微生物实验室质量控制准则专家讲座.pptx

微生物试验室质量控制准则微生物实验室质量控制准则第1页质量控制相关定义l质量控制：满足质量要求操作技术和活动。l质量确保：为了满足试验室质量要求，制订对应计划，实施证实（统计）所进行一系列系统活动l外部质量控制：经过相互校准和/或检验对试验室操作和结果所进行控制l内部质量控制：试验室内部采取以对比分析、跟踪以及相关方法，对试验室工作连续性控制计划。l质量手册：是描述质量系统元素文件或文件集合。微生物实验室质量控制准则第2页试验室要求l组织：按国家试验室认可概念，是指一个能够负担法律责任实体。这里所指是试验室（微检室）内建立质量管理确保体系。l人员l房屋满足检测工作需要。l设备微生物实验室质量控制准则第3页人员要求l试验室人员分类：管理人员、技术人员、技术支持人员等。l对应岗位人员，应具备对应技术能力，对应技术能力证实（证书及证件）。l微生物检验室因有对应技术能力人负责室内技术工作。并设置质量监督员。微生物实验室质量控制准则第4页房屋条件要求l房屋要求：含有适宜、足够宽大、通风有良好照明。l房屋内墙面及地等应采取易于清洁材料，保持房间清洁。l房间设置，以其开展工作内容加以分用，设置专用房间。l房间大小还应依据从事试验人员进入数量上加以考虑。微生物实验室质量控制准则第5页环境设施要求l专用房间温湿度控制与统计（样品存放室）l特殊环境微生物指标控制与统计（无菌室等）l专用工作室标准操作规程和定时检测校准程序。（洁净室等）l特殊环境中专用设施质量控制应符合相关要求（净化工作台）微生物实验室质量控制准则第6页环境设施相关技术指标l净化室、净化工作区域、洁净环境按国家及部颁标准进行检测。l空气洁净度指标：l检测频率及检测方法。一次/月；空气细菌检测（沉降法）。级别0.5m尘粒(个/L)5m尘粒(个/L)活菌颗粒平均数(cfu/平板)1003.50.01.010000350.02.53.0微生物实验室质量控制准则第7页设备/仪器要求总则l满足开展相关检测项目标要求。l制订相关设备/仪器作业指导书。l设备/仪器检定校准，尤其室新购仪器检定。设备/仪器分别以送检、送校、自检、自校表示其所检定状态。l设备/仪器运行检验计划。l设备/仪器运行情况及适用统计l维修后设备/仪器再校准或检验，并含有完整检验统计。微生物实验室质量控制准则第8页设备控制和程序l微生物检验惯用需监控设备和仪器l1培养箱（生化培养箱或CO2培养箱等）、干燥箱、高压灭菌锅、净化工作台、pH计、冰箱，（低温冰箱或冷柜）温度计、紫外灯、显微镜、离心机、天平、。l2小计量容器l3微生物测定仪器、微生物检定仪器、空气采样器、酶标仪专用等。微生物实验室质量控制准则第9页温度计l试验室必须要有工作温度计和参考温度计。l工作温度计：用于日常温度检验。l参考温度计：用于校正工作温度计。l温度计运行检验：普通可采取一次/六个月运行检验。l日常检验、校准检验、运行检验等都应做好对应技术统计。微生物实验室质量控制准则第10页培养箱、水浴箱和冰箱温度控制l依据培养物性质及温度要求，培养箱应分别设置（以用途和温度分）l培养箱温差要求，普通显示值与实测值相差小于1，箱体内各点温差（内部温度均衡性）以及温度波动一样小于1。l温度监控方法：可将工作温度计置甘油中，放入待测箱体内，观察工作温度计温度，最好1-2次/天监控统计，微生物实验室质量控制准则第11页高压灭菌锅温度控制（一）l高压灭菌锅；生物指示菌法（惯用）、化学变色纸片及高压灭菌锅温度计等方法进行检测。l生物指示菌法是一个高压灭菌锅效果显示法。l高压灭菌锅由专员按作业指导书操作，并做好每一次作业统计。l高压灭菌锅使用时，内置物品不能太多，单位体积内内容物（每瓶内培养基）不能太多。同时应注意内容物不一样耐受温度。总暴露时间最好不要超出45min。微生物实验室质量控制准则第12页高压灭菌锅温度控制（二）l高压灭菌锅日常工作统计应包含以下信息：高压灭菌材料、开始时间、压力/温度、取出时间、高压灭菌胶带颜色改变（日常惯用无菌培养代替）l高压灭菌锅温度波动范围：110，115和1212。l高压灭菌锅校准周期普通在六个月。