微生物的生物安全性.ppt

生物安全生物安全是指现代生物技术的研究、开发、应用以及转基因生物的跨国越境转移可能会对生物多样性、生态环境和人体健康产生潜在的不利影响，特别是各类转基因活生物体释放到环境中可能对生物多样性构成潜在风险与威胁。广义的“生物安全”不止针对现代生物科学技术的开发和应用，它涵盖了狭义生物安全的概念并且包括了更广泛的内容。大致分为三个方面:一是指人类的健康安全；一是指人类赖以生存的农林渔业生物安全；二是指与人类生存有关的环境生物安全。生物安全生物安全是指在一个特定的时空范围内，由于自然或人类活动引起的外来物种迁入，并由此对当地其他物种和生态系统造成改变和危害；人为造成环境的剧烈变化而对生物的多样性产生影响和威胁；在科学研究、开发、生产和应用中造成对人类健康、生存环境和社会生活有害的影响。生物安全生物安全是对生物危害的检测、评价、监测、防范和治理的科学技术体系。广义的生物危害应包括生物体（动物、植物、微生物，主要是致病性微生物）或其产物（来自于各种生物的毒素、过敏原等）对健康、环境、经济和社会生活的现实损害或潜在风险。狭义的概念是指由于人为操作或人类活动而导致生物体或其产物对人类健康和生态环境的现实损害或潜在风险，主要包括：基因技术、操作病原体（活的生物体及其代谢产物）和由于人类活动使非土著生物进入特定生态区域即生物入侵等所造成的危害。2.1 微生物的危险度等级 每个国家（地区）应该按照危险度等级，并考虑以下因素来制订各自的微生物分类目录：1、微生物的致病性。2、微生物的传播方式和宿主范围。它们可能会受到当地人群已有的免疫水平、宿主群体的密度和流动、适宜媒介的存在以及环境卫生水平等因素的影响。3、当地所具备的有效预防措施。这些措施包括：通过接种疫苗或给予抗血清的预防（被动免疫）；卫生措施，例如食品和饮水的卫生；动物宿主或节肢动物媒介的控制。4、当地所具备的有效治疗措施。这些措施包括：被动免疫、暴露后接种疫苗以及使用抗生素、抗病毒药物和化学治疗药物，还应考虑出现耐药菌株的可能性。在实验室工作中，应根据危险度评估结果将微生物因子归入某一生物安全水平。在通过危险度评估工作来确立适当的生物安全水平时，要考虑危险度等级以及其他一些因素。例如，归入危险度2 级的微生物因子，进行安全工作通常需要二级生物安全水平的设施、仪器、操作和规程。但是，如果特定实验需要发生高浓度的气溶胶时，由于三级生物安全水平通过对实验工作场所内气溶胶实施更高级别的防护，所以更适于提供所必需的生物安全防护。因此，在确定所从事特定工作的生物安全水平时，应根据危险度评估结果来进行专业判断，而不应单纯根据所使用病原微生物所属的某一危险度等级来机械地确定所需的实验室生物安全水平。2.2 微生物危险度评估微生物危险度评估生物安全工作的核心是危险度评估。可以借助许多方法来对某一个特定的操作程序或实验进行危险度评估，其中最重要的是专业判断。危险度评估应当由那些对所涉及的微生物特性、设备和规程、动物模型以及防护设备和设施最为熟悉的人员来进行。实验室主任或项目负责人应当负责确保进行充分和及时的危险度评估，同时也有责任与所在机构的安全委员会和生物安全工作人员密切合作，以确保有适当的设备和设施来进行相关的研究工作。危险度评估一旦进行，还应当考虑收集与危险程度相关的新资料以及来自科学文献的其他相关的新信息，以便必要时对危险度评估结果进行定期检查和修订。进行危险度评估时仅仅参考其危险度等级是远远不够的，适当时还应考虑其他一些因素，包括：1、微生物的致病性和感染数量2、暴露的潜在后果3、自然感染途径4、实验室操作所致的其他感染途径（非消化道途径、空气传播、食入）5、微生物在环境中的稳定性6、所操作微生物的浓度和浓缩标本的容量7、适宜宿主（人或动物）的存在8、从动物研究和实验室感染报告或临床报告中得到的信息9、计划进行的实验室操作（如超声处理、气溶胶化、离心等）10、可能会扩大微生物的宿主范围或改变微生物对于已知有效治疗方案敏感性的所有基因技术）11、当地是否能进行有效的预防或治疗干预。根据危险度评估过程中所明确的上述信息，可以确定所计划开展的研究工作的生物安全水平级别，选择合适的个体防护装备，并结合其他安全措施制订标准操作规范（standard operating procedure，SOP），以确保在最安全的水平下来开展工作。信息有限的标本谨慎地采取一些较为保守的标本处理方法。1、只要标本取自病人，均应当遵循标准防护方法，并采用隔离防护措施（如手套、防护服、眼睛保护）。2、基础防护处理此类标本时最低需要二级生物安全水平。3、标本的运送应当遵循国家和或国际的规章和规定。