沙门氏菌和检验专家讲座.pptx

概况 沙门氏菌引发人类伤寒、副伤寒和食物中毒。并引发动物沙门氏菌引发人类伤寒、副伤寒和食物中毒。并引发动物沙门氏菌引发人类伤寒、副伤寒和食物中毒。并引发动物沙门氏菌引发人类伤寒、副伤寒和食物中毒。并引发动物沙门氏菌病。可由不一样方式污染食品。是主要肠道致病菌。沙门氏菌病。可由不一样方式污染食品。是主要肠道致病菌。沙门氏菌病。可由不一样方式污染食品。是主要肠道致病菌。沙门氏菌病。可由不一样方式污染食品。是主要肠道致病菌。沙门氏菌分布极广，种类繁多。是肠杆菌科中最复杂菌属。按沙门氏菌分布极广，种类繁多。是肠杆菌科中最复杂菌属。按沙门氏菌分布极广，种类繁多。是肠杆菌科中最复杂菌属。按沙门氏菌分布极广种类繁多。是肠杆菌科中最复杂菌属。按Kanffman-WhiteKanffman-White分类标准有分类标准有分类标准有分类标准有22002200种以上血清型，当前公认分种以上血清型，当前公认分种以上血清型，当前公认分种以上血清型，当前公认分类方法是将沙门氏菌分为类方法是将沙门氏菌分为类方法是将沙门氏菌分为类方法是将沙门氏菌分为6 6个亚属（亚属个亚属（亚属个亚属（亚属个亚属（亚属）其中亚属）其中亚属）其中亚属）其中亚属再再再再分为分为分为分为a a和和和和b b）绝大多数（）绝大多数（）绝大多数（）绝大多数（99%99%）沙门氏菌亚属）沙门氏菌亚属）沙门氏菌亚属）沙门氏菌亚属 中菌种，其中菌种，其中菌种，其中菌种，其余亚属通常从冷血动物和环境中分离，偶然引发人类致病。沙余亚属通常从冷血动物和环境中分离，偶然引发人类致病。沙余亚属通常从冷血动物和环境中分离，偶然引发人类致病。沙余亚属通常从冷血动物和环境中分离，偶然引发人类致病。沙门氏菌主要经过污染食品和水源经口感染。引发沙门氏菌食源门氏菌主要经过污染食品和水源经口感染。引发沙门氏菌食源门氏菌主要经过污染食品和水源经口感染。引发沙门氏菌食源门氏菌主要经过污染食品和水源经口感染。引发沙门氏菌食源性疾病主要食品是动物性食品如生肉、牛排、禽肉、动物内脏性疾病主要食品是动物性食品如生肉、牛排、禽肉、动物内脏性疾病主要食品是动物性食品如生肉、牛排、禽肉、动物内脏性疾病主要食品是动物性食品如生肉、牛排、禽肉、动物内脏等，乳类和乳制品、蛋及蛋制品也可传输。从业人员带菌在引等，乳类和乳制品、蛋及蛋制品也可传输。从业人员带菌在引等，乳类和乳制品、蛋及蛋制品也可传输。从业人员带菌在引等，乳类和乳制品、蛋及蛋制品也可传输。从业人员带菌在引发食物中毒中也不容忽略。引发食物中毒菌型很多，主要有鼠发食物中毒中也不容忽略。引发食物中毒菌型很多，主要有鼠发食物中毒中也不容忽略。引发食物中毒菌型很多，主要有鼠发食物中毒中也不容忽略。引发食物中毒菌型很多，主要有鼠伤寒、肠炎、猪霍乱汤卜逊及丙型副伤寒沙门菌。国外，以鼠伤寒、肠炎、猪霍乱汤卜逊及丙型副伤寒沙门菌。国外，以鼠伤寒、肠炎、猪霍乱汤卜逊及丙型副伤寒沙门菌。国外，以鼠伤寒、肠炎、猪霍乱汤卜逊及丙型副伤寒沙门菌。国外，以鼠伤寒沙门菌占第一位。我国鼠伤寒所致食物中毒占伤寒沙门菌占第一位。我国鼠伤寒所致食物中毒占伤寒沙门菌占第一位。