微生物实验室质量控制准则第13页干燥灭菌箱温度控制l干燥灭菌箱日常工作统计中应包含以下信息：开始时间、抵达灭菌温度时时间、取出时间（或关闭时间）。l干燥灭菌箱温度校准；用参考温度计进行温度测试。l干燥灭菌箱温度要求与准确度：1605或1805。前者为灭菌2h，后者为30min。l干燥灭菌箱校按时间普通为一年。微生物实验室质量控制准则第14页培养基配制用蒸馏水控制l对于蒸馏水器来说：按设备说明，定时清洁离子交换器和更换离子交换材料。l检测要求：西欧标准为微生物检验用蒸馏水特定电导率0.5ms/m；细菌数50cfu/ml。我们日惯用标准为10ms/m，未见有细菌指标。l检测频率：1次/每个月。l蒸馏水定点供给，并做好对应质量控制，统计检测结果。微生物实验室质量控制准则第15页天平管理l天平放置要求：无振动、无气流影响及水平台面上。l天平要有使用及运行检验统计。l天平作为计量仪器是列入国家强制检定范围，普通1次/年进行检定。l运行检验频率按运行计划或按产品（天平生产厂家）给出标准重量单位进行对照。微生物实验室质量控制准则第16页容积控制（一）l经过一定控制方法，确保高压灭菌后稀释剂满足标准用量。l采取称中法来测定蒸发量，体积100ml稀释剂起重量为101g。高压够体积偏差不得超出1%。l采取先高压后定量分装，可防止因高压造成体积误差。l对保留定量液体应在使用时，注意补充容积。微生物实验室质量控制准则第17页容积控制（二）l吸管控制：经过小计量容器校准，后使用。l小计量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，校准周期普通为1-2次/一年。l小计量容器日常使用检验可每七天进行一次，包含容器完整性。并做好对应统计。微生物实验室质量控制准则第18页pH计lpH计使用前应用标准液进行校准。l缓冲液使用使用期：PH4.00约1年lPH7.00约6个月lpH9.00约6个月lpH计维护：电极外表定时清洗；l电极敏感性检测及极性恢复。微生物实验室质量控制准则第19页净化工作台控制l水平流净化工作台工作区域，要求洁净度为100级。空气沉降30min，细菌数1个/皿。垂直流净化工作台，细菌数0.49个/皿.l净化工作台运行检验频次：1次/月主要是细菌沉降检测。l净化工作台高效过滤膜普通为一年更换一次，并同时进行粒子与细菌沉降检测。微生物实验室质量控制准则第20页紫外线灯控制l检测方法：仪器测试法和生物测试法。前者是经过专用仪器检测紫外灯管发射紫外光强度。国家消毒技术规范中表明在距离照射无1米处，要求其强度为90。l生物测试法：采取一定菌培养物，经一定百分比稀释，菌量控制在200-250个/0.5ml，涂布平板在紫外灯光下照射，2min，同时设置普通光源对照组，后置3748h，计算其杀灭率。要求杀灭率达99%。微生物实验室质量控制准则第21页显微镜控制l显微镜应制订作业指导书，日常维护统计及自校统计。l显微镜应置于无振动，防止灰尘，防潮等要求环境。微生物实验室质量控制准则第22页其它微生物检测专用仪器控制l细菌判定仪、酶标仪等设备，工作中惯用阳性对照检测其功效正常性。l仪器检定则按相关部门检定或按自校作业指导书进行。l仪器使用登记、校准计划、校准统计等文件存档。l仪器专员使用、操作者应取得对应岗位培训合格，持证上岗。微生物实验室质量控制准则第23页培养基质量控制l正确进行培养基质量控制，并作为一项经常性工作，建立完整检验资料，是试验室今后经过对应级别认证，在整个检验质量控制体系中所必须具备文件资料。l现有依据：卫生部1993年公布食品检验用干燥培养基生产质量控制。但这个标准不完善。微生物实验室质量控制准则第24页培养基分类l按其成份分类按其成份分类：有天然培养基和合成培养基。l按按用用途途分分类类：基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、判别培养基及厌氧培养基。按按培培养养基基形形态态分分类类：液体培养基、流体培养基、半固体培养基及固体培养基。l依依据据培培养养基基剂剂型型不不一一样样分分类类：新鲜配制培养基和干燥培养基两种。