下列信息可能有助于确定处理这些标本的危险度：、病人的医学资料2、流行病学资料发病率和死亡率资料、可疑的传播途径、其他有关暴发的调查资料3、有关标本来源地的信息。在暴发病因不明的疾病时，可能应由国家主管部门和或WHO 制订并在万维网上公布适当的专门指南如2003 年发生严重急性呼吸综合征（Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS）时的情况，指导标本应如何运输以及在标本分析时应按何种生物安全水平执行。2.3 基础实验室一级和二级生物安全水平操作规范本规程中列出了最基本的实验室操作和程序，他们是微生物学操作技术规范的基础。在规划实验室和国家级实验室项目时，可以根据这些规程来制订实验室安全操作的书面程序。每个实验室都应该采用“安全手册”或“操作手册”，其中定义了已知的和潜在的危害，并规定了特殊的操作程序来避免或尽量减小这种危害。规范的微生物学操作技术是实验室安全的基础，而专门的实验设备仅仅是一种补充，绝不能替代正确的操作规范。下面列出了一些最重要的概念。进入规定1、在处理危险度2 级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志（图1）。2、只有经批准的人员方可进入实验室工作区域。3、实验室的门应保持关闭。4、儿童不应被批准或允许进入实验室工作区域。5、进入动物房应当经过特别批准。6、与实验室工作无关的动物不得带入实验室。人员防护1、在实验室工作时，任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服。2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。3、在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。4、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。5、严禁穿着实验室防护服离开实验室，（如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室和卫生间）。6、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。7、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。8、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。9、在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。操作规范1、严禁用口吸移液管。2、严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。4、应限制使用皮下注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液，皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途。5、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室主管报告。实验室应保存这些事件或事故的书面报告。6、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序，并予以遵守执行。7、污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果，可能需要准备污水处理系统。8、需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污染。实验室工作区1、实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。2、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后，都必须清除工作台面的污染。3、所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须清除污染4、在进行包装和运输时必须遵循国家和或国际的相关规定。5、如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。生物安全管理1、实验室主任（对实验室直接负责的人员）负责制订和采用生物安全管理计划以及安全或操作手册。2、实验室主管（向实验室主任汇报）应当保证提供常规的实验室安全培训。