微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属专家讲座.pptx

第三节沙门菌属(Salmonella)l一、生物学性状l形态染色：革兰阴性杆菌、周鞭毛l培养特征：l普通琼脂圆形、光滑、湿润、半透明、边缘整齐l肠道选择培养基乳糖不发酵、硫化氢+l生化反应：IMViC -+-+/-,不发酵乳糖，赖氨酸阳性、鸟氨酸脱羧酶阴性，产H2S。见表18-5微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第1页伤寒沙门菌不产气，其余沙门菌产酸产气微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第2页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第3页第三节沙门菌属(Salmonella)l抗原结构及分组lO抗原多糖类脂蛋白质复合物，其刺激机体产生抗体为IgM。含有相同抗原分为一组，A-Z，O51O63，O65O67共42组lH抗原（不稳定蛋白质）有两相：第一相特异相，第二相非特异相，其刺激机体产生抗体为IgG。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第4页第三节沙门菌属(Salmonella)l表面抗原lVI抗原（不耐热酸性多糖聚合物）有抗吞噬及保护细菌受对应抗体和补体溶菌作用。lM抗原粘液抗原，可阻止0抗原与对应抗体发生凝集l5抗原不稳定微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第5页第三节沙门菌属(Salmonella)l变异性lS-R变异光滑（S）粗糙（R）lH-O变异有鞭毛失去鞭毛。l位相变异含有双相变为单相。lV-W变异V型菌（O不凝集）、VW型菌（Vi部分缺失，O凝集）、W型菌（Vi缺失，O凝集）l抵抗力对热抵抗力不强。水23W，粪便12个月微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第6页第三节沙门菌属(Salmonella)l二、致病性与免疫性l致病物质l侵袭力菌毛黏附M细胞细胞肌动蛋白重排吞噬泡（沙门菌存留迟缓繁殖）信号调整、基因调控，合成各种因子拮抗宿主细胞抗菌反应。M细胞未降解细菌肠粘膜细胞固有层巨噬细胞吞噬胞内寄生菌。lVi抗原抗吞噬作用l内毒素l肠毒素。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第7页第三节沙门菌属(Salmonella)l所致疾病l肠热症伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌l肠炎型鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌多见。l菌血症或败血症多见猪霍乱沙门菌感染l无症状携带者l致病机理微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第8页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第9页第三节沙门菌属(Salmonella)l三、微生物检验l标本采集食物、血液及骨髓、粪便（肛拭）、尿液、胆汁微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第10页第三节沙门菌属(Salmonella)l分离培养与判定l分离培养l血液和骨髓液增菌液（胰酶消化大豆肉汤）l粪便和肛拭肠道选择培养基（GN、MAC、SS）l尿液和体液离心取沉淀物接种GN、MAC、SS、血平板l食物等固体物质磨碎加10倍无菌生理盐水接种GN、MAC、SS、l观察培养情况挑选可疑菌落判定微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第11页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第12页第三节沙门菌属(Salmonella)l3.判定l生化判定：初步：透明或半透明或黑色菌落，KIA：K/A，K/AG；H2S+/-，动力。全方面生化l血清学分型A-FO多价，Vi，分群分型血清lVI噬菌体分型普通医院不做。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第13页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第14页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第15页第三节沙门菌属(Salmonella)抗体检测(肥达反应Widal test)方法结果解释：正常值：O1:80，H1:160，A、B、C1:80O抗原抗体IgM，H抗原抗体IgG。O高H不高疾病早期；沙门菌属其它菌种感染致交叉反应；H-O变异沙门菌引发感染；一周后复查H升高肠热症。H高O不高疾病晚期；继往患病或预防接种；回想反应微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第16页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第17页、沙门菌属检验程序粪、尿、残余食物血液、骨髓增菌培养3518二十四小时分离培养增菌培养SS、MAC、GN35 18二十四小时可疑菌落基因探针、PCR、Vi噬菌体法 汇报生化初步判定（KIA、MIU、IMVIC、氧化酶、触酶、硝酸盐还原血清学最终判定全套生化反应（必要时）沙门菌属多价血清单价定型血清汇报微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第18页第四节志贺菌属(Shigella)l三、微生物特征l形态与染色l培养特征：肠道选择培养基：MAC、SS不发酵乳糖l生化反应：D群较活跃。各群均分解葡萄糖产酸不产气，发酵甘露醇（A群除外）微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第19页 微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第20页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第21页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第22页第四节志贺菌属(Shigella)抗原结构：lO抗原（群、型）多糖复合物；K抗原阻断O抗原与对应抗血清凝集。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第23页第四节志贺菌属(Shigella)l抵抗力：不强。l变异性lS-R变异l耐药性变异对磺胺、四环素、氨苄西林、百炎净耐药。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第24页第四节志贺菌属(Shigella)l二、致病性与免疫性l致病物质l侵袭力菌毛作用。l内毒素肠粘膜上皮细胞死亡，毛细管血栓，坏死脱落溃疡，致脓血便；内毒素血症。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第25页第四节志贺菌属(Shigella)l外毒素：l志贺菌侵袭宿主细胞IL-1、IL-6、TNF-a、INF-r IL-1、TNF-a、ST受体在内皮细胞表面表示，使内皮细胞成为ST攻击靶细胞，内皮细胞损伤。lA群型志贺毒素ST(VT-对Vero细胞有毒性)ST属VT1型，有以下3种活性。l细胞毒：VT对人肝细胞、Hela细胞、Vero细胞血管内皮细胞、肾小管内皮细胞有毒性。l肠毒素：引发水样腹泻l神经毒：引发麻痹、昏迷、脑膜炎死亡。l4、ST和内毒素协同作用：HUG微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第26页第四节志贺菌属(Shigella)l所致疾病l急性细菌性痢疾又分为经典、非经典、中毒型l慢性细菌性痢疾重复发作，病程超出2个月。隐匿型痢疾有病史无症状，培养及结肠镜检阳性。