51例卵巢癌患者BRCA1_2基因突变的分析.pdf

国际生殖健康/计划生育杂志2 0 2 3年7 月第42 卷第4期JIntReprodHealth/FamPlan，Ju l y 2 0 2 3,Vo l.42,No.4D0I:10.12280/gjszjk.2023011951例卵巢癌患者BRCA1/2基因突变的分析277.论著葛艳,许飞雪，李虹维，高明霞【摘要】目的：评估BRCA1/2基因突变状态与卵巢癌患者临床特征的相关性及对预后的影响。方法：选取2 0 17 年11月一2 0 2 2 年6 月在兰州大学第一医院进行治疗的51例接受BRCA1/2基因检测的卵巢癌患者作为研究对象，根据检测结果分为BRCA1/2突变组（30 例）和BRCA1/2正常组(2 1例）。比较2 组患者的临床基线资料、临床病理特征和预后,分析影响BRCA1/2基因突变的卵巢癌患者预后的相关因素。结果:BRCA1/2突变组与BRCA1/2正常组相比，发病年龄、体质量指数(body mass index,BMI)、恶性肿瘤家族史、治疗前糖类抗原12 5（c a r b o h y d r a t e a n t i g e n 12 5,CA 12 5）及人附睾蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)差异均无统计学意义（均P0.05）。BRCA 1/2 突变组与BRCA1/2正常组肿瘤分期及淋巴结转移情况比较，差异有统计学意义（P0.05).Therewere significant diferences in the tumor stage and lymph node metastasis between the BRCA1/2 mutation groupand the BRCA1/2 non-mutation group(P0.05).Multivariate Cox analysis showed that the BRCA1/2 genemutation was not an independent prognostic factor for survival and PFS in ovarian cancer(HR=0.752,95%CI:0.394-1.435,P=0.329).Conclusions:The BRCA1/2 gene mutation is an important factor in determining theclinical treatment of ovarian cancer,and it is significantly related to tumor stage and lymph node metastasis.However,the BRCA1/2 gene mutation could not be an independent risk factor for ovarian cancer.Keywords Ovarian neoplasms;Genes,BRCAl;Genes,BRCA2;Genes;Mutation;Prognosis;Proportionalhazards models(J Int Reprod Health/Fam Plan,2023,42:277-281)卵巢癌(ovarian cancer,Oc)是女性生殖系统常见的一种恶性肿瘤,由于该病早期症状不明显而不容易被发现且盆腔种植转移早,其发病率位居妇科恶性肿瘤第3位,病死率高居妇科恶性肿瘤之首,5年生存率约为2 0%。世界卫生组织第5版女性生殖道基金项目：甘肃省自然科学基金（2 1JR7RA378）；兰州大学第一医院院内基金(ldyyn2018-05)作者单位：7 30 0 30 兰州大学第一医院（葛艳，许飞雪，高明霞）；兰州大学第一临床医学院（李虹维）通信作者：高明霞，E-mail：g a o mx 0 5 16 3.c o m肿瘤分类将卵巢癌分为至少5种主要且不同的类型：高级别浆液性癌、低级别浆液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌和黏液癌2。