3、要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或操作手册，并遵循标准的操作和规程。实验室主管应当确保所有实验室人员都了解这些要求。实验室内应备有可供取阅的安全或操作手册。4、应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。5、如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗，并应妥善保存相应的医学记录。实验室的设计和设施在设计实验室和安排某些类型的实验工作时，对于那些可能造成安全问题的情况要加以特别关注，这些情况包括：1、气溶胶的形成2、处理大容量和或高浓度微生物3、仪器设备过度拥挤和过多4、啮齿动物和节肢动物的侵扰5、未经允许人员进入实验室6、工作流程：一些特殊标本和试剂的使用。设计特征1、必须为实验室安全运行、清洁和维护提供足够的空间。2、实验室墙壁、天花板和地板应当光滑、易清洁、防渗漏并耐化学品和消毒剂的腐蚀。地板应当防滑。3、实验台面应是防水的，并可耐消毒剂、酸、碱、有机溶剂和中等热度的作用。4、应保证实验室内所有活动的照明，避免不必要的反光和闪光。5、实验室器具应当坚固耐用，在实验台、生物安全柜和其他设备之间及其下面要保证有足够的空间以便进行清洁。6、应当有足够的储存空间来摆放随时使用的物品，以免实验台和走廊内混乱。在实验室的工作区外还应当提供另外的可长期使用的储存间。7、应当为安全操作及储存溶剂、放射性物质、压缩气体和液化气提供足够的空间和设施。8、在实验室的工作区外应当有存放外衣和私人物品的设施。9、在实验室的工作区外应当有进食、饮水和休息的场所。10、每个实验室都应有洗手池，并最好安装在出口处，尽可能用自来水。11、实验室的门应有可视窗，并达到适当的防火等级，最好能自动关闭。12、二级生物安全水平时，应在靠近实验室的位置配备高压灭菌器或其他清除污染的工具13、安全系统应当包括消防、应急供电、应急淋浴以及洗眼设施。14、应当配备具有适当装备并易于进入的急救区或急救室。15、在设计新的设施时，应当考虑设置机械通风系统，以使空气向内单向流动。如果没有机械通风系统，那么实验室窗户应当能够打开，同时应安装防虫纱窗。16、必须为实验室提供可靠和高质量的水。要保证实验室水源和饮用水源的供应管道之间没有交叉连接。应当安装防止逆流装置来保护公共饮水系统。17、要有可靠和充足的电力供应和应急照明，以保证人员安全离开实验室。备用发电机对于保证重要设备的正常运转（如培养箱、生物安全柜、冰柜等）以及动物笼具的通风都是必要的。18、要有可靠和充足的燃气供应。供气设施必须得到良好维护。19、实验室和动物房偶尔会成为某些人恶意破坏的目标。必须考虑物理和防火安全措施。必须使用坚固的门、纱窗以及门禁系统。适当时还应使用其他措施来加强安全保障。实验室设备选择设备时应符合一些基本原则，即：1、在设计上应能阻止或限制操作人员与感染性物质间的接触2、建筑材料应防水、耐腐蚀并符合结构要求3、设备装配后应无毛刺、锐角以及易松动的部件4、设备的设计、建造与安装应便于操作、易于维护、清洁、清除污染和进行质量检验。应尽量避免使用玻璃及其他易碎的物品。需要详细咨询设备的性能和结构规格，以确保设施具备必要的安全特性。基本生物安全设备1、移液辅助器避免用口吸的方式移液。有不同设计的多种产品可供使用。2、生物安全柜，在以下情况使用：处理感染性物质；如果使用密封的安全离心杯，并在生物安全柜内装样、取样，则这类材料可在开放实验室离心 空气传播感染的危险增大时 进行极有可能产生气溶胶的操作时（包括离心、研磨、混匀、剧烈摇动、超声破碎、打开内部压力和周围环境压力不同的盛放有感染性物质的容器、动物鼻腔接种以及从动物或卵胚采集感染性组织）。基本生物安全设备3、一次性塑料接种环，也可在生物安全柜内使用电加热接种环，以减少生成气溶胶。4、螺口盖试管及瓶子。5、用于清除感染性材料污染的高压灭菌器或其他适当工具。6、一次性巴斯德塑料移液管，尽量避免使用玻璃制品。7、在投入使用前，像高压灭菌器和生物安全柜等设备必须用正确方法进行验收。应参照生产商的说明书定期检测。健康和医学监测主管机构有责任通过实验室主任来确保实验室全体工作人员接受适当的健康监测。监测的目的是监控职业获得性疾病。为达到这些目的，应进行如下工作：1、根据需要提供主动或被动免疫2、促进实验室感染的早期检测3、应禁止高度易感人群（如孕妇或免疫损伤人员）在高危险实验室中工作4、提供有效的个体防护装备和方法。