我国鼠伤寒所致食物中毒占伤寒沙门菌占第一位。我国鼠伤寒所致食物中毒占29.529.5，具，具，具，具第一位。第一位。第一位。第一位。沙门氏菌和检验专家讲座第1页一、形态与染色沙门氏菌和检验专家讲座第2页二、培养特征沙门氏菌和检验专家讲座第3页沙门氏菌在胆硫乳琼脂沙门氏菌在胆硫乳琼脂(DHL琼脂琼脂)上经典特征上经典特征 沙门氏菌和检验专家讲座第4页沙门氏菌在沙门氏菌在SS琼脂上经典琼脂上经典特征特征 沙门氏菌和检验专家讲座第5页沙门氏菌在沙门氏菌在HE琼脂上经典琼脂上经典特征特征 沙门氏菌和检验专家讲座第6页 三、检验程序沙门氏菌和检验专家讲座第7页四、生化试验及亚属判定沙门氏菌和检验专家讲座第8页 沙门氏菌和志贺氏菌主要生化试验原理、试验方法、结果观察沙门氏菌和检验专家讲座第9页1、三糖铁琼脂：肠道致病菌检验作初步筛检用，底层穿刺、斜面划线接种。37培养24h。底层产酸表示葡萄糖发酵（变黄色），斜面产酸表示乳糖或蔗糖发酵，中段变黑表示产硫化氢。沙门氏菌和检验专家讲座第10页2、综合半固体：包含三项靛基质、尿素和动力。穿刺接种，37培养12天 靛基质于上层滴加靛基质试剂（45滴），出现红色环为阳性，黄色为阴性。其原理是细菌分解蛋白胨中色氨酸，生成靛基质（吲哚）与对二甲氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚红色。尿素：如被测细菌有尿素酶，可分解培养基中尿素，产生大量氨使培养基变碱，而使培养基变红色（培养基内有酚红指示剂碱性时为玫红色）动力观察：如被测细菌有鞭毛即有动力，沿穿刺线扩散生长，即动力阳性。靛基质和尿素试验均属氨基酸和蛋白质代谢试验沙门氏菌和检验专家讲座第11页3、氰化钾试验：即抑菌试验，氰化钾能够抑制一些细菌呼吸酶系统，呼吸酶以铁卟啉为辅基，氰化钾能和铁卟啉结合，而使这些酶失去活性，使细菌生长受到抑制。沙门氏菌和检验专家讲座第12页3、氰化钾试验：取3724h肉汤培养物一接种环至氰化钾培养基内，同时接种一环到不含氰化钾一样培养基中作为对照。37培养连续观察两天如有细菌生长培养基浑浊即为阳性。细菌不生长为阴性，对照应有菌生长。肠杆菌科中沙门氏菌、志贺氏菌为阴性。在判定上有主要价值。沙门氏菌和检验专家讲座第13页4、氨基酸脱羧酶试验：属氨基酸代谢试验 细菌分解氨基酸使其脱掉羧基，生成胺和CO2反应叫脱羧反应。细菌所产生酶叫脱羧酶，氨基酸经脱羧产生胺均可使培养基变碱可用指示剂显示出来。于被检测菌斜面上挑取培养物接种到氨基酸培养基及对照培养基（无氨基酸）。37培养1-2天。天天检验一次结果，黄色为阴性（仅发酵葡萄糖）对照为黄色（发酵葡萄糖产酸）氨基酸管从黄色变紫色为阳性。沙门氏菌和检验专家讲座第14页5、丙二酸盐：属碳源利用试验。当细菌能够利用丙二酸钠唯一碳源时，丙二酸钠被分解生成碳酸钠。使培养基变碱。用新鲜斜面培养物接种，37培养48小时阳性者由绿色变为兰色。沙门氏菌和检验专家讲座第15页6、糖类分解试验 （糖发酵试验）：属 糖类代谢试验 细菌分解糖类系依靠细菌细胞所产生各种酶类作用，而这些酶类随细菌种类不一样而各不相同。故可利用此来判别细菌，糖发酵试验培养基惯用指示剂为溴甲酚紫或溴麝香草酚兰。