微生物实验室培养.ppt

.微生物的类群微生物的类群微微生生物物原核生物原核生物:真核生物真核生物真核生物真核生物非细胞生物：非细胞生物：细菌、蓝藻、支原体、衣原体等细菌、蓝藻、支原体、衣原体等个体微小、结构简单个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌酵母菌、霉菌、食用菌真菌：真菌：原生生物：原生生物：单细胞藻类、动物如：单细胞藻类、动物如：绿藻、草履虫、变形绿藻、草履虫、变形虫等）虫等）病毒病毒微生物的共同特点：微生物的共同特点：一一.微生物基础知识微生物基础知识2.2.菌落菌落.定义：定义：单个或者少数单个或者少数单个或者少数单个或者少数细（真）菌在固体培养基上大量细（真）菌在固体培养基上大量细（真）菌在固体培养基上大量细（真）菌在固体培养基上大量繁殖时形成肉眼可见的、具一定形态结构的繁殖时形成肉眼可见的、具一定形态结构的繁殖时形成肉眼可见的、具一定形态结构的繁殖时形成肉眼可见的、具一定形态结构的子细胞子细胞子细胞子细胞群体群体群体群体，叫做菌落，叫做菌落，叫做菌落，叫做菌落.特征：特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。.用途：用途：每种细菌所形成的菌落特征各不相同，每种细菌所形成的菌落特征各不相同，菌种鉴定的重要依据菌种鉴定的重要依据。每个菌落是一个种群每个菌落是一个种群每个菌落是一个种群每个菌落是一个种群几种菌落及其形态.培养基培养基 1.1.概念：概念：培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的营养基质。供微生物生长繁殖使用的营养基质。供微生物生长繁殖使用的营养基质。供微生物生长繁殖使用的营养基质。3.3.培养基的类型和用途培养基的类型和用途2.2.培养基的成分：培养基的成分：一般都含有一般都含有一般都含有一般都含有水水水水、碳源碳源碳源碳源、氮源氮源氮源氮源、无机盐无机盐无机盐无机盐等营养物质，另等营养物质，另等营养物质，另等营养物质，另外还需要满足微生物生长对外还需要满足微生物生长对外还需要满足微生物生长对外还需要满足微生物生长对pHpHpHpH、特殊营养物质特殊营养物质特殊营养物质特殊营养物质以及以及以及以及氧氧氧氧气气气气等的要求。等的要求。等的要求。等的要求。P14P14P15P15划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理性质物理性质化学成分化学成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基用途用途鉴别培养基鉴别培养基培养基的种类培养基的种类不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如加凝固剂，如琼脂琼脂工业生产工业生产观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类鉴定分类鉴定微生物微生物分离、分离、鉴定鉴定、活菌、活菌计计数数、保藏保藏菌种菌种含化学成分不明确天然物质含化学成分不明确天然物质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中在培养基中加入加入某种化学物某种化学物质质,以以抑制不需要抑制不需要的微生物的微生物的生长的生长,促进所需要促进所需要的微生的微生物的生长物的生长培养、分离出培养、分离出特定微生物特定微生物在培养基中在培养基中加入某种指示剂加入某种指示剂或化学药品或化学药品,用以用以鉴别鉴别不同不同种类的微生物种类的微生物鉴别不同种鉴别不同种类微生物类微生物选择培养基选择培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基P84P84二、无菌技术二、无菌技术（1 1）对实验操作的）对实验操作的空间、操作者的衣着和手空间、操作者的衣着和手，进行，进行 。（2 2）将用于微生物培养的）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基器皿、接种用具和培养基等器具进行等器具进行 .（3 3）为避免周围环境中微生物的污染，）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作实验操作应在应在酒精灯火焰酒精灯火焰 附近进行附近进行。（4 4）实验操作时应）实验操作时应避免避免已经灭菌处理的材料用具已经灭菌处理的材料用具与周围的物品与周围的物品 相接触相接触。清洁和清洁和消毒消毒灭菌灭菌目的：防止实验室的培养物目的：防止实验室的培养物 ；同时避免操作者自身被微生物感染。同时避免操作者自身被微生物感染。被其他微生物污染被其他微生物污染思考：思考：1.获得纯净培养物的关键获得纯净培养物的关键？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）旁栏思考）3.消毒和灭菌有何不同？消毒和灭菌有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？常用的消毒和灭菌方法有哪些？无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。.