过敏原血清学检测课件.ppt

EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。目录一.过敏原概述二.过敏原常见方法学比较三.欧蒙过敏原产品特性及印迹法的特点四.过敏原体外检测常见问题及解答EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。一、过敏原概述一、过敏原概述l1906年年von Piguet提出了提出了allergy一词。其概念为：机体对抗原刺激产生一词。其概念为：机体对抗原刺激产生的一种的一种“改变了反应性改变了反应性”的状态。这种状态可能是保护性的，即产生的状态。这种状态可能是保护性的，即产生了免疫力；也可能是破坏性的，即产生了超敏反应。了免疫力；也可能是破坏性的，即产生了超敏反应。l超敏反应是机体对某抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生超敏反应是机体对某抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。过敏原过敏原 吸入过敏原吸入过敏原食物过敏原食物过敏原接触过敏原接触过敏原输注过敏原输注过敏原空气中的吸入过敏原空气中的吸入过敏原(例如例如.植物花粉植物花粉,动物毛发动物毛发,室内灰尘或虫螨等室内灰尘或虫螨等)EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。过敏原过敏原 通过胃肠道吸收通过胃肠道吸收(例如例如.鱼、肉、蛋、鱼、肉、蛋、坚果和蔬菜等坚果和蔬菜等)吸入过敏原吸入过敏原食物过敏原食物过敏原接触过敏原接触过敏原输注过敏原输注过敏原EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。过敏原过敏原 皮肤接触（例如：金属饰品、化妆品和生活日用品等）皮肤接触（例如：金属饰品、化妆品和生活日用品等）吸入过敏原吸入过敏原食物过敏原食物过敏原接触过敏原接触过敏原输注过敏原输注过敏原EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。过敏原过敏原 直接输入体内直接输入体内(例如：昆虫或动物的毒液例如：昆虫或动物的毒液,注射类药品等注射类药品等)吸入过敏原吸入过敏原食物过敏原食物过敏原接触过敏原接触过敏原输注过敏原输注过敏原EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。过敏的损害过敏的损害过敏是以损害粘膜为主要表现的l过敏性结膜炎（眼粘膜）l过敏性鼻炎（鼻粘膜）l过敏性哮喘（气管粘膜）l过敏性紫癜（皮肤粘膜）l过敏性肠绞痛（肠粘膜）l过敏性紫癜肾炎（肾内粘膜）l心脏有粘膜组织，心脏是肯定会受到损 。心肌酶升高，特别是特异性的CK-MB（肌酸激酶同工酶）。CK-MB分布在心肌和结缔组织。心电图表现主要是心肌膜的损害，表现为传导阻滞。EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。1.皮肤科（30）：急慢性荨麻疹、异位性皮炎等 2.耳鼻咽喉科（30）：以过敏性鼻炎为主 3.内科（25）：以哮喘、过敏性肺泡炎为主 4.小儿科（15）：儿童变态反应病的诊治 5.变态反应专科（参考范围参考范围 可能存在过敏反应可能存在过敏反应 16岁岁 100 IU/ml EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。总总IgE ELISA:结果解释结果解释1.总总IgE 超出参考范围大多数是由于过敏反应导致超出参考范围大多数是由于过敏反应导致例外例外:寄生虫病寄生虫病;免疫抑制免疫抑制;HIV;重度烧伤重度烧伤2.临床相关特异性临床相关特异性IgE结果结果与总与总IgE相关的特异性相关的特异性IgE浓度越高，患者临床过敏反应的可能浓度越高，患者临床过敏反应的可能性就越大性就越大.EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。总总IgE ELISA:结果解释举例结果解释举例特异性特异性 IgE总总IgE特异性特异性 IgE5 IU/ml(kU/l)总总IgE 200 IU/ml患者患者1特异性特异性 IgE5 IU/ml(kU/l)总总IgE 25 IU/ml患者患者2EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。总总IgE ELISA:总结总结简单和快捷的实验操作简单和快捷的实验操作低检出限低检出限(1IU/ml)高重复性高重复性(批内实验批内实验:5%)通过通过4份标准品计算定量结果份标准品计算定量结果标准品采用标准品采用WHO标准标准通过通过ELISA工作站实现自动分析工作站实现自动分析EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。特异性特异性 IgE EUROLINEALLERCOATTM6DP 3713 E 吸入性及食物性过敏原吸入性及食物性过敏原EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。