在一级生物安全水平操作微生物的实验室工作人员的监测指南历史证据表明，在一级生物安全水平操作的微生物不太可能引起人类疾病或兽医学意义的动物疾病。理想的做法是，所有实验室工作人员应进行上岗前的体检，并记录其病史。疾病和实验室意外事故应迅速报告，所有工作人员都应意识到应用规范的实验室操作技术的重要性。在二级生物安全水平操作微生物的实验室工作人员的监测指南1、必须有录用前或上岗前的体检。记录个人病史，并进行一次有目的的职业健康评估。2、实验室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录。3、育龄期妇女应知道某些微生物（如风疹病毒）的职业暴露对未出生孩子的危害。保护胎儿的正确措施因妇女可能接触的微生物而异。培培 训训人员培训的内容应始终包括如何采用安全的方法来进行下列所有实验室工作人员都会经常遇到的高危操作，包括：1、吸入危险（气溶胶产物），如使用接种环、划线接种琼脂平板、移液、制作涂片、打开培养物、采集血液血清标本、离心等2、食入危险，如处理标本、涂片以及培养物3、在使用注射器和针头时刺伤皮肤的危险4、处理动物时被咬伤、抓伤5、处理血液以及其他有潜在病理学危害的材料6、感染性材料的清除污染和处理。废弃物处理用以处理潜在感染性微生物或动物组织的所有的用以处理潜在感染性微生物或动物组织的所有的实验室物品，在被丢弃前应考虑的主要问题有：实验室物品，在被丢弃前应考虑的主要问题有：1 1、是否已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除、是否已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除污染或消毒？污染或消毒？2 2、如果没有，他们是否以规定的方式包裹，以便就地、如果没有，他们是否以规定的方式包裹，以便就地焚烧或运送到其他有焚烧设施的地方进行处理？焚烧或运送到其他有焚烧设施的地方进行处理？3 3、丢弃已清除污染的物品时，是否会对直接参与丢弃、丢弃已清除污染的物品时，是否会对直接参与丢弃的人员，或在设施外可能接触到丢弃物的人员造成任的人员，或在设施外可能接触到丢弃物的人员造成任何潜在的生物学或其他方面的危害？何潜在的生物学或其他方面的危害？清除污染高压蒸汽灭菌是清除污染时的首选方法。需要清除污染并丢弃的物品应装在容器中（如根据内容物是否需要进行高压灭菌和或焚烧而采用不同颜色标记的可以高压灭菌的塑料袋）。也可采用其他可以除去和或杀灭微生物的替代方法。污染性材料和废弃物的处理和丢弃程序要对感染性物质及其包装物进行鉴别并分别进行要对感染性物质及其包装物进行鉴别并分别进行处理，相关工作要遵守国家和国际规定。废弃物处理，相关工作要遵守国家和国际规定。废弃物可以分成以下几类：可以分成以下几类：1 1、可重复或再使用，或按普通、可重复或再使用，或按普通“家庭家庭”废弃物丢废弃物丢弃的非污染（非感染性）废弃物弃的非污染（非感染性）废弃物2 2、污染（感染性）锐器、污染（感染性）锐器皮下注射用针头、手皮下注射用针头、手术刀、刀子及破碎玻璃；这些废弃物应收集在带术刀、刀子及破碎玻璃；这些废弃物应收集在带盖的不易刺破的容器内，并按感染性物质处理盖的不易刺破的容器内，并按感染性物质处理3 3、通过高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使、通过高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使用的污染材料用的污染材料4 4、高压灭菌后丢弃的污染材料、高压灭菌后丢弃的污染材料5 5、直接焚烧的污染材料。、直接焚烧的污染材料。锐 器皮下注射针头用过后不应再重复使用，包括不能从注射器皮下注射针头用过后不应再重复使用，包括不能从注射器上取下、回套针头护套、截断等，应将其完整地置于盛放上取下、回套针头护套、截断等，应将其完整地置于盛放锐器的一次性容器中。锐器的一次性容器中。单独使用或带针头使用的一次性注射器应放在盛放锐器的单独使用或带针头使用的一次性注射器应放在盛放锐器的一次性容器内焚烧，如需要可先高压灭菌。一次性容器内焚烧，如需要可先高压灭菌。盛放锐器的一次性容器必须是不易刺破的，而且不能将容盛放锐器的一次性容器必须是不易刺破的，而且不能将容器装得过满。当达到容量的四分之三时，应将其放入器装得过满。当达到容量的四分之三时，应将其放入“感感染性废弃物染性废弃物”的容器中进行焚烧，如果实验室规程需要，的容器中进行焚烧，如果实验室规程需要，可以先进行高压灭菌处理。盛放锐器的一次性容器绝对不可以先进行高压灭菌处理。盛放锐器的一次性容器绝对不能丢弃于垃圾场。能丢弃于垃圾场。