林木病理学林木病原细菌专家讲座.pptx

林木病原细菌林木病原细菌林木病原细菌普通性状林木病原细菌普通性状细菌形态和结构细菌形态和结构形态大多杆状形态大多杆状,个别丝状个别丝状细菌大多单生大小普通为细菌大多单生大小普通为1-3x0.5-0.8微米，要在苯酚品红染色后在微米，要在苯酚品红染色后在x油镜下才能观察到油镜下才能观察到林木病理学林木病原细菌第1页林木病原细菌林木病原细菌林木病原细菌普通性状林木病原细菌普通性状细菌形态和结构细菌形态和结构形态大多杆状形态大多杆状,个别丝状个别丝状细菌大多单生大小普通为细菌大多单生大小普通为1-3x0.5-0.8微米，要在苯酚品红染色后在微米，要在苯酚品红染色后在x油镜下才能观察到油镜下才能观察到林木病理学林木病原细菌第2页大多有鞭毛大多有鞭毛极鞭着生在菌体一端或两端极鞭着生在菌体一端或两端周鞭着生在菌体四面周鞭着生在菌体四面鞭毛着生位置是分类依据鞭毛着生位置是分类依据普通要对鞭毛染色后再镜检普通要对鞭毛染色后再镜检林木病理学林木病原细菌第3页菌体结构菌体结构黏质层黏质层(较厚而固定称作荚膜较厚而固定称作荚膜)-细细胞壁胞壁(多糖，拟脂类和甲壳质组成多糖，拟脂类和甲壳质组成)-质膜（质膜下小粒状鞭毛穿过细胞质膜（质膜下小粒状鞭毛穿过细胞壁和黏质层延伸到体外）壁和黏质层延伸到体外）-胞质胞质（异染粒中性体气泡液泡（异染粒中性体气泡液泡核糖体）核糖体）-核区（核区（DNA，无核膜），无核膜无芽孢无芽孢林木病理学林木病原细菌第4页用革兰氏染色法可反应细胞壁差异革兰氏阴性菌壁厚，肽聚糖为主革兰氏阴性菌壁厚，肽聚糖为主革兰氏阳性菌壁薄，有脂多糖和脂蛋白革兰氏阳性菌壁薄，有脂多糖和脂蛋白革兰氏染色是用结晶紫草酸铵对细菌染色，革兰氏染色是用结晶紫草酸铵对细菌染色，经酒精脱色后再用番红复染方便观察未经酒精脱色后再用番红复染方便观察未能脱色为阳性（紫色），脱色为阴性（红能脱色为阳性（紫色），脱色为阴性（红色）色）林木病理学林木病原细菌第5页革兰氏染色阳性革兰氏染色阳性大肠杆菌大肠杆菌革兰氏染色阴性革兰氏染色阴性枯草杆菌枯草杆菌林木病理学林木病原细菌第6页植物病原细菌对链霉素敏感，可用于植物病原细菌对链霉素敏感，可用于防治细菌病害防治细菌病害林木病理学林木病原细菌第7页培养性状，繁殖，遗传和变异培养性状，繁殖，遗传和变异培养性状：固定培养基上菌落培养性状：固定培养基上菌落液体培养基上混浊，絮状物，菌液体培养基上混浊，絮状物，菌膜，菌环等膜，菌环等繁殖繁殖方式为裂殖，繁殖速度繁殖繁殖方式为裂殖，繁殖速度为次分钟，为次分钟，S形生长曲线形生长曲线林木病理学林木病原细菌第8页遗传遗传遗传裂殖时细胞内物质均等分遗传裂殖时细胞内物质均等分配到子细胞配到子细胞质粒染色体质粒染色体DNA之外可自我复之外可自我复制环状双链制环状双链DNA，常带有与抗药性，常带有与抗药性，致病性，性结合相关基因致病性，性结合相关基因林木病理学林木病原细菌第9页变异变异类有性作用类有性作用接合：一个细胞遗传物质能够部分进入接合：一个细胞遗传物质能够部分进入另一个细胞，接收遗传物质细菌在分裂另一