最惯用是液体糖发酵管。如细菌利用该糖类使其发酵产酸，培养基由紫色变为黄色或绿色变为黄色为阳性。沙门氏菌和检验专家讲座第16页7、ONPG （-半乳糖苷酶试验）糖类代谢试验利用邻硝基苯酚-半乳糖苷来测定-半乳糖苷酶，当培养基内有微量邻硝基苯酚产生时即可呈显著黄色。自斜面上挑取满环细菌挑种到ONPG培养基内，37培养1-3小时和24小时观察结果，如有该酶则于1-3天后培养基内有邻硝基苯酚产生而呈黄色，如无此酶则24小时不变色，沙门氏菌为阴性。ONPG无法买到时可用5%乳糖代替，但应降低蛋白胨含量为0.2-0.5%，能够使大部分迟缓发酵细菌于一天内发酵。沙门氏菌和检验专家讲座第17页8、枸橼酸盐利用试验：当细菌能够利用铵盐作为唯一氮源同时利用其作为唯一碳源时可在枸橼酸盐培养基上生长，分解枸橼酸钠生成碳酸钠使培养基变碱。将琼脂培养物做成盐水悬液接种一环于斜面上，37培养4天，天天观察结果一次，阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为兰色。沙门氏菌为阳性，志贺氏菌阴性。沙门氏菌和检验专家讲座第18页9、葡萄糖铵利用试验：当细菌能够利用铵盐作为唯一氮源且不需要尼克酸和氨基酸作为生长因子时能够在该培养基上生长。细菌生长时分解葡萄糖使培养基变酸。取培养物表面在盐水管内做成极稀悬液。肉眼观察不见浑浊，以每一接种环内含菌数20-100之间为宜，将接种环重新灭菌后挑取菌液接种。同时再以同法接种普通斜面一支作对照37培养24小时。本试验要求比较严格，阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小菌落生长，阴性者不生长，但对照上生长良好。如在葡萄糖铵斜面上生长极微小菌落可视为阴性结果，大肠埃希菌阳性，志贺氏阴性，可用此试验给予判别。沙门氏菌和检验专家讲座第19页10、七叶苷水解试验 （糖代谢试验）细菌水解七叶苷生成葡萄糖和七叶素。七叶素 与 培养基内枸橼酸铁试剂二价铁离子起反应生成黑色化合物。自琼脂培养物接种与七叶苷培养基内，培养过夜观察结果。阳性 反应时培养基变为棕黑色，志贺菌为阴性。沙门氏菌和检验专家讲座第20页11、氧化酶试验：氧化酶或称细胞色素氧化酶，是细胞色素呼吸酶系统终末呼吸酶，此酶并不直接与氧化酶试剂起反应，而是首先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，产生颜色反应。取洁净滤纸一角沾取试验菌少许，加试剂1滴，阳性者立刻呈粉红色，5-10秒内展现紫色反应为氧化酶阳性。沙门菌、志贺菌阴性，弧菌属细菌阳性。沙门氏菌和检验专家讲座第21页五、血清学凝集试验沙门氏菌和检验专家讲座第22页六、噬菌体裂解试验噬菌体是寄生于细菌病毒，它们随同细菌分布于自然界中，噬菌体对于它们 宿主细菌含有一定特异性。故可利用噬菌体来判定一些细菌且对于某种菌作为一个 必要判定项目。噬菌体对于它们宿主细菌还含有型特异性，所以可用于细菌分型。应用肠杆菌科噬菌体诊疗法来检验食品及食物中毒中沙门氏菌，志贺氏菌性大肠埃希菌，也适合用于食品从业人员带菌检验。沙门氏菌和检验专家讲座第23页