高压灭菌后重复使用的污染（有潜在感染性）材料任何高压灭菌后重复使用的污染（有潜在感染性）材料不应事先清洗，任何必要的清洗、修复必须在高压灭菌或消毒后进行。废弃的污染（有潜在感染性）材料除了锐器按上面的方法进行处理以外，所有其他污染（有潜除了锐器按上面的方法进行处理以外，所有其他污染（有潜在感染性）材料在丢弃前应放置在防渗漏的容器（如有颜色在感染性）材料在丢弃前应放置在防渗漏的容器（如有颜色标记的可高压灭菌塑料袋）中高压灭菌。标记的可高压灭菌塑料袋）中高压灭菌。高压灭菌后，物品可以放在运输容器中运送至焚烧炉。如果高压灭菌后，物品可以放在运输容器中运送至焚烧炉。如果可能，即使在清除污染后，卫生保健单位的废弃物也不应丢可能，即使在清除污染后，卫生保健单位的废弃物也不应丢弃到垃圾场。如果实验室中配有焚烧炉，则可以免去高压灭弃到垃圾场。如果实验室中配有焚烧炉，则可以免去高压灭菌。菌污染材料应放在指定的容器（如有颜色标记的袋子）内直接污染材料应放在指定的容器（如有颜色标记的袋子）内直接运送到焚烧炉中。可重复使用的运输容器应是防渗漏的，有运送到焚烧炉中。可重复使用的运输容器应是防渗漏的，有密闭的盖子。这些容器在送回实验室再次使用前，应进行消密闭的盖子。这些容器在送回实验室再次使用前，应进行消毒清洁。毒清洁。应在每个工作台上放置盛放废弃物的容器、盘子或广口瓶，最好是不易破碎的容器（如塑料制品）。当使用消毒剂时，应使废弃物充分接触消毒剂（即不能有气泡阻隔），并根据所使用消毒剂的不同保持适当接触时间。盛放废弃物的容器在重新使用前应高压灭菌并清洗。污染材料的焚烧必须得到公共卫生、环保部门以及实验室生物安全官员的批准。化学品、火、电、辐射以及仪器设备安全化学品、火、电或辐射事故可以间接导致病原微生物屏障系统的破坏。因此，所有微生物实验室在这些方面必须坚持很高的安全标准。国家或地方的主管部门通常会制订相关的法规和条例，必要时可以从他们那里寻求帮助。2.4 防护实验室三级生物安全水平三级生物安全水平的防护实验室是为处理危险度3 级微生物和大容量或高浓度的、具有高度气溶胶扩散危险的危险度2 级微生物的工作而设计的。三级生物安全水平需要比一级和二级生物安全水平的基础实验室更严格的操作和安全程序。1、操作规范2、实验室设计和设施3、健康和医学监测。操作规范除下列修改以外，应采用一级和二级生物安全水平的基础实验室的操作规范：1、张贴在实验室入口门上的国际生物危害警告标志应注明生物安全级别以及管理实验室出入的负责人姓名，并说明进入该区域的所有特殊条件，如免疫接种状况。2 2、实验室防护服必须是正面不开口的或反背式的、实验室防护服必须是正面不开口的或反背式的隔离衣、清洁服、连体服、带帽的隔离衣，必要隔离衣、清洁服、连体服、带帽的隔离衣，必要时穿着鞋套或专用鞋。前系扣式的标准实验服不时穿着鞋套或专用鞋。前系扣式的标准实验服不适用，因为不能完全罩住前臂。实验室防护服不适用，因为不能完全罩住前臂。实验室防护服不能在实验室外穿着，且必须在清除污染后再清洗。能在实验室外穿着，且必须在清除污染后再清洗。当操作某些微生物因子时（如农业或动物感染性当操作某些微生物因子时（如农业或动物感染性因子），可以允许脱下日常服装换上专用的实验因子），可以允许脱下日常服装换上专用的实验服。服。3 3、开启各种潜在感染性物质的操作均必须在生物、开启各种潜在感染性物质的操作均必须在生物安全柜或其他基本防护设施中进行。安全柜或其他基本防护设施中进行。4 4、有些实验室操作，或在进行感染了某些病原体、有些实验室操作，或在进行感染了某些病原体的动物操作时，必须配备呼吸防护装备。的动物操作时，必须配备呼吸防护装备。实验室的设计和设施除下列修改以外，应采用一级和二级生物安全水平除下列修改以外，应采用一级和二级生物安全水平的基础实验室的设计和设施：的基础实验室的设计和设施：1 1、实验室应与同一建筑内自由活动区域分隔开，、实验室应与同一建筑内自由活动区域分隔开，具体可将实验室置于走廊的盲端，或设隔离区和隔具体可将实验室置于走廊的盲端，或设隔离区和隔离门，或经缓冲间（即双门通过间或二级生物安全离门，或经缓冲间（即双门通过间或二级生物安全水平的基础实验室）进入。缓冲间是一个在实验室水平的基础实验室）进入。缓冲间是一个在实验室和邻近空间保持压差的专门区域，其中应设有分别和邻近空间保持压差的专门区域，其中应设有分别放置洁净衣服和脏衣服的设施，而且也可能需要有放置洁净衣服和脏衣服的设施，而且也可能需要有淋浴设施。淋浴设施。2 2、缓冲间的门可自动关闭且互锁，以确保某一时、缓冲间的门可自动关闭且互锁，以确保某一时间只有一扇门是开着的。应当配备能击碎的面板供间只有一扇门是开着的。