特异性特异性 IgEEUROLINE简便和快捷的实验操作简便和快捷的实验操作仅需少量样本仅需少量样本(过夜温育过夜温育)结果基于广泛应用的结果基于广泛应用的EAST分级系统分级系统与与 Pharmacia CAP具有良好的相关性具有良好的相关性自动温育自动温育 通过通过EUROLineScan程序实现结果的自动判读程序实现结果的自动判读EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。类别类别浓度浓度kU/lsIgE水平水平临床意义临床意义0100特高（特高（+）特重特重特异性特异性IgE分级标准及临床意义分级标准及临床意义EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。特异性特异性 IgEEUROLINE 血清温育血清温育颜色反应颜色反应色原色原底物底物膜条膜条抗原提取物抗原提取物温育温育60 min 二抗反应二抗反应10 min 底物温育底物温育AP标记二抗标记二抗AKP 清洗清洗 3 x 5min 清洗清洗 3 x 5min自动化判读或肉眼观察自动化判读或肉眼观察60 min未稀释未稀释过夜过夜1:11 稀释稀释EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。EUROLINE检测系统检测系统EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。结果判读结果判读:EUROLineScan特异性特异性 IgE欧蒙印迹法自动化欧蒙印迹法自动化EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。欧蒙印迹法过敏原谱欧蒙印迹法过敏原谱中欧中欧吸入吸入儿童吸入儿童吸入食物食物特应性特应性交叉反应交叉反应儿童儿童昆虫毒液昆虫毒液亚洲亚洲中国吸入中国吸入中国食物中国食物中国特应性中国特应性韩国吸入韩国吸入1+2韩国食物韩国食物1+2东南亚吸入东南亚吸入东南亚食物东南亚食物地中海地中海中东中东地中海吸入地中海吸入中东吸入中东吸入中东食物中东食物Inhal.Screen AEFood Screen AE海湾吸入海湾吸入海湾食物海湾食物EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。特异性特异性 IgE 欧蒙印迹法各种组合欧蒙印迹法各种组合 为不同过敏原组合提供可能为不同过敏原组合提供可能:在一条膜条上包被在一条膜条上包被36种以上过敏原种以上过敏原 大约大约170种以上过敏原种以上过敏原 满足新过敏原组合的需要满足新过敏原组合的需要:市场信息反馈市场信息反馈 目标过敏原的定位和其它参数确认目标过敏原的定位和其它参数确认 提供特殊过敏原的原材料提供特殊过敏原的原材料 提供阳性血清提供阳性血清EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。二、二、过敏原常见方法学比较n既往病史既往病史n皮试皮试:刺试刺试,抓试抓试,皮外试皮外试,皮内试皮内试n实验室检查实验室检查:IgE检测检测 CAST(细胞抗原刺激实验细胞抗原刺激实验)n激发试验激发试验:(金标准金标准)-鼻腔激发试验鼻腔激发试验 -双盲稳定剂控制的食物刺激试验双盲稳定剂控制的食物刺激试验(DBPCFC)EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。二、二、过敏原常见方法学比较EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。二、二、过敏原常见方法学比较类别类别方法方法特点特点体内皮肤针刺试验强烈反应时容易互相混淆结果（皮内试验点、刺试验或价格便宜、快速，但对过敏原的质量控制有严格要求，患者痛苦，刺痕试验）无法避免对于高过敏体质患者具有一定生命危险性的问题同时试验多种抗原时，容易不同的抗原液交叉混合斑贴试验斑贴试验主要是检测型变态反应，敏感程度不太高。鼻粘膜激发试验（SNPT）患者试验过程较痛苦无法避免对于高过敏体质患者具有一定生命危险性的问题操作等较繁琐食物激发试验食物过敏检测金标准（DBPCFC）对于食物过敏反应严重的患者较危险操作麻烦，需要病床观察患者试验过程较痛苦体外血清学检验对患者来说使用安全，适合儿童，可避免强烈的皮肤反应避免其它皮肤病造成的误判使用方面，少量血清一次即可完成数十种种过敏原的检测适用于对食物过敏的患者，效应器官不在皮肤适用于用抗组胺类或激素类治疗而不能停药者生物共振无创、快速、检测范围广、无创伤性、但该技术缺乏科学依据，容易受到人为信号的干扰，难以建立严格的标准EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。体外诊断的优势体外诊断的优势 对患者来说不存在风险对患者来说不存在风险 尤其适合尤其适合5岁以下儿童，可避免强烈的皮肤反应岁以下儿童，可避免强烈的皮肤反应 与其它皮肤病区别与其它皮肤病区别 不需附加其它药物不需附加其它药物 适合无法进行皮试的食物过敏原的检查适合无法进行皮试的食物过敏原的检查EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。