个细胞，接收遗传物质细菌在分裂繁殖时体内两种遗传物质重新组合繁殖时体内两种遗传物质重新组合突变频率低但次数多突变频率低但次数多转化：因为菌体破裂，一个细胞遗传物转化：因为菌体破裂，一个细胞遗传物质释放出来，进入另一个有亲和力同种质释放出来，进入另一个有亲和力同种或近似种菌体内，并作为后者遗传物质或近似种菌体内，并作为后者遗传物质一部分一部分林木病理学林木病原细菌第10页转导：噬菌体侵染和在消解一个转导：噬菌体侵染和在消解一个细菌时，细菌时，其其DNA能够携带寄主细能够携带寄主细胞部分遗传物质，在侵染另一个胞部分遗传物质，在侵染另一个细菌时，就能够将遗传物质带到细菌时，就能够将遗传物质带到第二个细菌体内作为它遗传物质第二个细菌体内作为它遗传物质一部分一部分林木病理学林木病原细菌第11页噬菌体：细菌病毒，专性寄生，噬菌体：细菌病毒，专性寄生，普通蝌蚪状，在细菌液体培养时普通蝌蚪状，在细菌液体培养时使培养液变清，在细菌培养平板使培养液变清，在细菌培养平板上形成透明斑（噬菌斑）上形成透明斑（噬菌斑）林木病理学林木病原细菌第12页寄生性：绝大多数非专性寄生寄生性：绝大多数非专性寄生,极少数极少数专性寄生专性寄生判定方法判定方法:症状观察症状观察:染色镜检判定法染色镜检判定法(革兰氏染色法和鞭毛革兰氏染色法和鞭毛染色法染色法)培养性状判定法培养性状判定法(菌落性状观察菌落性状观察,生理生生理生化性状观察化性状观察)致病性测定致病性测定:血清学判定法血清学判定法:核酸技术核酸技术:林木病理学林木病原细菌第13页植物病原细菌主要类群植物病原细菌主要类群薄壁菌门薄壁菌门主要属主要属:野杆菌属野杆菌属Agrobacterium,也叫脓杆菌杆也叫脓杆菌杆菌属菌属,革兰氏阴性菌，鞭毛周生，引发植革兰氏阴性菌，鞭毛周生，引发植物组织肿瘤或畸形物组织肿瘤或畸形假单胞杆菌属假单胞杆菌属Pseudomonas革兰氏阴性革兰氏阴性菌，鞭毛数根，菌落白色，能产生荧光菌，鞭毛数根，菌落白色，能产生荧光性色素，引发叶斑，溃疡，果斑性色素，引发叶斑，溃疡，果斑林木病理学林木病原细菌第14页黄单胞杆菌属黄单胞杆菌属Xanthomonas革兰氏阴革兰氏阴性菌，鞭毛根，菌落黄色，能产生性菌，鞭毛根，菌落黄色，能产生非水溶性黄色色素，柑橘溃疡病非水溶性黄色色素，柑橘溃疡病,核桃核桃黑斑病黑斑病欧氏杆菌属欧氏杆菌属Erwina革兰氏阴性菌，鞭革兰氏阴性菌，鞭毛周生，引发植物组织腐烂或萎焉毛周生，引发植物组织腐烂或萎焉林木病理学林木病原细菌第15页厚壁菌门厚壁菌门棒杆菌属棒杆菌属Gorynebacterium（Clavibacter革兰氏阳性菌，多数无鞭毛革兰氏阳性菌，多数无鞭毛林木病理学林木病原细菌第16页软壁菌门软壁菌门植原体属（植原体属（Phytomonas）引发病状很象病毒病症状，主要是黄化丛引发病状很象病毒病症状，主要是黄化丛枝症状以前放在病毒病中，以后发觉有枝症状以前放在病毒病中，以后发觉有些病可用四环素治疗，在电镜下可看到哑些病可用四环素治疗，在电镜下可看到哑铃状类似于菌原体生物体，改成类菌原体，铃状类似于菌原体生物体