不同类型卵巢癌的危险因素、前驱病变、发病机制、扩散模式、分子特征、临床病程、对化疗的反应及治疗结局并不相同。由于卵巢癌的发病机制尚不明确，且有多种因素（包括遗传、经济、环境、生活方式等)参与了卵巢癌的发生，而目前还没有用于早期检测的筛查公共计划,因此，卵巢癌的早期检测依然非常困难，多数患者确诊时已到晚期,并已发生转移3。卵巢癌的发生机制虽未278阐明,但越来越多的证据表明,遗传因素在卵巢癌的病因学中起着重要作用。BRCA1和BRCA2是最广为人知的卵巢癌遗传易感基因,BRCA基因突变增加了卵巢癌的遗传风险,有研究发现BRCA1基因突变女性的卵巢癌发病风险是BRCA2基因突变女性的34倍4。本研究通过对51例卵巢癌患者BRCA基因进行检测,并分析其临床及病理特征、结局预后,探索卵巢癌BRCA基因突变与患者临床、病理学特征的相关性,并进一步对相关影响因素进行分析。1对象与方法1.1研究对象选取2 0 17 年11月一2 0 2 2 年6 月在兰州大学第一医院治疗的51例接受BRCA1/2基因检测的卵巢癌患者作为研究对象，年龄34 7 2 岁，中位年龄54.3岁。本研究经兰州大学第一医院医学伦理委员会审核获批准（批号LDYYLL2023-244）。纳人标准：病理组织学类型为卵巢癌；未合并其他系统或器官恶性肿瘤；初始治疗进行了满意的卵巢肿瘤细胞减灭术(primary debulking surgery,PDS)或新辅助化疗（neoadjuvantchemotherapy,NAC)联合中间肿瘤细胞减灭术(interval debulking surgery,IDS），且2 种治疗方式的人组患者均接受了一线铂类药物化疗，化疗疗程共6 8 个周期，上述治疗结束后疗效评价为缓解；均未接受任何多腺苷二磷酸核糖聚合酶poly(ADP-ribose)polymerase,PARP抑制剂治疗。排除标准：存在其他重大器官疾病;合并其他系统或器官恶性肿瘤；一线治疗期间，同步接受其他肿瘤放疗。1.2研究方法收集患者的发病年龄、体质量指数（bodymass index,BMI）肿瘤家族史（一级或二级亲属）治疗前糖类抗原12 5（carbohydrateantigen125，CA 12 5）水平、人附睾蛋白4(humanepididymis protein4,HE4）水平、淋巴转移与否、临床分期、肿瘤分级、病理类型、治疗方式、复发情况、是否铂敏感复发、是否突变及突变位点分析等数据，电话随访或门诊随访，获取患者是否复发和生存状态。人组患者有完整的病历信息，经过正规系统的治疗，治疗方式包括肿瘤细胞减灭术、中间细胞减灭术、单纯化疗，化疗均是以铂类为基础的化疗方案。治疗及生存指标定义：无进展生存期（progression-freesurvival,PFS)指治疗结束(末次化疗日期)至肿瘤进展(第一次复发)或2 0 2 3-0 1-2 0 的间期。初始治疗后PFS6个月为铂敏感复发，6 个月为铂耐药复发。1.3BRCA基因突变检测人组51例患者均自愿接受BRCA1/2基因检测,签署了知情同意书。抽取患者静脉血5mL，置人含乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)的抗凝管，送至上海鼎晶生物医药科技有限公司进行高通量DNA测序，采用二代测序（nextgenerationsequencing，NGS）技术,BRCA检测包括通过NGS技术检测的BRCA1、BRCA2基因的全外显子及毗邻剪接区域，检测的变异类型为国际生殖健康/计划生育杂志2 0 2 3年7 月第42 卷第4期JIntReprodHealth/FamPlan,July2023,Vol.42,No.4点突变、小片段插人/缺失和重复。根据检测结果将患者分为BRCA1/2突变组（30 例）和BRCA1/2正常组（2 1例）。1.4信息分析本检测基于多重聚合酶链反应法的核酸序列靶向捕获及高通量测序技术，测序平台为illumina_nextseq2000_VH00185。检测覆盖10 0%的碱基替换突变（95%CI:82%100%）及95%的小片段插入缺失突变（95%CI:98.5%10 0%）。