微生物实验室质量控制准则第25页检验中惯用培养基l水质检测用培养基：7种l化装品检验用培养基：8种l食品检验用培养基：惯用有37种，110种被列入了GB4789中，其中生化试验培养基23种，普通和专用培养基89种。l食品、化装品及涉水产品等产品微生物检验常规项目中所用增菌分离培养基有所不一样，对于菌种判定所用培养基，各类产品分离菌种其判定所用培养基基本相同。l微生物实验室质量控制准则第26页惯用培养基质量控制惯用培养基质量控制（一）l检检验验项项目目与与方方法法：对新批号干燥培养基物理、化学及生物学指标判定lA：感官（外观）研细程度和颜色（溶解前后），透明度，杂质等；lB：PH测定，按各种培养基要求PH0.2，蒸馏水PH应在6.4-7.0之间。lC：生物学指标检定，被检培养基对应细菌生长率测试；菌落大小及特征检测。微生物实验室质量控制准则第27页惯用培养基质量控制惯用培养基质量控制（二）l生生长长率率测测试试：适用与液体和固体培养基：将菌培养液，用生理盐水做倍比稀释，取适当稀释度进行平板计数或接种被检培养基试管，同时以按相关培养基国家标准配方新鲜配制培养基进行对照。不低与10%。微生物实验室质量控制准则第28页惯用培养基质量控制惯用培养基质量控制（三）l菌落大小测试：划线分离测试菌，取10个菌落测量直径大小，其直径均值与新鲜配制培养基无统计学差异。微生物实验室质量控制准则第29页惯用培养基检定用标准菌株惯用培养基检定用标准菌株甲型副伤寒沙门菌50002伤寒沙门菌50096乙型副伤寒沙门茵鸭沙门茵50083鼠伤寒沙门氏菌痢疾志贺菌1型5157Ol福氏志贺菌2 大肠埃希菌25922（ATCC）金黄色葡萄球菌25923（ATCC普通变形杆菌肺炎克雷伯菌肺炎亚种弗劳地枸橼酸杆菌4197l绿脓杆菌27853（ATCC）副溶血性弧菌微生物实验室质量控制准则第30页惯用培养基质量标准惯用培养基质量标准l外观和理化标准：l干粉颜色：淡黄色粉末或展现本培养基特有颜色l溶解后培养基色泽：清楚透明（含琼脂除外）淡黄色或特有色泽；l灭菌后培养基PH：7.22为多；个别弧菌检验用培养基pH值偏高为：8.02l生物学指标：菌落特征及菌落大小。微生物实验室质量控制准则第31页培养基保留环境培养基保留环境l制成培养基保留环境为4冰箱，如制成平板则用塑料袋包装置冰箱保留，l干燥培养基干粉含有活性物质、遇热易分解物质应仔细查看存放条件，多数也须放在2-8条件保留。l有培养基则以存放于10-15条件为易。如含有高浓度胆盐培养基。微生物实验室质量控制准则第32页养基制备控制程序养基制备控制程序l培养基配制所用仪器设备培养基配制所用仪器设备必须经过对应判定。l配制培养基所用用具及容器配制培养基所用用具及容器必须是清洁或是灭菌，一些特殊不易洗刷清洁玻璃器皿，必要时可用重铬酸钾硫酸清洁浸泡后，取出置5%氢氧化钠溶液浸泡数分钟，再用3%盐酸溶液进行中和，然后用清水冲洗，烘干后备用。l培养基配制原料，试剂质量控制微生物实验室质量控制准则第33页培养基配制程序（一）l不一样培养基配制程序有所不一样，但普通培养基配制程序主要有以下7个步骤、调配、融化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及判定。l注意点：配制时注意各类成份用途。lpH测定干燥培养基在工厂生产时，对培养基PH进行了一定调试，在实际工作中，因为配制环境、配制所用溶剂（蒸馏水）PH等条件有所不一样，都会对所用培养基PH要有所影响。所以对于干燥培养基配制，一样需要进行PH测验。微生物实验室质量控制准则第34页培养基配制程序（二）l配制好培养基（尤其是糖发酵管）不宜久放。，因为培养培养基吸收空气中二氧化碳，会使培养基变酸，从而影响细菌生长。l培养基中抑制剂及指示剂一定要准确称量，抑制剂要注意合理配伍。微生物实验室质量控制准则第35页培养基主要原料质量控制，l配制培养基主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、胆盐、无机盐和琼脂等，这些主要原料有劣，直接影响到培养基质量，由此也将影响检验质量。l指标有感官、理化、物理、生物学。