无菌技术无菌技术防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵比比较较项项理化因素的理化因素的作用强度作用强度消灭微生物消灭微生物的数量的数量芽孢和孢子芽孢和孢子能否被消灭能否被消灭消消毒毒较为温和较为温和部分生活状部分生活状态的微生物态的微生物不能不能灭灭菌菌强烈强烈全部微生物全部微生物能能消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较为抵抗不良环境可形成细菌的休眠体为抵抗不良环境可形成细菌的休眠体为抵抗不良环境可形成细菌的休眠体为抵抗不良环境可形成细菌的休眠体芽孢芽孢芽孢芽孢煮沸消毒法：煮沸消毒法：100100煮沸煮沸5-6min5-6min。巴氏消毒法：巴氏消毒法：70-7570-75下煮下煮30min30min或或 80 80下下煮煮15min15min。化学药剂消毒法：化学药剂消毒法：酒精消毒皮肤；氯气消酒精消毒皮肤；氯气消毒水源，石碳酸消毒、煤酚皂溶液设备。毒水源，石碳酸消毒、煤酚皂溶液设备。紫外线消毒紫外线消毒（活体消毒一般不用）（活体消毒一般不用）.消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法（2）灭菌）灭菌a 灼烧灭菌灼烧灭菌 b 干热灭菌干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌a.灼烧灭菌灼烧灭菌 接种工具接种工具(接种环、接接种环、接种针种针)或其他或其他金属用具金属用具及试管口及试管口直接在火焰的直接在火焰的充分燃烧层灼烧充分燃烧层灼烧注意适用范围注意适用范围1.b.干热灭菌干热灭菌 2.160170；12h能能耐高温耐高温的需要的需要保持干保持干燥燥的物品的物品(玻璃器皿玻璃器皿)c.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 d.100kPa 121 e.15-30min耐高温且要保持水分的耐高温且要保持水分的通常用于通常用于培养基的灭菌培养基的灭菌二二.实验操作实验操作(以培养大肠杆菌为例以培养大肠杆菌为例).制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基1.1.计算计算2.2.称量称量3.3.溶化溶化并调并调PHPH4.4.灭菌灭菌:培养基高压蒸气灭菌锅培养基高压蒸气灭菌锅 培养皿培养皿-干热来菌。干热来菌。5 5.倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在左右时，在酒精灯酒精灯附近倒平板附近倒平板。2d2d后观察平板，无杂菌污染才可后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。用来接种。倒倒平平板板操操作作答：可以用手答：可以用手触摸触摸盛有培养基的盛有培养基的锥形瓶锥形瓶，感觉，感觉锥形瓶的温度下降到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手刚刚不烫手时，就可以进时，就可以进行倒平板了。行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染防止瓶口的微生物污染培培养基。养基。问题讨论问题讨论1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？的温度？3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？答：答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以既可以防止皿盖上水珠落入培养基，造成污染，防止皿盖上水珠落入培养基，造成污染，又避免培养基中水分过快蒸发又避免培养基中水分过快蒸发。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此培养基上滋生，因此最好不要用最好不要用这个平板培养这个平板培养微生物。微生物。（一）培养基一）培养基1.1.培养基按物理性质、化学成分、功能进行分类包括哪些？培养基按物理性质、化学成分、功能进行分类包括哪些？2.2.培养基的培养基的化学成分一般化学成分一般都含有都含有 、四类营四类营养成分。养成分。此外还需要满足微生物此外还需要满足微生物生长对生长对 、以以及及 等的要求。如：培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加等的要求。如：培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加 ；培养；培养霉菌霉菌时需要将培养基的时需要将培养基的PHPH调至调至 ；培养；培养细菌细菌时需要时需要将培养基的将培养基的PHPH调至调至 ；培养厌氧微生物时需要提供无氧；培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件。的条件。（二）无菌技术（二）无菌技术1.1.获得纯净培养物的关键是获得纯净培养物的关键是 ，目的是，目的是 。主要包括以下四个内容：主要包括以下四个内容：对实验操作的对实验操作的 、操作者的、操作者的 进行清洁和进行清洁和 。培养微生物的器皿、接种用具和培养基等器具进行培养微生物的器皿、接种用具和培养基等器具进行 。为避免环境中微生物污染，实验操作应在为避免环境中微生物污染，实验操作应在_附近进行。附近进行。操作时避免操作时避免 材料用具与材料用具与_相接触。相接触。课题课题1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养2.消毒和灭菌消毒和灭菌（1）消毒是指使用）消毒是指使用 仅杀死物体表面或仅杀死物体表面或 的部分微生的部分微生物（不包括物（不包括 和和 ）。）。常用的消毒方法常用的消毒方法有有 、。