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液相色谱基础知识岛津国际贸易（上海）有限公司岛津国际贸易（上海）有限公司液相色谱基础知识液相色谱基础知识液相色谱：液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法以液体作为流动相的色谱分离方法 适用于高沸点，大分子，强极性和热稳定性差的化合物分析。适用于高沸点，大分子，强极性和热稳定性差的化合物分析。流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用。流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用。气相色谱：气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法以气体作为流动相的色谱分离方法 适用于低沸点，热稳定性差的中小分子化合物分析。适用于低沸点，热稳定性差的中小分子化合物分析。流动相只起运载样品分子的作用。流动相只起运载样品分子的作用。液相色谱基础知识液相色谱基础知识色谱起源石油醚色素碳酸钙颗粒玻璃柱液相色谱基础知识液相色谱基础知识 液相色谱流程图液相色谱流程图溶剂柱温箱输液泵进样器检测器积分仪液相色谱基础知识液相色谱基础知识 流动相的选择流动相的选择采用采用“HPLC”级溶剂级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度对试样有适宜的溶解度溶剂粘度小溶剂粘度小与检测器匹配与检测器匹配液相色谱基础知识液相色谱基础知识溶剂等级 水的等级 *纯水 *蒸馏水 *去离子水 去离子水吸光率纯化水波长（nm）因为不纯物的存在，去离子水的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物液相色谱基础知识液相色谱基础知识溶剂等级 有机溶剂的等级 HPLC级 微量和梯度洗脱必须使用 优级纯级 分析纯级 根据使用目的选择使用 液相色谱基础知识液相色谱基础知识溶剂等级 缓冲液的使用 尽可能使用高级别纯度的化学试剂配制 使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀，磨损，阻塞。用纯水冲洗3060分钟（1ml/min）再用 甲醇冲洗30分钟 易受到细菌和霉菌的影响 不能直接用有机溶剂冲洗液相色谱基础知识液相色谱基础知识 溶剂等级 鬼峰的出现 水/MeOH梯度 ODS柱1ml/min在010Mins内MeOH 0100%线性变化后保持15Min洗脱曲线鬼峰液相色谱基础知识液相色谱基础知识 溶剂等级在微量分析和梯度洗脱时建议使用在微量分析和梯度洗脱时建议使用HPLC级溶剂和纯化水级溶剂和纯化水都经过蒸馏和都经过蒸馏和0.45um的过滤（除去纤维毛，未溶解的机械颗粒）的过滤（除去纤维毛，未溶解的机械颗粒）HPLC级经过级经过0.2um的过滤，且除去有紫外吸收的杂质的过滤，且除去有紫外吸收的杂质优级纯的纯度比分析纯高，但里面含有防腐剂和抗氧化剂优级纯的纯度比分析纯高，但里面含有防腐剂和抗氧化剂液相色谱基础知识液相色谱基础知识 溶剂前的处理过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱尤其是使用 无机盐配制的缓冲盐。脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响：1 泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2 柱中气泡使流动相绕流，使峰变形 3 检测器中的气泡会产生基线波动无在线脱气机应注意：1 每天脱气 2 如使用氦脱气，对混合好的溶剂脱气时间不能过长。液相色谱基础知识液相色谱基础知识 梯度形式的选择洗脱模式：高压梯度 用两台输液泵将两种流动相混合并输入系统 低压梯度 常压下用比例阀将流动相混合，单泵输入系统线性梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间成线性变化（增或减）指数梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间成指数关系（增或减）折线梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间无规则变化时间TB%B%B%时间时间TT线性梯度指数梯度折线梯度浓度浓度浓度液相色谱基础知识液相色谱基础知识 样品处理1 最好使用流动相溶解样品 可以减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要 保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其 在色谱柱中的沉淀。