属第二位考虑。考虑。实验室在确定校准周期时，应以确保功实验室在确定校准周期时，应以确保功能灵敏度为目标。也许会出现重新校准能灵敏度为目标。也许会出现重新校准频率比厂商推荐的要高。频率比厂商推荐的要高。TSHTSH检测的注意点检测的注意点 文件导则文件导则2121选择选择TSHTSH方法具有功能灵敏度方法具有功能灵敏度0.02 0.02 mIU/LmIU/L。没有公认的方法来判断各个产品间灵敏没有公认的方法来判断各个产品间灵敏度的差异。所以，由实验室按照导则度的差异。所以，由实验室按照导则2020，自行确定选择产品的功能灵敏度。未，自行确定选择产品的功能灵敏度。未经评价，使用了不灵敏的产品，引入假经评价，使用了不灵敏的产品，引入假结果多，不假的少，检测的价值被差的结果多，不假的少，检测的价值被差的方法削弱了。方法削弱了。AxSYM 3rd gen TSHArchitect 4th gen TSH定量功能灵敏度限值定量功能灵敏度限值酸性磷酸酶的定量限值为0.51 U/LAbbott新新Troponin-I的功能灵敏度的功能灵敏度CV为为10的的cTnI值为：值为：0.032 m mg/L直接胆红素的性能特性直接胆红素的性能特性线性 线性上限为599 mmol/L检测限 为0.17 mmol/L（0.01 mg/dl）定量限值（功能灵敏度）1.88 mmol/L(0.11 mg/dl)1.88 mmol/L（0.11 mg/dl）ALTALT检测的性能特性检测的性能特性线性线性 上限达943.7 U/L检测限检测限 1.8 U/L定量限值（功能灵敏度）定量限值（功能灵敏度）4.5 U/L4.5 U/L感谢！