应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析.pptx

应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析血液室血液室 颜慕霞颜慕霞1应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析1/46地中海贫血及异常血红蛋白病知识介绍地中海贫血及异常血红蛋白病知识介绍一、地中海贫血综合征（地贫一、地中海贫血综合征（地贫）是指因遗）是指因遗 传缺点，血红蛋白中一个或几个传缺点，血红蛋白中一个或几个 珠蛋白肽链合成受到抑制，但珠蛋珠蛋白肽链合成受到抑制，但珠蛋 白肽链分子结构并无异常一个单白肽链分子结构并无异常一个单 基因遗传病基因遗传病。2应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析2/46二、异常血红蛋白病二、异常血红蛋白病l异常血红蛋白则是指那些因为遗传上异常血红蛋白则是指那些因为遗传上 缺点，造成珠蛋白分子结构异常血红缺点，造成珠蛋白分子结构异常血红 蛋白。因为异常血红蛋白造成溶血性贫蛋白。因为异常血红蛋白造成溶血性贫 血等临床表现，叫做异常血红蛋白病。血等临床表现，叫做异常血红蛋白病。异常血红蛋白病与地贫常并存于同一个异常血红蛋白病与地贫常并存于同一个患者称为异常血红蛋白病合并地贫。患者称为异常血红蛋白病合并地贫。3应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析3/46血红蛋白组成血红蛋白组成l由一个珠蛋白分子和四个亚铁血红素结由一个珠蛋白分子和四个亚铁血红素结 合而成。合而成。l每一个珠蛋白分子皆有两种不一样珠蛋每一个珠蛋白分子皆有两种不一样珠蛋 白肽链双结合组成一个白肽链双结合组成一个Hb类型。类型。l人类主要有以下四种珠蛋白肽链：人类主要有以下四种珠蛋白肽链：、和和 4应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析4/46地贫和异常血红蛋白病发生地贫和异常血红蛋白病发生l当控制珠蛋白链合成珠蛋白基因发生当控制珠蛋白链合成珠蛋白基因发生 突变或缺失，就使对应珠蛋白链合成突变或缺失，就使对应珠蛋白链合成 降低或降低或 完全不能合成，造成完全不能合成，造成Hb合成异合成异 常，就出现了异常常，就出现了异常Hb病或地贫。病或地贫。5应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析5/46正常三种血红蛋白正常三种血红蛋白lHbA:22 lHbA2:2 2lHbF:2 2 6应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析6/46正常三种血红蛋白珠蛋白肽链组成正常三种血红蛋白珠蛋白肽链组成 2 2 2 2 HbA HbA2 HbF(22)(2 2)(2 2)7应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析7/46地贫类型地贫类型l依据所缺乏珠蛋白肽链进行分类，依据所缺乏珠蛋白肽链进行分类，链，链，链或链或链合成缺乏或迟缓者，分链合成缺乏或迟缓者，分 别被称为别被称为地贫，地贫，地贫，或地贫，或地贫。地贫。和和或或和和链合成都降低或迟缓者链合成都降低或迟缓者 分别称为分别称为或或地贫地贫。8应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析8/46地贫地贫l轻型：静止型轻型：静止型 标准型标准型 可见可见Hb Barts（4）l中间型：中间型血红蛋白血红蛋白H病（病（4）l重型：重型：血红蛋白血红蛋白Barts病病9应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析9/46链结构异常产生血红蛋白链结构异常产生血红蛋白l血红蛋白血红蛋白Constant Spring（HbCS)链羧基端后多出链羧基端后多出31个氨基酸个氨基酸l血红蛋白血红蛋白QS 碱基突变非缺失型碱基突变非缺失型HbH病病l血红蛋白血红蛋白Q (74天天AA变组变组AA)10应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析10/46地贫地贫l轻型：轻型：l重型：重型：l中间型：中间型：当控制链基因发生突变或缺失时，链降低，多出链将与、链形成HbA2和HbF，所以地贫时HbA2和HbF都有不一样程度增高。11应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析11/46链结构异常产生血红蛋白链结构异常产生血红蛋白lHbE（2226谷谷 赖赖）lHbS（226谷谷 颉颉）lHbC（226谷谷 赖赖）12应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析12/46惯用检测地贫及异常血红蛋白病方法惯用检测地贫及异常血红蛋白病方法l血常规是检测地贫及异常血红蛋白病最血常规是检测地贫及异常血红蛋白病最基本试验之一基本试验之一。l血红蛋白电泳是检验地贫与异常血红蛋血红蛋白电泳是检验地贫与异常血红蛋白病最主要及最惯用试验诊疗方法。白病最主要及最惯用试验诊疗方法。l高效液相色谱法。高效液相色谱法。l地贫基因诊疗地贫基因诊疗。13应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析13/46血常规l6个基本参数：个基本参数：RBC，Hb，HCT，MCV，MCH，MCHC。lMCV显著降低是地贫首选筛查指标，通显著降低是地贫首选筛查指标，通常常MCV80fl，MCH25pg。l红细胞形态：小细胞低色素改变为主，红细胞形态：小细胞低色素改变为主，异形性显著异形性显著14应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析14/46 正常红细胞：圆盘状，双面凹陷。正常红细胞：圆盘状，双面凹陷。