应当配备能击碎的面板供紧急撤离时使用。紧急撤离时使用。3 3、实验室的墙面、地面和天花板必须防水，并易、实验室的墙面、地面和天花板必须防水，并易于清洁。所有表面的开口（如管道通过处）必须于清洁。所有表面的开口（如管道通过处）必须密封以便于清除房间污染。密封以便于清除房间污染。4 4、为了便于清除污染，实验室应密封。需建造空、为了便于清除污染，实验室应密封。需建造空气管道通风系统以进行气体消毒。气管道通风系统以进行气体消毒。5 5、窗户应关闭、密封、防碎。、窗户应关闭、密封、防碎。6 6、在每个出口附近安装不需用手控制的洗手池。、在每个出口附近安装不需用手控制的洗手池。7 7、必须建立可使空气定向流动的可控通风系统。、必须建立可使空气定向流动的可控通风系统。应安装直观的监测系统，以便工作人员可以随时应安装直观的监测系统，以便工作人员可以随时确保实验室内维持正确的定向气流，该监测系统确保实验室内维持正确的定向气流，该监测系统可带也可不带警报系统。可带也可不带警报系统。8 8、在构建通风系统时，应保证从三级生物安全实、在构建通风系统时，应保证从三级生物安全实验室内所排出的空气不会逆流至该建筑物内的其他验室内所排出的空气不会逆流至该建筑物内的其他区域。空气经高效空气过滤器（区域。空气经高效空气过滤器（high-efficiency high-efficiency particulate air filtersparticulate air filters，HEPA HEPA 过滤器）过滤、过滤器）过滤、更新后，可在实验室内再循环使用。当实验室空气更新后，可在实验室内再循环使用。当实验室空气（来自生物安全柜的除外）排出到建筑物以外时，（来自生物安全柜的除外）排出到建筑物以外时，必须在远离该建筑及进气口的地方扩散。根据所操必须在远离该建筑及进气口的地方扩散。根据所操作的微生物因子不同，空气可以经作的微生物因子不同，空气可以经HEPA HEPA 过滤器过过滤器过滤后排放。可以安装取暖、通风和空调（滤后排放。可以安装取暖、通风和空调（HVACHVAC）控）控制系统来防止实验室出现持续正压。应考虑安装视制系统来防止实验室出现持续正压。应考虑安装视听警报器，向工作人员发出听警报器，向工作人员发出HVAC HVAC 系统故障信号。系统故障信号。9、所有的HEPA 过滤器必须安装成可以进行气体消毒和检测的方式。10、生物安全柜的安装位置应远离人员活动区，且避开门和通风系统的交叉区。11、从级和级生物安全柜排出的空气，在通过HEPA 过滤器后排出时，必须避免干扰安全柜的空气平衡以及建筑物排风系统。1212、防护实验室中应配置用于污染废弃物消毒的、防护实验室中应配置用于污染废弃物消毒的高压灭菌器。如果高压灭菌器。如果感染性废弃物感染性废弃物需运出实验室处需运出实验室处理，则必须根据国家或国际的相应规定，密封于理，则必须根据国家或国际的相应规定，密封于不易破裂的、防渗漏的容器中。不易破裂的、防渗漏的容器中。1313、供水管必须安装、供水管必须安装防逆流装置防逆流装置。真空管道应采。真空管道应采用装有液体消毒剂的防气阀和用装有液体消毒剂的防气阀和HEPA HEPA 过滤器或相当过滤器或相当产品进行保护。备用真空泵也应用防气阀和过滤产品进行保护。备用真空泵也应用防气阀和过滤器进行适当保护。器进行适当保护。1414、三级生物安全水平的防护实验室，其设施设、三级生物安全水平的防护实验室，其设施设计和操作规范应予计和操作规范应予存档存档。2.5 最高防护实验室四级生物安全水平四级生物安全水平的最高防护实验室是为四级生物安全水平的最高防护实验室是为进行与危险度进行与危险度4 级微生物相关的工作而设计级微生物相关的工作而设计的。这种实验室在建设和投入使用前，应的。这种实验室在建设和投入使用前，应充分咨询有运作类似设施经验的机构。四充分咨询有运作类似设施经验的机构。四级生物安全水平的最高防护实验室的运作级生物安全水平的最高防护实验室的运作应在国家或其他有关的卫生主管机构的管应在国家或其他有关的卫生主管机构的管理下进行。理下进行。操作规范除下列修改以外，应采用三级生物安全水平的操作规范：除下列修改以外，应采用三级生物安全水平的操作规范：1、实行双人工作制，任何情况下严禁任何人单独在实验、实行双人工作制，任何情况下严禁任何人单独在实验室内工作。这一点在防护服型四级生物安全水平实验室中室内工作。这一点在防护服型四级生物安全水平实验室中工作时尤其重要。工作时尤其重要。2、在进入实验室之前以及离开实验室时，要求更换全部、在进入实验室之前以及离开实验室时，要求更换全部衣服和鞋子。衣服和鞋子。