，改成类菌原体，近年来将其归到植原体属中，引发桑萎缩近年来将其归到植原体属中，引发桑萎缩病，造成节尖缩短，丛枝，缩叶，黄化；病，造成节尖缩短，丛枝，缩叶，黄化；泡桐丛枝病：丛枝，花果变枝叶，黄化，泡桐丛枝病：丛枝，花果变枝叶，黄化，有传染性有传染性林木病理学林木病原细菌第17页螺原体属（螺原体属（Spiroplasma）菌体基本形态为螺旋形菌体基本形态为螺旋形繁殖时可产生分支，分支也螺旋形繁殖时可产生分支，分支也螺旋形引发柑橘僵化病（引发柑橘僵化病（S.citri）节间变短，）节间变短，缩小，丛生枝或丛芽树皮增厚，植株缩小，丛生枝或丛芽树皮增厚，植株矮化，而且整年可开花，但结果小而矮化，而且整年可开花，但结果小而少，多畸形，易脱落少，多畸形，易脱落能够人工培养，在培养基上形成能够人工培养，在培养基上形成“荷荷包蛋包蛋”状菌落状菌落林木病理学林木病原细菌第18页油橄榄肿瘤病油橄榄肿瘤病Pseudomonas假单胞杆菌属假单胞杆菌属假单胞杆菌属假单胞杆菌属林木病理学林木病原细菌第19页杨属柳属山楂属果树冠瘿病杨属柳属山楂属果树冠瘿病Agrobacterium（野杆菌属）根瘤野杆菌属）根瘤林木病理学林木病原细菌第20页根部小木瘤根部小木瘤林木病理学林木病原细菌第21页病原细菌病原细菌林木病理学林木病原细菌第22页柑橘溃疡病柑橘溃疡病Xanthomonas campestri pv.citri(Hasse)黄单胞杆菌属黄单胞杆菌属黄单胞杆菌属黄单胞杆菌属X.citriX.citri同物异名同物异名同物异名同物异名林木病理学林木病原细菌第23页症状林木病理学林木病原细菌第24页病原病原林木病理学林木病原细菌第25页细菌病害症状细菌病害症状 侵染循环和防治侵染循环和防治林木病理学林木病原细菌第26页症状症状斑点斑点溃疡溃疡萎焉萎焉林木病理学林木病原细菌第27页侵染循环侵染循环植物病原细菌从伤口侵入植物病原细菌从伤口侵入,有从自然孔口有从自然孔口侵入侵入寄生性弱细菌普通都是从伤口侵入寄生性弱细菌普通都是从伤口侵入寄生性强细菌从伤口和自然孔口都能侵入寄生性强细菌从伤口和自然孔口都能侵入假假单单胞胞杆杆菌菌属属和和黄黄单单胞胞杆杆菌菌属属细细菌菌引引致致叶叶斑病斑病,普通是从自然孔口侵入普通是从自然孔口侵入林木病理学林木病原细菌第28页棒棒形形杆杆菌菌属属、欧欧氏氏杆杆菌菌属属和和土土壤壤杆杆菌菌属属细细菌菌引引致致萎萎蔫蔫、腐腐烂烂和和瘤瘤肿肿,多多半半是是从从伤口侵入伤口侵入有屡次再侵染机会有屡次再侵染机会在自然条件在自然条件,传输靠雨水溅洒作用传输靠雨水溅洒作用,故传故传输距离不会很远输距离不会很远带菌种苗是细菌病害传染主要起源带菌种苗是细菌病害传染主要起源昆虫介体也可传输细菌昆虫介体也可传输细菌工具传输工具传输林木病理学林木病原细菌第29页侵染起源侵染起源细菌在受害苗木内越冬细菌在受害苗木内越冬,成为初侵染起源成为初侵染起源种种子子和和无无性性繁繁殖殖器器官官：带带菌菌种种苗苗是是最最主主要要初初侵侵入起源，带菌种苗调运可远距离传输入起源，带菌种苗调运可远距离传输病病残残体体：植植物物病