l携带者恢复期、慢性、健康（主要传染源）。l致病机理l免疫性：局部粘膜表面产生SIgA微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第27页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第28页第四节志贺菌属(Shigella)三、微生物检验标本采集采集脓血便或肛拭。检验程序见后微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第29页第四节志贺菌属(Shigella)l检验方法及判定l分离培养：GN、SS、MACl判定l初步判定TSIA(双糖铁)K/A、H2S-动力阴性。l最终判定：全方面生化试验及血清学判定：四种多价血清，A群B群C群D群微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第30页第四节志贺菌属(Shigella)l非经典菌株：l传代法：营养琼脂和肉汤交替传代510次经典。l4.毒力试验豚鼠眼结膜试验l5.快速诊疗：直接凝集、免疫荧光菌球、协同凝集试验。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第31页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第32页志贺菌属检验程序粪便或肛拭增菌培养分离培养SS、MAC35 46小时35 1824小时观察、挑选可疑菌落接种 KIA、MIU35 1824小时分析KIA、MIU反应结果，涂片、氧化酶试验最终判定全方面生化反应 血清学判定 毒力试验（必要时）汇报微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第33页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l一、分类：l11个菌种:l引发人类致病有3种：l鼠疫耶尔森菌(Y.pestis)、l小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)、l假结核耶尔森菌(Y.pseutuberculosis)。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第34页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l二、鼠疫耶尔森菌l临床意义l致病原因l内毒素l鼠毒素抑制心肌细胞线粒体呼吸作用，引发不可逆休克及死亡。l毒力决定因子:FI封套抗原、VW毒力抗原、Pgm色素形成能力、PI鼠疫耶尔森菌素、C凝固酶、F纤维蛋白因子、PU嘌呤依赖性、T鼠毒素。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第35页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l临床类型（带菌鼠蚤叮咬、人与染疫动物或人接触所致）甲类传染病l腺鼠疫局部淋巴结肿胀、坏死和脓肿l败血性鼠疫最严重。l肺鼠疫继发、原发。l少见皮肤鼠疫、肠鼠疫、脑膜炎鼠疫、眼鼠疫。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第36页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l微生物特征l形态结构：G-b、G-cb，两极浓染，陈旧物：多形性l抗原结构最少18种抗原，主要有lFI抗原封套抗原lV/W抗原菌体表面抗原，V蛋白质，W类脂蛋白。含有抗吞噬作用。lT抗原可溶性蛋白抗原（鼠毒素）剧毒，可制成类毒素、抗毒素。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第37页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l培养特征：l普通培养基：可生长，但迟缓。l血平板：培养48小时后为柔软、粘稠、粗糙菌落。l肉汤培养基：二十四小时沉淀生长，48小时菌膜，轻摇钟乳石状下垂。l生化特征动力阴性，IMVC为，赖氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸脱胺酶、脲酶、硫化氢均阴性。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第38页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l微生物检验l检验程序见P125l标本采集采集血、痰、淋巴结穿刺液、尸检脏器等样本。l标本直接检验l分离培养与判定l分离培养无污染：血平板，有污染：龙胆紫溶血亚硫酸钠琼脂。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第39页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l判定：经典形态、菌落特点、生化特征见判别表、噬菌体裂解试验。l毒力试验动物试验（用皮下注射）37天死亡，取肝、脾培养。l检验结果分析与汇报微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第40页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第41页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l三、小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)l临床意义l致病原因l侵袭性及毒素l一些菌株与人体组织有相同抗原本身免疫性疾病l所致疾病l小肠、结肠炎l败血症l结节性红斑、反应性关节炎。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第42页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l微生物特征l形态结构l抗原成份O抗原50种以上但只有几个血清型与致病性相关，我国主要为O:9、O:8、O:5、O:3。l培养特征：MAC乳糖不发酵菌落l生化特征：脲酶阳性、V-P22-25阳性、鸟氨酸脱羧酶阳性微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第43页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l微生物检验l检验程序见P126l标本采集采集粪便、食物、尿液、血液。l标本直接检验l冷增菌粪便标本可用57mlM/15PBS4冷增菌。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第44页第五节耶尔森菌属(Yersinia)l分离培养与判定l分离培养：接种MAC、NYE或CIN平板。l初步判定MOT动力、V-P、ONPG-半乳糖苷酶22-25阳性。l最终判定：全方面生化见表l检验结果分析。微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第45页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第46页微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第47页粘质、液化沙雷菌判别试验粘质沙雷菌液化沙雷菌红色沙雷菌阿拉伯糖棉子糖/木糖鸟氨酸微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第48页肠杆菌科与其它科菌判别试验肠杆菌科弧菌科非发酵菌葡萄糖FFO/氧化酶形态杆状弧形杆状鞭毛周毛或无单毛单、丛毛、周毛、无微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第49页肠杆菌科初步分群菌属名苯丙氨酸葡萄糖酸盐变形杆菌属普罗威登菌属摩根菌属克雷伯菌属肠杆菌属沙雷菌属哈夫尼亚菌属埃希菌属志贺菌属沙门菌属枸橼酸杆菌属爱德华菌属耶尔森菌属肠杆菌科初步分群 微生物学志贺菌沙门菌耶尔森菌属第50页