数据通过BWA-MEM软件与人类参考基因组(version hg19)进行比对,Variant calls采用sentieon(version20201001)软件，分析流程涉及软件及版本号为fastp(version 0.23.0)bwa(version 0.7.17)、s a m t o o ls (v e r s io n 1.9),annovar(version 20180416),cnvkit(version 0.9.7),msisensor2(version2.0)和genefuse(version0.6.1）。数据校准与突变注释使用的软件为TOPGEN自主知识产权分析软件（version即时更新），突变注释的主要参考数据库包括Clinvar（v e r s i o n20220624),Intervar(version 20180118),C0SMIC(version 70),g1000（v e r s i o n 2 0 15a u g),EXA C（v e r s i o n 0 3),d b n s f p(v e r s i o n35a）、a v s n p（v e r s i o n 150）、T O PG EN自建中国人群数据库(version即时更新)等。1.5统计学方法采用SPSS25.0统计学软件对数据进行分析。定性资料以例数（%）表示，组间比较采用卡方检验。PFS生存分析采用Cox回归生存分析并进行Log-rank检验。P0.05）。见表1。2.2BRCA1/2突变位点及突变类型BRCA1共检测到3种移码突变，3种错义突变，4种终止突变，3种剪接突变，1种同义突变，1种无义突变，1种大片段重排，1种非移码缺失突变;BRCA2共检测到3种移码突变，6 种错义突变，5种终止突变，1种同义突变，1种杂合突变，1种重复突变。具体情况见表2。2.32组患者临床病理特征比较BRCA1/2突变组的肿瘤分期 I V 期占比以及淋巴结转移发生率均高于BRCA1/2正常组,差异有统计学意义（P0.05)。见表3。2.4生存结局分析BRCA1/2突变组中位生存时间为2 年,BRCA1/2正常组为1.7 年。将BMI、肿瘤分期、是否淋巴结转移、是否铂敏感复发这4个因素纳入多因素Cox回归分析中，结果显示,BRCA1/2突变不是卵巢癌生存率及PFS的独立预后因素（HR=0.752,95%CI:0.3941.435,P=0.329)。见图1。国际生殖健康/计划生育杂志2 0 2 3年7 月第42 卷第4期JIntReprodHealth/FamPlan，Ju ly 2 0 2 3，V o l.42,No.43讨论卵巢癌是一种常见的女性生殖系统肿瘤，常发生于40 6 0 岁女性。卵巢癌的诊断通常需要结合影像学、病理学检查以及肿瘤标志物。卵巢恶性肿瘤风险值(risk of ovarianmalignancy,ROMA)基于绝经状态以及CA125和HE4水平进行计算，可以更好地鉴别卵巢良恶性肿瘤、有效辅助评估卵巢癌风险、监测卵巢癌患者治疗效果和疾病进展。由于卵巢癌的早期症状往往不明显,发病机制也尚不明确,故确诊时常已为晚期。有研究发现BRCA1/2基因突变显著增加卵巢癌的风险，且BRCA1/2突变携带者患卵巢癌通常预后更差。本研究旨在探讨BRCA1/2基因突变与卵巢癌临床及病理特征的相关性。3.1 BRCA1/2突变与卵巢癌抑癌基因,在DNA修复、细胞周期控制和细胞凋亡中发挥关键作用。BRCA1和BRCA2的种系突变与乳腺癌和卵巢癌的风险增加有关。一般来说，BRCA1突变携带者患卵巢癌的终生风险估计为2 7%44%,而BMI(kg/m)组别nBRCA1/2突变组3011(36.7)19(63.3)18(60.0)12(40.0)6(20.0)24(80.0)12(40.0)BRCA1/2正常组21XP序号BRCA1(n=17)1234567891011121314151617279.BRCA2突变携带者估计为11%17%l7。约1/4的卵巢癌是由遗传因素造成的，在遗传性乳腺癌卵巢癌综合征中,有40%与BRCA基因突变有关,还有一部分与BRCA基因以外的其他基因突变有关8-10 。本研究显示,BRCA1/2突变状态与卵巢癌临床特征密切相关,且对预后产生重要影响。BRCA1/2突变组肿瘤分期更晚、淋巴结转移率更高，提示BRCA1/2突变可能增加卵巢癌的侵袭性，这一结果与以往研究结论叫一致。