病原原细细菌菌能能够够在在病病株株残残余余组组织织中中长久存活，也是主要初侵染起源长久存活，也是主要初侵染起源林木病理学林木病原细菌第30页土壤：主要存活于土壤中作物残余组织土壤：主要存活于土壤中作物残余组织杂草和其它作物：相同寄主范围作物杂草和其它作物：相同寄主范围作物昆昆虫虫介介体体：玉玉米米细细菌菌性性萎萎蔫蔫病病菌菌能能够够在在玉玉米叶甲体内越冬，成为初侵染起源米叶甲体内越冬，成为初侵染起源林木病理学林木病原细菌第31页防治方法防治方法作好种苗消毒和去除植物病死残体作好种苗消毒和去除植物病死残体用抗生素效果很好用抗生素效果很好预防造成伤口和及时保护伤口预防造成伤口和及时保护伤口,在在防治上尤其主要防治上尤其主要林木病理学林木病原细菌第32页寄生性种子植物寄生性种子植物寄生性种子植物种类寄生性种子植物种类主要有桑寄生科主要有桑寄生科(Loranthaceae)菟丝子科菟丝子科(Cuscutaceae)列当科列当科(Orobanchaceae)野菰野菰蛇菰科（蛇菰科（Balanophoraceae）其中菟丝子和列当是对外检疫对象其中菟丝子和列当是对外检疫对象林木病理学林木病原细菌第33页寄生性种子植物寄生特点寄生性种子植物寄生特点寄生部位寄生部位:茎寄生茎寄生(地上部分茎地上部分茎):桑寄生和菟丝子桑寄生和菟丝子根寄生根寄生(地下部分根地下部分根):列当和野菰列当和野菰林木病理学林木病原细菌第34页对寄主依赖程度对寄主依赖程度半寄生半寄生:含叶绿素含叶绿素,其吸盘导管与寄主导其吸盘导管与寄主导管相连管相连,如桑寄生如桑寄生全寄生全寄生:不含叶绿素不含叶绿素,其吸盘导管和筛管其吸盘导管和筛管分别与寄主导管和筛管相连分别与寄主导管和筛管相连,如菟丝子如菟丝子,列当和野菰列当和野菰林木病理学林木病原细菌第35页林木病理学林木病原细菌第36页林木病理学林木病原细菌第37页菟丝子害菟丝子害种子萌发到缠绕寄种子萌发到缠绕寄主过程主过程菟丝子茎和果实菟丝子茎和果实枝条被害状枝条被害状寄主和菟丝子茎切寄主和菟丝子茎切面面,示菟丝子吸器伸示菟丝子吸器伸入寄主皮层入寄主皮层林木病理学林木病原细菌第38页槲寄生槲寄生林木病理学林木病原细菌第39页油杉寄生害 列当危害番茄林木病理学林木病原细菌第40页蛇菰科Balanophoraceae 双子叶植物，19属，约120种，分布于热带和亚热带地域，中国只有 蛇菰属Balanophora 锁阳属Cynomorium 双柱蛇菰属 Rhopalocemis 3属17种，产中南部至西南 一年生或多年生、肉质草本，寄生于根上 无叶绿素和气孔，花单性，极少两性，密集成一个单性或两性花序林木病理学林木病原细菌第41页野菰野菰，野菰，又名蔗寄生一年生寄生草本植物，整个列当科都是营寄生植物，南方最常见是这种茎基部分枝地上不分枝。