二、欧蒙过敏原产品特性及印迹法特点l同类产品中单一膜条内过敏原数量最多同类产品中单一膜条内过敏原数量最多l不添加任何增效剂不添加任何增效剂l针对中国人设计的过敏原针对中国人设计的过敏原l对患者来说不存在风险对患者来说不存在风险l不需停止服用抗组胺药物不需停止服用抗组胺药物l独家包被有独家包被有CCD指示带，解释交叉反应的假阳性结果指示带，解释交叉反应的假阳性结果l所有厂家中样本使用体积最小（所有厂家中样本使用体积最小（100ul）l快速测试过敏原，整个实验完成仅需要快速测试过敏原，整个实验完成仅需要2.5-3小时小时欧蒙过敏原体外诊断的优势EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。同类产品中单一膜条内过敏原数量最多同类产品中单一膜条内过敏原数量最多l可一次检测20大项，30小项过敏原EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。不添加任何增效剂不添加任何增效剂l现在有些产品为了增大反应强度，在产品中添加增效剂，加大了反应强度。导致了判定结果与临床有不符现象。l欧蒙产品不添加任何增效剂，本着科学、实事求是的精神真实、准确的判定实验结果。EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。针对中国人设计的过敏原针对中国人设计的过敏原l过敏原采集于中国，提高特异性检出率lDP3713-1601E（中国组合）针对中国人设计的组合EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。对患者来说不存在风险对患者来说不存在风险l无痛检测：通过血清中IgE抗体与过敏原结合，测试过敏反应l避免了人体与过敏原直接反应导致的风险用点刺针穿过液滴，轻轻刺入皮内 将可疑致敏物质敷贴于患者皮肤上斑贴试验斑贴试验点刺试验点刺试验EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。不需停止服用抗组胺药物不需停止服用抗组胺药物l以往过敏原检测需要患者体检停止服用抗组胺药物。以便提高试验的准确性。l 欧蒙过敏原检测试剂无需患者停止服用抗组胺药物。（常用的有苯海拉明、异丙臻、扑尔敏、赛庚啶、息斯敏、特非拉丁等）EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。独家包被有独家包被有CCD指示带指示带l独家包被有CCD指示带，解释交叉反应的假阳性结果lCCD是“交叉反应性碳水化合物决定因子”lCCD存在于多种植物性或动物源性的过敏原中，由于结果相似性导致一些独特的交叉反应出现lCCD的检测对于患者提示：虽然对于某些过敏原没有临床症状，但是在过敏进程中对有些具有交叉反应的过敏原可能会有改变，所以对于患者又针对性的预防交叉过敏反应，有着重要的临床指导意义。EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。欧蒙印迹法的特点一次可以检测多项过敏原8-20项，常见食物及吸入组合，如葎草，艾蒿，豚草，常见树花粉，霉菌，尘螨，猫毛，狗毛，蟑螂，鸡蛋，牛奶，鱼，虾，蟹，花生，大豆等。适合体检筛查。采血量少100-1000100-1000微升血清可以检测多项，特别适合儿童患者。性价比高一次可得到多种过敏原信息谱。适合各类人群一定范围内脂血、溶血、黄疸血清或血浆样本对检测结果无影响。EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。有配套仪器软件可以省时省力全自动操作，判读软件，2.5h出结果。无需暗室孵育。半定量可以直接获得结果可以直接用肉眼判读，也可以用欧蒙配套软 件判读。EAST 分级并有数字及单位结果。易于保存原始数据结果样式可灵活设计。结果可转为excel 表，方便科研。欧蒙印迹法的特点EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。四、过敏原体外检测常见问题及解答四、过敏原体外检测常见问题及解答EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。Q1:为何患者为何患者sIgE结果阳性与临床表现不符结果阳性与临床表现不符EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。过敏原过敏原-特异性特异性 IgEEUROLINE 产品调整产品调整l提供提供CCD检测指标检测指标EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。何谓何谓 CCDs?CCD 是是“Crossreactive Carbohydrate Determinants（交叉反应性碳水化合（交叉反应性碳水化合物决定子）物决定子）”的英文缩写的英文缩写.该结构为结合于糖蛋白该结构为结合于糖蛋白N末端的多聚糖。依据糖基化末端的多聚糖。