尽管本研究中BRCA1/2突变组生存时间较BRCA1/2正常组长，但这可能源于该组患者更倾向于接受积极的化疗或目标治疗。这些结果证明BRCA基因状态是决定卵巢癌预后的关键因素。BRCA1和BRCA2是BRCA基因的单核苷酸多态性和突变是导致BRCA基因结构和功能异常的主要原因,BRCA1/2基因突变类型包括移码突变、无义突变、错义突变、终止突变、剪切突变及重复突变6 种类型,对蛋白质的编码起到重要作用2 。本研究中BRCA1共检测到3种表12 组患者临床基线资料比较例(%)发病年龄(岁)恶性肿瘤家族史治疗前CA125(U/mL)50507(33.3)14(66.7)0.0600.806突变位点NM_007294:intron21:c.5406+1GANM_007294:exon10:c.1058GA:p.Trp353TerNM_007294:exon10:c.1312GT:p.Glu438Terexon18-exon19c.1325GAc.5728-1GCc.5470_5477delATTGGGCANM_007294:intron4c.21+1GTp-pro115*(c.342_343delTC)c.302-2AGc.5054CTNM_007294:exon15:c.4713_4715del:p.Ser1572delc.2572CTc.1396delCc.3113AGc.4900AGc.2008delG治疗前HE4(pmol/L)242417(81.0)4(19.0)1(4.8)2.5192.4220.1120.120表2 BRCA1/2突变位点及突变类型突变方式BRCA2(n=17)剪接突变1终止突变2终止突变3大片段重排4同义突变5剪接突变6移码突变7终止突变8终止突变9剪接突变10错义突变11非移码缺失突变12无义突变13移码突变14错义突变15错义突变16移码突变17有20(95.2)序号NM_000059:exon:c.3794GT:p.Cys1265PheNM_000059:exon:c.6706del:p.Glu2236Lysfs*5NM_000059:exon23:c.9100CT:p.GIn3034TerNM_000059:exon11:c.2186TC:p.ILe729ThrNM_000059:exon14:c.7141CT:p.Pro2381SerNM_000059:exon:c.1012GA:p.Ala338Thrc.7625CTNM_000059:exon11:c.2808_2811del:p.Ala938Profs*21c.9097dupNM_000059:exon1l:c.4178CT:p.Ala1393ValNM_000059:exon11:c.3191CG:p.Ser1064Terc.9097delAc.3794GANM_007294:c.3649del:p.Ser1217Leufs*18c.865ACNM_000059:exonll:c.5959CT:p.GIn1987Terc.5320CT无9(42.9)0.0420.838突变位点50050018(60.0)12(57.1)1506(20.0)6(28.6)0.5040.478突变方式错义突变移码突变终止突变错义突变错义突变杂合突变同义突变移码突变重复突变错义突变终止突变终止突变终止突变移码突变错义突变终止突变错义突变15024(80.0)15(71.4)280.组别BRCA1/2突变组BRCA1/2正常组XP组别BRCA1/2突变组BRCA1/2正常组XP注：*BRCA1/2突变组和BRCA1/2正常组分别有17 例和9例复发。100(%）率手5000图1卵巢癌临床病理特征与生存结局关系移码突变，3种错义突变，4种终止突变，3种剪接突变，1种同义突变，1种无义突变，1种大片段重排，1种非移码缺失突变;BRCA2共检测到3种移码突变，6种错义突变，5种终止突变，1种同义突变，1种杂合突变，1种重复突变。移码突变和错义突变均会导致BRCA编码的蛋白质出现一级结构的改变，进而引起相关编码蛋白质功能发生改变或失活。根据目前的资料，这些变异会影响BRCA功能从而导致卵巢癌的发生、发展。