15应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析15/46红细胞形态异常：可见靶形红细胞，泪滴形红细胞，环形红红细胞形态异常：可见靶形红细胞，泪滴形红细胞，环形红细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等。细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等。16应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析16/46红细胞形态异常：可见靶形红细胞，泪滴形红细胞，环形红细红细胞形态异常：可见靶形红细胞，泪滴形红细胞，环形红细胞，盔形红细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等。胞，盔形红细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等。17应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析17/46红细胞形态异常：可见环形红细胞，棘形红细胞，红细胞碎红细胞形态异常：可见环形红细胞，棘形红细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等片，红细胞大小不等。18应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析18/46红细胞形态异常：可见半岛形红细胞，锯齿形红细胞，环形红细胞形态异常：可见半岛形红细胞，锯齿形红细胞，环形红细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等红细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等。19应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析19/46红细胞形态异常：可见棘形红细胞红细胞形态异常：可见棘形红细胞，泪滴形红细胞，靶形红泪滴形红细胞，靶形红细胞，环形红细胞，半岛形红细胞，红细胞大小不等。细胞，环形红细胞，半岛形红细胞，红细胞大小不等。20应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析20/46 中性粒细胞：中幼粒、分叶核细胞中性粒细胞：中幼粒、分叶核细胞。21应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析21/46 早幼粒细胞及中性杆状细胞早幼粒细胞及中性杆状细胞。22应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析22/46血红蛋白分析血红蛋白分析l电泳：血红蛋白电泳是检验地贫与异常电泳：血红蛋白电泳是检验地贫与异常血红蛋白病最主要及最惯用试验诊疗方血红蛋白病最主要及最惯用试验诊疗方法。法。l我院检验科血液室自从我院检验科血液室自从80年代初即开展年代初即开展以醋酸纤维素为介质血红蛋白电泳试验以醋酸纤维素为介质血红蛋白电泳试验诊疗地贫与异常血红蛋白病。诊疗地贫与异常血红蛋白病。23应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析23/46血红蛋白电泳仪血红蛋白电泳仪l于于1998年购入一台美国海伦娜企业年购入一台美国海伦娜企业 REP全自动凝胶电泳仪取代手工电泳进全自动凝胶电泳仪取代手工电泳进 行地贫与异常血红蛋白检测使电泳行地贫与异常血红蛋白检测，使电泳 结果愈加准确，很好地支持了临床医生结果愈加准确，很好地支持了临床医生 对此二种疾病诊疗。对此二种疾病诊疗。24应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析24/46血红蛋白电泳仪血红蛋白电泳仪l不过电泳价值受到一定限制，因为不过电泳价值受到一定限制，因为 有一些异常血红蛋白电荷改变极微或有一些异常血红蛋白电荷改变极微或 没有改变，在电泳时它们不能被查出，没有改变，在电泳时它们不能被查出，会造成临床上漏诊，同时因为电泳对会造成临床上漏诊，同时因为电泳对 各种血红蛋白成份定量不够标准化，各种血红蛋白成份定量不够标准化，经常会给结果判断造成困难经常会给结果判断造成困难25应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析25/46地贫基因诊疗地贫基因诊疗 l地贫基因诊疗试剂盒可同时检测中国地贫基因诊疗试剂盒可同时检测中国 人中常见三种缺失型人中常见三种缺失型地贫，即东南亚缺地贫，即东南亚缺失型（失型（SEA ），左侧缺失型），左侧缺失型 （4.2），右侧缺失型（），右侧缺失型（3.7）。）。而且还可检出临床上无症状静止型而且还可检出临床上无症状静止型 地贫。地贫。26应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析26/46地贫基因诊疗地贫基因诊疗l地贫基因诊疗试剂盒可对地贫基因诊疗试剂盒可对17个常见个常见 珠蛋白基因突变位点行检测，结果易于珠蛋白基因突变位点行检测，结果易于 判定。判定。27应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析27/46地贫基因诊疗地贫基因诊疗l但地贫基因分析不能检测异常血红蛋白但地贫基因分析不能检测异常血红蛋白病，对临床上异常血红蛋白病有漏诊情病，对临床上异常血红蛋白病有漏诊情况发生，而且价格昂贵，不适于大量大况发生，而且价格昂贵，不适于大量大面积筛查。面积筛查。28应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析28/46高效液相色谱法高效液相色谱法l检验科血液室购入一台美国伯乐企业出检验科血液室购入一台美国伯乐企业出产产VARIAN高效液相色谱仪。高效液相色谱仪。l高效液相色谱法是国际上公认高效液相色谱法是国际上公认HbA2与与HbF定量标准方法。