叶退化成鳞片状，全株肉色枝顶开花，萼佛焰苞状，冠二唇形，紫红色，黄白色地下根常附于禾本科寄生植物全株药用，具清热解毒，消肿功效林木病理学林木病原细菌第42页油杉矮槲寄生发育循环图油杉矮槲寄生发育循环图林木病理学林木病原细菌第43页越冬场所越冬场所菟丝子种子比寄主植物种子成熟早、萌菟丝子种子比寄主植物种子成熟早、萌发晚发晚种子在土内或与寄主种子一起越冬种子在土内或与寄主种子一起越冬列当靠寄主根部分泌物刺激而萌发列当靠寄主根部分泌物刺激而萌发桑寄生直接在寄主上越冬桑寄生直接在寄主上越冬林木病理学林木病原细菌第44页传输传输小种子靠风传输小种子靠风传输(菟丝子菟丝子,列当列当)大种子靠鸟类传输大种子靠鸟类传输(桑寄生桑寄生)林木病理学林木病原细菌第45页防治方法防治方法:检疫检疫轮作轮作手工拔除手工拔除(砍除砍除)喷洒除草剂喷洒除草剂林木病理学林木病原细菌第46页植物病原线虫植物病原线虫线虫形态和结构线虫形态和结构低等动物，属线虫动物门，数量多，低等动物，属线虫动物门，数量多，分布广，受线虫危害症状与普通病分布广，受线虫危害症状与普通病害症状相同，称为线虫病害症状相同，称为线虫病350-1000 x15-35微米，虫体细长，微米，虫体细长，蠕虫形，虫体半透明蠕虫形，虫体半透明林木病理学林木病原细菌第47页生活史寄生性生活史寄生性卵幼虫（龄）成虫受精卵卵幼虫（龄）成虫受精卵专性寄生，去食时排出唾液，起到致病专性寄生，去食时排出唾液，起到致病作用，刺激细胞分裂，肿瘤，枯萎作用，刺激细胞分裂，肿瘤，枯萎症状：根结，丛根，根腐，地上部分似症状：根结，丛根，根腐，地上部分似缺素症缺素症松材线虫是松褐天牛传输松材线虫是松褐天牛传输林木病理学林木病原细菌第48页线虫症状线虫症状林木病理学林木病原细菌第49页林木病理学林木病原细菌第50页林木病理学林木病原细菌第51页林木病理学林木病原细菌第52页林木病理学林木病原细菌第53页林木病理学林木病原细菌第54页林木病理学林木病原细菌第55页雄虫雄虫林木病理学林木病原细菌第56页雌虫雌虫林木病理学林木病原细菌第57页林木病理学林木病原细菌第58页检验及判定检验及判定检验方法检验方法对应施检疫物首先直接观察是否存对应施检疫物首先直接观察是否存在本质干枯、木质部蓝变和媒介昆在本质干枯、木质部蓝变和媒介昆虫或它栖居痕迹等症状，然后进行虫或它栖居痕迹等症状，然后进行室内检验室内检验林木病理学林木病原细菌第59页(1)抽样和取样抽样和取样抽取有上述症状部分检疫物，数量为每批抽取有上述症状部分检疫物，数量为每批次总件数次总件数0.5%-5.0%，但最低不得少于，但最低不得少于5件。件。若无显著症状时可随机抽样若无显著症状时可随机抽样在所抽取样木在所抽取样木(或样品或样品)上取部分样品，或钻上取部分样品，或钻取少许木屑取少许木屑(不得少于不得少于20g)，每样，每样3个重复个重复标号后带回试验室检验。必要时可将整件标号后带回试验室检验。