此外，人们也常使用化学。此外，人们也常使用化学药剂进行消毒，如用药剂进行消毒，如用 、等。此外，实等。此外，实验室里还用验室里还用 或或 进行消毒。进行消毒。（2）灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体）灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体 的微生的微生物，包括芽孢和孢子。物，包括芽孢和孢子。常用的灭菌方法常用的灭菌方法有有 、。二、实验操作二、实验操作大肠杆菌纯化培养用大肠杆菌纯化培养用_培养基进行，可分成培养基进行，可分成_和和_两个阶段进行。两个阶段进行。1.1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：。其中灭菌包括对其中灭菌包括对 和和 灭菌，调灭菌，调PHPH应在应在 。.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌平板划线法平板划线法平板划线法平板划线法和和和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法稀释涂布平板法稀释涂布平板法。微生物常用接种方法：微生物常用接种方法：微生物常用接种方法：微生物常用接种方法：1.1.1.1.平板划线的操作方法平板划线的操作方法平板划线的操作方法平板划线的操作方法一旦划破，会一旦划破，会造成造成划线不均匀划线不均匀，难以达难以达到分离单菌落到分离单菌落的目的；的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。会形成一个条状的菌落。1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？第一步灼烧接种环第一步灼烧接种环避免接种环上微生物污染培养物；避免接种环上微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环每次划线前灼烧接种环杀死上次划线接种环上残留的菌种，杀死上次划线接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环划线结束后灼烧接种环杀死接种环上残留的菌种杀死接种环上残留的菌种，避免污，避免污染环境和感染操作者。染环境和感染操作者。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：避免接种环温度太高，杀死菌种。答：避免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？么总是从上一次划线的末端开始划线？答：答：末端细菌的数目比线条起始处少，从上末端细菌的数目比线条起始处少，从上一次划线的末端开始，一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。单个细菌繁殖而来的菌落。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，例如，酒精灯与培养皿的距离酒精灯与培养皿的距离要合适、要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。在酒精灯火焰周围等。微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养结果分析与评价结果分析与评价 一一.培养基制备是否成功培养基制备是否成功未接种的培养基无菌落生长未接种的培养基无菌落生长，说明制备的培养基，说明制备的培养基是是合格合格的，否则需要重新制备。的，否则需要重新制备。二二.接种操作是否符合无菌要求接种操作是否符合无菌要求 若培养基上生长的若培养基上生长的菌落菌落的颜色、形状、大小基本的颜色、形状、大小基本一致一致，并，并符合大肠杆菌菌落的特点符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操，则说明接种操作是作是符合要求符合要求的；若培养基上的；若培养基上出现了其他菌落出现了其他菌落，则，则说明接种过程中，无菌操作还说明接种过程中，无菌操作还未达到要求未达到要求，需要分，需要分析原因，再次练习析原因，再次练习三、是否进行了及时细致的观察与记录三、是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12h与与24h后的大肠杆菌后的大肠杆菌菌落的大菌落的大小会有明显不同小会有明显不同纯化大肠杆菌实验有无对照实验？纯化大肠杆菌实验有无对照实验？将接种的培养基（至少将接种的培养基（至少3 3个）和个）和一个未接种的培养一个未接种的培养基基倒置放入倒置放入3737的恒温箱中。的恒温箱中。菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏：、临时保藏：固体斜面培养基固体斜面培养基上上44保存，易被保存，易被污污染染或产生或产生变异变异 2 2、长期保存：、长期保存：2020甘油管藏甘油管藏当培养基冷却至当培养基冷却至50 左左右时，将试管带棉塞的一右时，将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁置端搁在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基的长度要合适，使培养基形成的斜面的长度不超过形成的斜面的长度不超过试管总长的一半。试管总长的一半。本课题知识小结本课题知识小结:4个方面个方面4种种3种种菌种保存两种方法菌种保存两种方法