2 进样前最好使用0.45um的膜进行过滤 如果样品很脏，要使用0.2um的膜进行过滤液相色谱基础知识液相色谱基础知识 色谱柱的类型及适用范围参参 数数硅胶基底硅胶基底聚合物基底聚合物基底PH值范围值范围2 7.5宽范围宽范围有机溶剂有机溶剂所所 有有有限制有限制温温 度度 60 250kgf/cm2 250kgf/cm2低低 压压液相色谱基础知识液相色谱基础知识 ODS柱的使用注意点柱压应低于150kgf/cm2柱温在40左右，最高使用温度为50缓冲液PH值使用范围为2 7 硅胶基底ODS柱在PH值为3 4时稳定性最好；碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定 常用检测器常用检测器 紫外检测器（包括紫外检测器（包括PDA二极管阵列检测器）二极管阵列检测器）荧光检测器荧光检测器 示差检测器示差检测器 电导检测器电导检测器液相色谱基础知识液相色谱基础知识 紫外检测器紫外检测器 原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择 性吸收性吸收 定量基础：比尔定律定量基础：比尔定律 A=KCL 优点：灵敏度高；对温度和流速不敏感；可用梯优点：灵敏度高；对温度和流速不敏感；可用梯 度洗脱度洗脱 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质液相色谱基础知识液相色谱基础知识 荧光检测器荧光检测器 原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测 优点：优点：灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一。灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一。选择性好。选择性好。对温度和流速不敏感，可用梯度洗脱。对温度和流速不敏感，可用梯度洗脱。缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质。缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质。可测物质：多环芳烃，霉菌毒素，酪氨酸，色氨可测物质：多环芳烃，霉菌毒素，酪氨酸，色氨 酸，卟啉，儿茶酚氨等（具有对称共酸，卟啉，儿茶酚氨等（具有对称共 轭体系）轭体系）液相色谱基础知识液相色谱基础知识 示差折光检测器 原理：连续测定流通池中溶液的折射率来测定试原理：连续测定流通池中溶液的折射率来测定试 样中各组分浓度样中各组分浓度 优点：通用型检测器优点：通用型检测器 缺点：对温度变化敏感。缺点：对温度变化敏感。对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度洗脱对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度洗脱 属于中等灵敏度的检测器。属于中等灵敏度的检测器。液相色谱基础知识液相色谱基础知识 电导检测器电导检测器 原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电 导变化来测定电离物质含量。广泛应用于导变化来测定电离物质含量。广泛应用于 离子色谱法。离子色谱法。优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用 梯度洗脱。梯度洗脱。缺点：对温度变化敏感，每升高缺点：对温度变化敏感，每升高1,电导率增加电导率增加 2%-2.5%。主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机阴阳离子主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机阴阳离子液相色谱基础知识液相色谱基础知识岛津岛津VPVP系列液相色谱仪系列液相色谱仪 岛津LC-VP系列输液泵 目的分析型号流速范围ml/min特性和应用LC-10ADvp并联式LC-10ATvp串联式非凡的耐用性，适用于常量分析0.0019.9990.0014.999无脉动，适用于半微量和LC-MS分析 岛津岛津VPVP系列液相色谱仪系列液相色谱仪柱塞杆吸液移动送液移动泵头清洗流路密封圈入口单向阀出口单向阀柱塞和密封圈的关系柱塞和密封圈的关系流动相水岛津岛津VPVP系列液相色谱仪系列液相色谱仪 手动进样阀7725i原理岛津岛津VPVP系列液相色谱仪系列液相色谱仪 柱温箱CTO-VP系列型 号室温+585室温检测室温-1565室温检测温度范围应 用25cm色谱柱2根，手动进样阀安装2个30cm色谱柱6根，混合池，电化学池，电导池可以同时内置，手动进样阀安装2个CTO-10ASvpCTO-10Avp分析结果重现性好分析结果重现性好降低柱降低柱压保保证检测稳定性定性提高柱效提高柱效 紫外检测器SPD-10Avp系列岛津岛津VPVP系列液相色谱仪系列液相色谱仪型 号SPD-10AvpSPD-10AVvp波长范围特 性190600nm高灵敏度，双波长检测，波长扫描，D2灯高灵敏度，双波长检测，波长扫描，D2灯和W灯190900nmSPD-10Avp检测池结构体积：12ul岛津VP系列液相色谱仪液相色谱仪池入口池出口单色光池密封垫凸透镜固紧螺丝参比池样品池固紧螺丝凸透镜池密封垫光电管空气 岛津其它检测器型号简介岛津其它检测器型号简介紫外可见二极管阵列检测器紫外可见二极管阵列检测器 SPD-M20A荧光检测器荧光检测器 RF-10Axl示差折光检测器示差折光检测器 RID-10A电导检测器电导检测器 CDD-10A电化学检测器电化学检测器 L-ECD-6A岛津岛津VPVP系列液相色谱仪系列液相色谱仪 数据处理装置1 C-R7APLUS 积分仪2 CLASS-VP 工作站（使用PC）3 LC SOLUTION工作站（使用PC）岛津VP系列液相色谱仪液相色谱仪岛津岛津VPVP系列液相色谱仪系列液相色谱仪 谢谢！2005/10/26