必要时可将整件样木样木(或样品或样品)带回备检带回备检取样时注意选取靠近蛀道、蛹室部位，所取样时注意选取靠近蛀道、蛹室部位，所取样品不得带有树皮取样品不得带有树皮林木病理学林木病原细菌第60页(2)分离线虫分离线虫将各标号样品分别进行线虫分离将各标号样品分别进行线虫分离分离线虫可采取贝尔曼漏斗法或浅盘法分离线虫可采取贝尔曼漏斗法或浅盘法对媒介昆虫进行线虫分离时，可将其用剪刀对媒介昆虫进行线虫分离时，可将其用剪刀或尖头镊子、解剖针等剪碎或撕碎后一样采或尖头镊子、解剖针等剪碎或撕碎后一样采取上述方法进行取上述方法进行分离时若室温较低分离时若室温较低(不得低于不得低于7 oC)可依据室可依据室温将分离用水调至温将分离用水调至20-40 oC(不得超出不得超出40 oC)浸泡分离材料浸泡分离材料3-4h线虫游离出一定数量后即线虫游离出一定数量后即可镜检可镜检(普通需经普通需经24小时后镜检小时后镜检)林木病理学林木病原细菌第61页贝尔曼贝尔曼(Baermann)漏斗法漏斗法将漏斗末端接一段长约将漏斗末端接一段长约10cm乳胶管乳胶管在乳胶管上装一止水夹在乳胶管上装一止水夹剪大小适当纱布两层铺在漏斗上剪大小适当纱布两层铺在漏斗上将样段去皮劈成长约将样段去皮劈成长约3-4cm细条细条,约取约取10 g(或木或木屑屑)置于漏斗上纱布中，纱布四角向中间盖上分置于漏斗上纱布中，纱布四角向中间盖上分离材料，然后注入清水浸没离材料，然后注入清水浸没注入清水后要注意使水充满漏斗和下面乳胶管，注入清水后要注意使水充满漏斗和下面乳胶管，不要产生空隙不要产生空隙 用培养皿在漏斗末端接取线虫分离液用培养皿在漏斗末端接取线虫分离液10ml镜检镜检林木病理学林木病原细菌第62页贝尔曼漏斗法线虫分离装置图林木病理学林木病原细菌第63页浅盘法浅盘法浅盘分离装置由两只不锈钢浅盘组成浅盘分离装置由两只不锈钢浅盘组成口径略小一只底部为粗网筛，放在另一只口径略小一只底部为粗网筛，放在另一只浅盘上面浅盘上面将两层纱布打湿铺于筛盘上，把样品劈碎将两层纱布打湿铺于筛盘上，把样品劈碎(或钻取木屑或钻取木屑)置于筛盘纱布上置于筛盘纱布上慢馒注人清水，使水浸没样品慢馒注人清水，使水浸没样品林木病理学林木病原细菌第64页分离结束后分离结束后,移去筛盘，把大盘内分移去筛盘，把大盘内分离液集中于小烧杯内离液集中于小烧杯内小烧杯内线虫分离液可经过自然沉小烧杯内线虫分离液可经过自然沉降或离心机降或离心机(1500转转/min，离心，离心2-3min)浓缩至适宜量，方便镜检浓缩至适宜量，方便镜检林木病理学林木病原细菌第65页林木病理学林木病原细菌第66页(3)镜检镜检将各标号盛有线虫分离液培养皿置于解剖将各标号盛有线虫分离液培养皿置于解剖镜下观察，先确认有没有线虫镜下观察，先确认有没有线虫对有线虫样品进行活体镜检，观察它普通对有线虫样品进行活体镜检，观察它普通形态结构形态结构选择几条成熟、特征易观察线虫，用针或选择几条成熟、特征易观察线虫，用针或吸管移至载玻片上水滴中吸管移至载玻片上水滴中使之沉底使之沉底林木病理学林木病原细菌第67页将此载玻片在酒精灯火焰上方往返几次将此载玻片在酒精灯火焰上方往返几次约约5-6秒至虫体突然伸直时停顿秒至虫体突然伸直时停顿加盖玻片后在显微镜下观察加盖玻片后在显微镜下观察依据形态特征给予初步判别，以确定是依据形态特征给予初步判别，以确定是否需作深入判定否需作深入判定 林木病理学林木病原细菌第68页1.