依据糖基化作用的不同而产生不同的结构。作用的不同而产生不同的结构。举例:MMXF(Man1-6(Man1-3)(Xyl1-2)Man1-4GlcNAc1-4(Fuc1-3)GlcNAc)EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。CCDs 在自然界中的存在在自然界中的存在?CCDs 存在于多种植物性或动物源性的过敏原中。由于结构的相似性导致存在于多种植物性或动物源性的过敏原中。由于结构的相似性导致一些独特的交叉反应出现。一些独特的交叉反应出现。典型含典型含CCD结构的过敏原结构的过敏原:植物花粉植物花粉 植物性食物植物性食物 植物乳胶植物乳胶 昆虫毒液昆虫毒液EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。抗抗CCD IgE 结果的临床价值结果的临床价值?大部分糖蛋白仅含有一个大部分糖蛋白仅含有一个IgE结合的多聚糖，因此无法促进结合有结合的多聚糖，因此无法促进结合有IgE抗抗体的肥大细胞表面受体形成二聚体化，进而无法活化肥大细胞发生脱核及释体的肥大细胞表面受体形成二聚体化，进而无法活化肥大细胞发生脱核及释放组胺的作用，因此对于仅为抗放组胺的作用，因此对于仅为抗CCD IgE抗体阳性的患者而言往往无临床症抗体阳性的患者而言往往无临床症状的表现。状的表现。EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。在何种情况下应排除抗在何种情况下应排除抗CCD IgE 的干扰的干扰?当体外实验结果与临床症状或皮试结果不符的情况下当体外实验结果与临床症状或皮试结果不符的情况下.当某一患者出现多个特异性当某一患者出现多个特异性IgE结果阳性时结果阳性时举例举例:花生花生:特异性特异性 IgE 阳性但并不表现出临床症状阳性但并不表现出临床症状出现多个食物相关的阳性结果但缺乏临床症状表现出现多个食物相关的阳性结果但缺乏临床症状表现.植物乳胶植物乳胶:针对花粉敏感的患者抗植物乳胶阳性，但无相关接触史。针对花粉敏感的患者抗植物乳胶阳性，但无相关接触史。昆虫毒液昆虫毒液:针对蜜蜂和马蜂特异性针对蜜蜂和马蜂特异性IgE阳性的患者可能存在交叉反应。阳性的患者可能存在交叉反应。EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。Q2:如何解释总如何解释总IgE结果与结果与sIgE结果不符结果不符EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。解释解释1总总IgE浓度与浓度与sIgE水平水平并不存在必然相关性并不存在必然相关性l约约20-30%超敏疾病患者特异性超敏疾病患者特异性IgE可能较高，但总可能较高，但总IgE可维持正常，可维持正常，甚至低于几何均值。甚至低于几何均值。l如患者仅对牛奶高度过敏，其特异性如患者仅对牛奶高度过敏，其特异性IgE为为18kU/L。对于特异性。对于特异性IgE而言，该结果已属于严重过敏（而言，该结果已属于严重过敏（IV级）的范畴。从理论上讲，级）的范畴。从理论上讲，该患者的总该患者的总IgE也应该为也应该为18kU/L。而对于总。而对于总IgE来说，这个结果是来说，这个结果是很低的；很低的；l总总IgE升高并不一定是超敏反应，而过敏患者总升高并不一定是超敏反应，而过敏患者总IgE也不总是一定也不总是一定升高。这一要点在评价总升高。这一要点在评价总IgE检测结果时非常重要。检测结果时非常重要。EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。结果解释结果解释1、不同批号产品所使用过敏原提取物的成分可能不同；、不同批号产品所使用过敏原提取物的成分可能不同；2、针对过敏原检测阳性结果、针对过敏原检测阳性结果 若临床存在明显过敏症状，则应明确判断阳性；若临床存在明显过敏症状，则应明确判断阳性；Q3:针对同一过敏原检测，为何出现吸入和食物针对同一过敏原检测，为何出现吸入和食物组合结果差异组合结果差异EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。Q4:未温育膜条为何出现浅色条带未温育膜条为何出现浅色条带EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。血清温育前血清温育前血清温育前，在膜条特定过敏原区域出现浅色条带血清温育前，在膜条特定过敏原区域出现浅色条带EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。血清温育后血清温育后血清温育后，浅色条带消失血清温育后，浅色条带消失结果解释：结果解释：1、温育前浅色条带是由于过敏原天然提取物含少量色素；、温育前浅色条带是由于过敏原天然提取物含少量色素；2、温育后，浅色条带即可消失、温育后，浅色条带即可消失3、浅色条带不会影响实验检测结果、浅色条带不会影响实验检测结果EUROIMMUN文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。谢谢！谢谢！