人乳头瘤病毒讲解学习.ppt

人乳头瘤病毒（人乳头瘤病毒（HPVHPV）基因分型）基因分型检测检测湖北省肿瘤医院 雷旦生人乳头瘤病毒（HPV）HPV(人类乳头瘤病毒)是以人类为唯一宿主的一种DNA病毒，现在已经明确，HPV与宫颈癌的发生高度相关。医学数据表明，6070的女性感染过HPV病毒，99.8的宫颈癌患者中可以检测到HPV，而HPV阴性者几乎不会发生宫颈癌。除此之外，98以上的宫颈疾病患者体内也存在HPV。目前有100余种型别HPV,约35种型别与生殖道感染有关，大约20种型别与癌症相关。与宫颈癌相关的高危型HPV有13种：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68。与宫颈癌相关的低危型别有：6，11，40，42，43，44。HPV基因分型检测的意义宫颈病变及宫颈癌的筛查，通过分型检测对患者个体化评估，预测宫颈病变发生的风险度,决定筛查的间隔、治疗方案的制定。未明确诊断意义的非典型鳞状细胞和腺细胞（AS-CUS/AGUS）和宫颈上皮内低度病变（LSIL）的分流，提高诊断的可信度，降低漏疹风险。宫颈病变治疗后的追综和随访HPV阳性还可提示生殖器赘生物为尖锐湿疣的可能性。HPV感染与宫颈炎的发生有密切关系。HPV病毒也可引起宫颈糜烂。宫颈癌筛查方案1.基本筛查方案醋酸或碘染色后肉眼观察阳性阴性阴道镜活检+病理检查相应治疗定期随访2.一般筛查方案HPV检测+传统巴氏涂片HPV（CytoASC-USHPV（+）CytoASC-USHPV（-）CytoASC-HHPV（+）CytoASC-H随访（次/3-5年随访（次/年阴道镜检查/多点活检+ECC相应治疗（-）（+）3.最佳筛查方案HPV检测+液基细胞学检查HPV（-）CytoASC-USHPV（+）CytoASC-USHPV（-）CytoASC-HHPV（+）CytoASC-H随访（次/3-5年随访（次/年阴道镜检查/多点活检+ECC相应治疗（+）（-）HPV基因分型检测的方法我科目前采用分子生物学前沿技术多重PCR（聚合酶链式反应）先进技术，通过对HPV-DNA基因分型，可快速、准确地检测常见的23种HPV亚型包括5种低危型（HPV6，11，42，43，44）和18种高危型（HPV16，18，31，33，52等），覆盖了现有已知的与人生殖道感染有关的绝大部分HPV亚型。HPV基因分型芯片技术特点HPV基因芯片分型检测，利用L区相对保守区的引物对待测样品中可能HPV亚型进行广谱扩增，再将产物与固定在膜芯片上的亚型特异性探针进行杂交，显色并判读结果。此技术灵敏、准确、高效、快速，并确定具体亚型。GC-HPV检测实验流程检测实验流程HPV检测目标物：宫颈脱落细胞、疣体组织、组织切片、活体组织阴道镜下“活检”组织的采集 通过阴道镜观察宫颈表面血管的病变，并用宫颈活检钳或宫颈管刮勺从宫颈上提取可疑组织，装入有保存液的洗脱管中，旋紧管盖，做好标识 疣体样本的采集用棉拭子在疣体表面剐蹭4-6遍，也可以把通过手术切除下来的疣体直接作为检测样本。专用的宫颈脱落细胞采集器专用的宫颈脱落细胞采集器步骤1.标本采集扩阴器暴露宫颈口，用棉拭子将分泌物擦去将宫颈刷伸入宫颈口，单向轻柔转动4-5周将其放入有保存液的洗脱管中旋紧管盖，做好标识将宫颈刷折断，刷头留在管中步骤二：提取步骤二：提取HPV DNAHPV DNA13000rpm10分钟，弃上清 将将标标本本转转移移到到1.5mL微量离心管中微量离心管中加加50 L 裂裂解解液液充充分分悬浮沉淀悬浮沉淀100加热10分钟 13000rpm离离心心10分分钟钟，保留上清待用保留上清待用步骤三：步骤三：PCRPCR扩增扩增5015min95 10min94 30s 42 90s 40 cycles 72 30s72 5min 51洗脱15min步骤四：杂交与洗脱步骤四：杂交与洗脱 设定杂交仪的温度，无需看守，于51杂交1小时 PCR产物加入杂交缓冲液中,沸水浴变性10min步骤五步骤五 显色与结果判读显色与结果判读POD孵育POD洗涤显色前准备配制显色液,显色检测结果：膜条显色直接提示感染的HPV亚型，包括高危及低危亚型。HPV6HPV11HPV16HPV18HPV31HPV33HPV35HPV39HPV42HPV43HPV45HPV51HPV52HPV53HPV56HPV58HPV44HPV59HPV66HPV68HPV73HPV83HPVMM4PC适用人群：三年以上性行为或21岁以上有性行为的女性宫颈病变及宫颈癌患者治疗后的随访尖锐湿疣患者咽喉部HPV感染导致的疣体增生的婴幼儿受检前须知：月经来潮后10-18天为最佳检查时间检查前三天内不要用避孕药膏等阴道内用药物及阴道冲洗检查前24小时最好不要有性生活HPV检验报告单将分为高危及低危两组报告结果，并注明两组中具体的阳性亚型，未注明的表示为阴性。例：HPV-DNA分型报告单 高危组 阳性（+）16，33 低危组 阴性（-）结果分析HPV-DNA阳性：2030的HPV病毒感染会引起疾病，如果HPV-DNA阳性，并伴随宫颈病变，应采取进一步医学检查，以明确病变性质。6070的人仅是HPV阳性而未见宫颈病变，提示虽然发生HPV感染但并没有导致宫颈病变或宫颈癌，只需每年进行一次HPV病毒筛查及相关其它检查即可。HPV-DNA阴性：如果30岁以上的女性HPV检测结果为阴性，同时细胞学检查提示没有发生任何病变，35年内都无需再做类似检查。HPV检测后的处理HPV基因分型检测阴性常规筛查阳性低危高危无症状一年后复查疣体组织相应治疗（冷冻、激光）液基细胞学检查（TCT）正常一年后复查HPV 和TCTAS-CUS一年后复查HPV 和TCT或阴道镜检查ASC-H阴道镜活检/多点活检+ECC6个月后复查HPV 和TCT（-）（+）相应治疗标本收集时间及结果报告标本可于每天规定工作时间（8：00AM5：00PM）送检验科，未及时送检的可于4冰箱保存。在临床送检的标本量满足每天检测前提下，当日8：30后送检的标本，次日下午发出报告，若标本量较少，则集中在每周三、五进行检测。HPV感染后的教育信息HPV检测阳性只说明一种病毒感染，而不是疾病。感染是常见的，癌变是少见的。60-70%的妇女一生中曾会感染到HPV，其中绝大部分个体将会自身清除HPV。专家建议：对于只有HPV感染，没有宫颈病变的女性，可不予治疗。HPV感染主要是通过性传播，但不排除其他途径，应加强随访。HPV感染不能作为性生活复杂、混乱的指征。