定量标准方法。l是一个灵敏、特异性强、重复性高电泳是一个灵敏、特异性强、重复性高电泳替换方法替换方法。29应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析29/46 VARIANTTM 血红蛋白测试仪血红蛋白测试仪 30应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析30/46高效液相色谱法原理高效液相色谱法原理l色谱法是一个以物理化学原理为主分离色谱法是一个以物理化学原理为主分离分析方法，色谱法分离率高，能够把理分析方法，色谱法分离率高，能够把理化性质相差不大混合物经过简单分离技化性质相差不大混合物经过简单分离技术，使微小差异各组成份经过几百次甚术，使微小差异各组成份经过几百次甚至几千次重复累积为大差异而到达分离。至几千次重复累积为大差异而到达分离。在分离同时，依据出峰位置能够定性，在分离同时，依据出峰位置能够定性，依据峰面积能够定量。灵敏度高，选择依据峰面积能够定量。灵敏度高，选择性高，尤其适合用于生物大分子如各种性高，尤其适合用于生物大分子如各种血红蛋白组分分离。血红蛋白组分分离。31应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析31/46HPLC在医院临床中应用在医院临床中应用l治疗药品监测和药代动力学治疗药品监测和药代动力学l临床诊疗：血红蛋白分析临床诊疗：血红蛋白分析32应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析32/46高效液相色谱法血红蛋白分析高效液相色谱法血红蛋白分析操作操作l静脉血静脉血2ml，EDTA-K2抗凝抗凝l经定标质控，标本直接上机，经过电经定标、质控，标本直接上机，经过电脑操作，便能实现脑操作，便能实现Hb析出、检测、定量析出、检测、定量过程。过程。33应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析33/46高效液相色谱法优点高效液相色谱法优点l快速高效：快速高效：6minl自动化程度高：直接上机，无需前处理。自动化程度高：直接上机，无需前处理。l方便、节约：可单份样本，亦可大批量方便、节约：可单份样本，亦可大批量l高稳定性和高精密度：批内与批间变异高稳定性和高精密度：批内与批间变异系数小系数小l准确率高准确率高l检测结果易于判断：数据和图形检测结果易于判断：数据和图形34应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析34/46检测结果检测结果l可对血红蛋白组分中可对血红蛋白组分中HbA2、HbF准确定量，准确定量，对对地贫作出比电泳更为准确诊疗。地贫作出比电泳更为准确诊疗。l同时还可检测到同时还可检测到HbBarts以及以及HbH，提醒患，提醒患儿有儿有地贫。地贫。l色谱仪可对地贫基因分析无法查出各种异常血色谱仪可对地贫基因分析无法查出各种异常血红蛋白病作出诊疗。红蛋白病作出诊疗。35应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析35/46 正常样本正常样本 36应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析36/46 -地中海贫血（轻型）地中海贫血（轻型）37应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析37/46 缺失型缺失型 HbH病病(HbH出峰时间0.47分钟，峰值13.5%。HbF出峰时间1.08分钟，峰值0.3%。HbA出峰时间2.54分钟，峰值81.9%。HbA2出峰时间3.60分钟，峰值1.8%。)38应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析38/46 HbCS复合复合HbH病病(HbH出峰时间0.47分钟，峰值13.5%。HbF出峰时间1.12分钟，峰值1.4%。HbA出峰时间2.48分钟，峰值82.1%.HbA2出峰时间3.61分钟，峰值0.9%。HbCS出峰时间5.03分钟，峰值0.9%。)39应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析39/4640应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析40/46 HbS峰，镰形红细胞贫血病峰镰形红细胞贫血病 41应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析41/46 血红蛋白血红蛋白E 峰峰,HbE病病42应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析42/46 血红蛋白血红蛋白C病病 43应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析43/46总结总结l全球约1.5亿人携带地贫基因，已发觉地贫地贫基因突变类型最少有基因突变类型最少有81种，和种，和地贫基地贫基因突变类型最少有因突变类型最少有186种。种。44应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析44/46总结总结lHPLC对对地贫作出准确诊疗，检测到地贫作出准确诊疗，检测到HbBarts以及以及HbH，提醒患儿有，提醒患儿有地贫，地贫，对地贫基因分析无法查出各种异常血红对地贫基因分析无法查出各种异常血红蛋白病作出诊疗。蛋白病作出诊疗。lHPLC费用低廉，结果快速准确。费用低廉，结果快速准确。l当前当前HPLC是地贫非基因检测伎俩中最是地贫非基因检测伎俩中最经典方法经典方法45应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析45/46 谢谢。谢谢。46应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析46/46