3、工作人员要接受人员受伤或疾病状态下紧急撤离程序、工作人员要接受人员受伤或疾病状态下紧急撤离程序的培训。的培训。4、在四级生物安全水平的最高防护实验室中的工作人员、在四级生物安全水平的最高防护实验室中的工作人员与实验室外面的支持人员之间，必须建立常规情况和紧急与实验室外面的支持人员之间，必须建立常规情况和紧急情况下的联系方法。情况下的联系方法。实验室的设计和设施1、基本防护。必须配备由下列之一或几种组合而成的、有效的基本防护系统。级生物安全柜型实验室 防护服型实验室 级生物安全柜型实验室 在进入有在进入有级生物安全柜的房间（安全柜房间）级生物安全柜的房间（安全柜房间）前，要先通过至少有两道门的通道。在该类实验前，要先通过至少有两道门的通道。在该类实验室结构中，由室结构中，由级生物安全柜来提供基本防护。级生物安全柜来提供基本防护。实验室必须配备带有内外更衣间的个人淋浴室。实验室必须配备带有内外更衣间的个人淋浴室。对于不能从更衣室携带进出安全柜型实验室的材对于不能从更衣室携带进出安全柜型实验室的材料、物品，应通过双门结构的高压灭菌器或熏蒸料、物品，应通过双门结构的高压灭菌器或熏蒸室送入。室送入。只有在外门安全锁闭后，实验室内的工作人员才只有在外门安全锁闭后，实验室内的工作人员才可以打开内门取出物品。高压灭菌器或熏蒸室的可以打开内门取出物品。高压灭菌器或熏蒸室的门采用互锁结构，除非高压灭菌器运行了一个灭门采用互锁结构，除非高压灭菌器运行了一个灭菌循环，或已清除熏蒸室的污染，否则外门不能菌循环，或已清除熏蒸室的污染，否则外门不能打开。打开。防护服型实验室 自带呼吸设备的防护服型实验室，在设计和设施自带呼吸设备的防护服型实验室，在设计和设施上与配备上与配备级生物安全柜的四级生物安全水平实级生物安全柜的四级生物安全水平实验室有明显不同。验室有明显不同。防护服型实验室的房间布局设计成人员可以由更防护服型实验室的房间布局设计成人员可以由更衣室和清洁区直接进入操作感染性物质的区域。衣室和清洁区直接进入操作感染性物质的区域。必须配备清除防护服污染的淋浴室，以供人员离必须配备清除防护服污染的淋浴室，以供人员离开实验室时使用。还需另外配备有内外更衣室的开实验室时使用。还需另外配备有内外更衣室的独立的个人淋浴室独立的个人淋浴室。进入实验室的人员需穿着一套正压的、供气经进入实验室的人员需穿着一套正压的、供气经HEPA HEPA 过滤的连身防护服。防护服的空气必须由双过滤的连身防护服。防护服的空气必须由双倍用气量的独立气源系统供给，以备紧急情况下倍用气量的独立气源系统供给，以备紧急情况下使用。使用。人员通过装有密封门的气锁室进入防护服型实验人员通过装有密封门的气锁室进入防护服型实验室。必须为在防护服型实验室内工作的人员安装室。必须为在防护服型实验室内工作的人员安装适当的报警系统，以备发生机械系统或空气供给适当的报警系统，以备发生机械系统或空气供给故障时使用。故障时使用。2、进入控制。四级生物安全水平的最高防护实验室必须位于独立的建筑内，或是在一个安全可靠的建筑中明确划分出的区域内。人员或物品的进出必须经过气锁室或通过系统。人员进入时，需更换全部衣服，而离开时，在穿上自己的日常服装前应淋浴。3、通风系统控制。设施内应保持负压。供风和排风均需经HEPA 过滤。级安全柜型实验室和防护服型实验室的通风系统有显著差异：级安全柜型实验室 防护服型实验室 级安全柜型实验室 通入级生物安全柜的气体可以来自室内，并经过安装在生物安全柜上的HEPA 过滤器，或者由供风系统直接提供。从级生物安全柜内排出的气体在排到室外前需经两个HEPA 过滤器过滤。工作中，安全柜内相对于周围环境应始终保持负压。应为安全柜型实验室安装专用的直排式通风系统。防护服型实验室 需要配备专用的房间供风和排风系统。通风系统中的供风和排风部分相互平衡，以在实验室内产生由最小危险区流向最大潜在危险区的定向气流。应配备更强的排风扇，以确保设施内始终处于负压。必须监测防护服型实验室内部不同区域之间及实验室与毗连区域间的压力差。必须监测通风系统中供风和排风部分的气流，同时安装适宜的控制系统，以防止防护服型实验室压力上升。供风经HEPA 过滤后输送至防护服型实验室、用于清除污染的浴室以及用于清除污染的气锁室或传递室内。防护服型实验室的排风必须通过两个串连的HEPA 过滤器过滤后释放至室外，或者在经过两个HEPA 过滤器过滤后循环使用，但仅限于防护服型实验室内。在任何情况下，四级生物安全水平实验室所排出的气体均不能循环至其他区域。如果选择在防护服型实验室内循环使用空气，那么在操作中要极度谨慎，必须要考虑所进行研究的类型、在防护服型实验室中所使用的仪器、化学品及其他材料，以及研究中所使用动物的种类。