病原判定线虫培养线虫培养:判定需要相当数量雌、雄成虫，但在检验判定需要相当数量雌、雄成虫，但在检验时分离到线虫多是处于休眠阶段分散型时分离到线虫多是处于休眠阶段分散型3龄虫（龄虫（L）;有时虽可见雌雄成虫，但数有时虽可见雌雄成虫，但数量较少量较少从媒介昆虫分离到线虫则只能是被称为休从媒介昆虫分离到线虫则只能是被称为休眠幼虫眠幼虫(DL)分散型分散型4龄虫，所以，需将上龄虫，所以，需将上述情况线虫进行培养，以取得大量雌雄成述情况线虫进行培养，以取得大量雌雄成虫供判定虫供判定林木病理学林木病原细菌第69页真菌上单异活体培养真菌上单异活体培养通惯用于培养松材线虫真菌为通惯用于培养松材线虫真菌为灰葡萄孢灰葡萄孢(Botrytis cinerea)多毛孢多毛孢(Pestalotia sp.)镰刀菌镰刀菌(Fusarium sp.)培养松材线虫培养松材线虫林木病理学林木病原细菌第70页将真菌菌种接至马铃薯琼脂培养基将真菌菌种接至马铃薯琼脂培养基(PDA)平板或试管斜面上平板或试管斜面上在在25 oC条件下经过条件下经过4-5d待菌丝铺满平板或斜面后待菌丝铺满平板或斜面后将经过表面消毒线虫用吸管接到菌丝将经过表面消毒线虫用吸管接到菌丝上上28 oC条件下培养条件下培养10-15d即可繁殖出即可繁殖出大量线虫大量线虫用少许清水将线虫充分洗至小烧杯内用少许清水将线虫充分洗至小烧杯内备用备用 林木病理学林木病原细菌第71页样木保温、保湿培养样木保温、保湿培养将样木劈开、锯成小段，置于烧杯中将样木劈开、锯成小段，置于烧杯中加少许清水，使木段下端浸在水中，加少许清水，使木段下端浸在水中，木段上端用湿纱布覆盖木段上端用湿纱布覆盖在在26 oC培养箱中培养培养箱中培养3-4d倒取杯底水液，亦可取得较多雌、雄倒取杯底水液，亦可取得较多雌、雄成虫成虫 林木病理学林木病原细菌第72页接种线虫表面消毒接种线虫表面消毒经分离后取得线虫悬浮液用经分离后取得线虫悬浮液用1500转转/min离心离心2-3min浓缩至离心管底部浓缩至离心管底部吸去上清液，用无菌滴管将底部线虫液吸去上清液，用无菌滴管将底部线虫液约约2ml移至另一无菌离心管内移至另一无菌离心管内加加 入入2ml双倍浓度消毒液，轻轻振荡混双倍浓度消毒液，轻轻振荡混匀匀一定时间后再离心浓缩，重复消毒一定时间后再离心浓缩，重复消毒1次次再用无菌水换洗再用无菌水换洗2次次林木病理学林木病原细菌第73页消毒剂消毒剂松材线虫表面消毒惯用消毒剂有松材线虫表面消毒惯用消毒剂有3%双氧双氧水，处理水，处理10min1%升汞，处理升汞，处理5min0.002%放线菌酮放线菌酮0.1%硫酸链霉素混合液，处理硫酸链霉素混合液，处理5min硫酸链酶素硫酸链酶素(1000g/g)、金霉素、金霉素(30g/g)和匹玛霉素和匹玛霉素(pimafucin,0.63g/g)混合液混合液处理处理5min林木病理学林木病原细菌第74页2.暂时玻片制作杀死和固定杀死和固定:将盛有线虫悬浮液小烧杯置于将盛有线虫悬浮液小烧杯置于65oC水水浴中浴中2min杀死线虫杀死线虫经离心浓缩后即用三烃基乙胺福尔马经离心浓缩后即用三烃基乙胺福尔马林固定液林固定液(TAF)固定固定林木病理学林木病原细菌第75页