遗传咨询和基因检测是确定突变状态的重要手段,为高风险者采取预防性措施和个体化治疗提供了重要依据。对于高风险者，可以采取预防性手术，如卵巢切除术和乳腺切除术来降低患癌的风险。另外,对于没有突变或低风险者,可以采取定期的体检和影像学检查来及时发现疾病。3.2卵巢癌的其他影响因素尽管BRCA突变状态与卵巢癌的发病和预后关系密切,但其并非是唯一影响卵巢癌预后的相关因素,还包括年龄、生殖健康史、生育史、家族史以及生活方式等。研究已证实，BMI偏高的女性较BMI正常的女性更易患卵巢癌13。因此,保持适度的BMI可降低卵巢癌风险。此外,有国际生殖健康/计划生育杂志2 0 2 3年7 月第42 卷第4期JIntReprodHealth/FamPlan，Ju l y 2 0 2 3,Vo l.42,No.4表32 组患者临床病理特征及结局比较例(%肿瘤分期肿瘤分级nII期303(10.0)218(38.1)5.7640.016化疗方案n紫杉醇+铂类多西他赛+铂类3018(60.0)2115(71.4)+BRCA1/2突变组+BRCA1/2正常组T24生存时间（年）淋巴结转移IIV期G1G227(90.0)17(56.7)13(61.9)15(71.4)1.1520.283是否铂敏感复发*是否12(40.0)14(82.4)6(28.6)5(55.6)0.7062.1480.4010.143恶性肿瘤家族史的女性卵巢癌风险增加4,这类女性应定期进行医学检查以早期发现疾病。生育史也是影响卵巢癌发病的重要因素。研究显示，生育次数越多,患卵巢癌的风险越低15。这可能是因为生育可以抑制卵巢功能,减少卵巢激素的分泌,从而减少卵巢癌的发生。然而，生育年龄的延迟与卵巢癌风险增加相关。此外，一些生活方式因素也与卵巢癌6发病相关。例如,吸烟7 和长期使用口服避孕药18 均可增加卵巢癌的发生风险，而喝茶可降低卵巢癌的发生风险19。总之,影响卵巢癌发病和预后的因素复杂多样。除BRCA突变状态外,BMI、家族史、生育史以及生活方式等因素同样重要。这些卵巢癌影响因素的研究为早期诊断和预防提供了依据。定期的体检及卵巢癌筛查、保持健康的生活方式可以最大限度降低卵巢癌的发生。3.3本研究的局限性尽管本研究分析了BRCA突变与卵巢癌关系,但仍存在一定的局限性,例如本研究样本量有限，需扩大样本量和开展多中心研究进一步验证。此外,未区分BRCA1和BRCA2突变对预后的不同影响，这也是后续的研究方向。综上所述,BRCA1/2基因突变是卵巢癌发病的危险因素之一，与肿瘤分期及淋巴结转移情况显著相关，但仍不能确定BRCA1/2基因突变是卵巢癌的独立危险因素。尽管本研究提供了有关BRCA1/2基因突变与卵巢癌临床及病理特征的相关性的初步认识，未来仍需进行更多研究以进一步了解BRCA1/2突变在卵巢癌发病机制中的作用，为卵巢癌患者的诊断、治疗和预后提供更多依据。此外,鼓励卵巢癌患者进行BRCA基因检测具有重要的临床指导意义。BRCA状态决定了卵巢癌的生物特征和预后,患病理类型C3G4是13(43.3)19(63.3)6(28.6)6(28.6)5.9730.0151年生存情况是否3(17.6)28(93.3)4(44.4)21(100.0)1.4570.227否11(36.7)15(71.4)2(6.7)0(0.0)浆液性腺癌23(76.7)7(23.3)15(71.4)6(28.6)0.1780.6732年生存情况是否23(76.7)7(23.3)17(81.0)4(19.0)0.1340.714其他国际生殖健康/计划生育杂志2 0 2 3年7 月第42 卷第4期JIntReprodHealth/FamPlan,July2023,Vol.42,No.4者有权利知晓这一关键信息以选择最佳治疗方案，且BRCA1/2突变者可获益于化疗联合PARP抑制剂等更积极的治疗,提高卵巢癌患者的预后。参考文献1Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics,2013 JJ.CACancer J Clin,2013,63(1):11-30.doi:10.3322/caac.21166.2 De Leo 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