所有的HEPA 过滤器必须每年进行检查、认证。HEPA 过滤器支架的设计使得过滤器在拆除前可以原地清除污染。也可以将过滤器装入密封的、气密的原装容器中以备随后进行灭菌和或焚烧处理。4、污水的净化消毒。所有源自防护服型实验室、用于清除污染的传递间、用于清除污染的浴室或级生物安全柜的污水污水，在最终排往下水道之前，必须经过净化消毒处理。首选加热消毒（高压灭菌）法。污水在排出前，还需将pH 值调至中性。个人淋浴室和卫生间的污水可以不经任何处理直接排到下水道中。5、废弃物和用过物品的灭菌。实验室内必须配备双门、传递型高压灭菌器。对于不能进行蒸汽灭菌的仪器、物品，应提供其他清除污染的方法。6、必须要有供标本、实验用品以及动物进入的气锁室。7、必须配备应急电源和专用供电线路。8、必须安装安全防护排水管。由于安全柜型或防护服型四级生物安全设施在工程、设计及结构方面的高度复杂性，这里没有给出此类设施的代表性图片。因为四级生物安全水平实验室中工作的高度复杂性，应单独制订详细的工作手册，并在培训中进行检查。此外还应制订应急方案。在制订应急方案的准备过程中，应与国家和地方的卫生主管机构积极协作。同时，也要包括消防、警察、定点收治医院等其他应急服务机构。2.6 实验动物设施关于动物实验室中使用的微生物，需要考虑的因素1、正常传播途径2、使用的容量和浓度3、接种途径4、能否和以何种途径被排出。关于动物实验室中使用的动物，需要考虑的因素1、动物的自然特性，亦即动物的攻击性和抓咬倾向性2、自然存在的体内外寄生虫3、易感的动物疾病4、播散过敏原的可能性。动物设施一级生物安全水平一级生物安全水平的动物设施适用于饲养大多数经过检疫的储备实验动物（灵长类除外，关于这类动物应向国家权威机构咨询），以及专门接种了危险度1 级微生物的动物。要求应用微生物学操作技术规范（GMT）。动物设施的主任必须制订动物操作和进入饲养场所应遵循的政策、规程和方案，为工作人员制订适宜的医学监测方案，制订并执行安全或操作手册。动物设施二级生物安全水平1、必须符合一级生物安全水平动物设施的所有要求。2、在门及其他适宜的地方张贴生物危害警告标志。3、设施的设计必须易于清洁和管理。4、门必须向内开，并可以自动关闭。5、要有适宜的温度、通风和照明。6、如果采用机械通风，则气流的方向必须向内。排出的空气要排到室外，不得在建筑物内循环使用。7、授权人员方可进入。8、仅接纳实验用动物。9、应制订节肢动物和啮齿类动物的控制方案。10、如有窗户，必须是安全、抗击碎的。如果窗户可以打开，则必须安装防节肢动物的纱网。11、使用后，工作表面应用有效的消毒剂来清除污染（见第14 章）。12、可能产生气溶胶的工作必须使用生物安全柜（级或级）或隔离箱，隔离箱要带有专用的供气和经HEPA 过滤的排气装置。13、动物设施的现场或附近备有高压灭菌器。14、清理动物的垫料时必须尽量减少气溶胶和灰尘的产生。15、所有废料和垫料在丢弃前必须先清除污染。16、尽可能限制锐利器具的使用。锐器应始终收集在带盖的防刺破容器中，并按感染性物质处理。17、进行高压灭菌、焚烧的物品应装在密闭容器中安全运输。18、动物笼具在使用后必须清除污染。19、动物尸体必须焚烧。20、在设施内必须穿着防护服和其他装备，离去时脱下。21、必须有洗手设施。人员离开动物设施前必须洗手。22、如发生伤害，无论程度轻重，必须进行适当的治疗，且要报告并记录。23、禁止在设施内进食、饮水、吸烟和化妆。24、所有人员必须接受适当的培训。动物设施三级生物安全水平1、必须符合一级和二级生物安全水平动物设施的所有要求。2、严格控制进入。3、设施必须通过由双门入口构成的缓冲间，以便与实验室的其他部分及动物房隔开。4、缓冲间内必须配备洗手设施。5、缓冲间内必须配备淋浴设施。6、必须采用机械通风，以确保连续的气流通过每个房间。室内空气排出到室外前，必须经HEPA 过滤，不得循环使用。系统的设计必须可以防止意外逆流及动物室内出现正压。7、在存在生物学危害的动物室内，必须在方便的位置安装高压灭菌器。感染性废弃物在移至设施的其他区域前需高压灭菌。8、现场应当就近备有焚烧炉，或由主管部门另作安排。9、感染危险度3 级微生物的动物的饲养笼具，必须置于隔离器或在笼具后装有通风系统排风口的房间中。10、垫料应尽量无尘。11、所有的防护服在洗烫前必须先清除污染。12、窗户必须关闭、封严、抗破损。13、工作人员应进行适当的免疫接种。动物设施四级生物安全水平1、必须符合一级、二级及三级生物安全水平动物设施的所有要求。2、严格限制进入，只有主任指定的工作人员方有权进入。3、禁止单独工作，必须遵守双人工作制度。4、工作人员必须已经接受过最高水平的微