微生物实验室质量控制准则第36页培养基相关试剂质量控制l培养基相关试剂质量控制及阴、阳性对照菌株试验。对做生化反应各类试剂，在配就后均应进行各项必要判定。用已知阴、阳性菌株进行对照试验。对于其它如氧化酶、触酶、染色液等也一样需要经判定后用于试验。微生物实验室质量控制准则第37页不合格培养基可能原因（一）不合格培养基可能原因（一）l干燥培养基结块干燥培养基结块ll培养基过于陈旧ll培养基处于潮湿环境中ll培养基生产时水分过高lPH偏离要求值偏离要求值ll培养基过于陈旧ll配制时所使用蒸馏水非中性ll培养基过分灭菌微生物实验室质量控制准则第38页不合格培养基可能原因（二）不合格培养基可能原因（二）l培养基不清澈培养基不清澈ll使用了劣质水ll培养基PH值不对ll使用了不一样容器制备ll生产原料精度不够ll培养基过分灭菌l凝固温度过高凝固温度过高ll培养基干粉用太多ll琼脂质量发生了改变微生物实验室质量控制准则第39页不合格培养基可能原因（三）不合格培养基可能原因（三）l凝胶强度过低凝胶强度过低ll培养基干粉用太少ll培养基未完全溶解ll培养基过分灭菌ll倾注前未振摇培养基瓶ll琼脂粉凝固强度较低l颜色不对颜色不对llPH不正确（带指示剂培养基）ll培养基过分灭菌ll使用了不洁容器制备微生物实验室质量控制准则第40页不合格培养基可能原因（四）不合格培养基可能原因（四）l培养基被污染培养基被污染ll培养基灭菌不彻底ll灭菌后存放不妥而污染ll试验时使用了污染器皿l生长不良生长不良ll可能由制备容器设备、水或样品带入抑制物ll样品中含有亚致死性损伤微生物llPH不正确ll添加物（抑制剂）等浓度不妥ll培养基过分灭菌ll试验时培养基或溶解样品时温度过高微生物实验室质量控制准则第41页不合格培养基可能原因（五）不合格培养基可能原因（五）l过分生长过分生长ll培养基过分灭菌，选择性物质受到了破坏ll添加物浓度不妥l菌落蔓延菌落蔓延ll琼脂表面过湿ll使用了过多接种体积ll培养基过分灭菌l非经典生长非经典生长ll培养基制备不妥ll干燥培养基存放陈旧ll制备成培养基存放时间过长ll生长条件不妥（温度、时间、气体）微生物实验室质量控制准则第42页检测质量确保检测质量确保l定时使用有证标准物质和次级标准物质（参考物质）进行内部质量控制。l试验室间比对或能力验证l利用相同或不一样方法进行重复检测l对留存样品进行在检测。微生物实验室质量控制准则第43页微生物检验质控方法微生物检验质控方法（一）l菌落计数精密度控制直接计数菌落计数精密度控制直接计数l选择同一标本，要求检验人员进行菌落计数。l将大肠菌（25922）或经检定标化菌片，经过适当梯度稀释，选择适当稀释度进行菌落计数试验操作。361培养24h进行菌落计数。微生物实验室质量控制准则第44页微生物检验质控方法（二）l菌落计数精密度控制重复计数法l选择十个平板，每个平板含有适当菌落数（100以内）。将平板编号，由试验人员进行计数并统计结果。去掉平板编号，将平板置冰箱保留过夜，次日取出，重新给予编号，由试验人员重复计数并统计。计算每位试验人员每对结果平均数（X）。X=（a+b）/2；相对误差（rd）计算：rd=|a+b|/X100%。其它试验人员间相对误差范围计算：先计算全部试验人员平均菌落数，X=x/n，要求每一结果均应在X18.2%范围内。微生物实验室质量控制准则第45页重复计数要求l本身同一平皿重复计数误差小于7.7%l试验人员之间同一平皿重复计数误差18.2%本身同一梯度平行加样两皿间相对误小于7.7%试验人员之间同一梯度计数误差X18.2%范围l不一样梯度间菌落计数最终误差小于7.7%微生物实验室质量控制准则第46页菌种判定质控菌种判定质控l菌种判定质控要求，对所给微生物菌种，按相关方法及指标进行生化、血清等方面判定。l判定质量评价：判定程序是否正确；判定方法是否正确；详细操作技术是否熟练，结果汇报是否正确。每一项设置分值为25分。总分为100分。微生物实验室质量控制准则第47页内部质量控制推荐频率l菌落计数精密度控制：1次/3月；l菌种判定控制：1次/六个月或1年l盲样测定丢失对照1次/六个月微生物实验室质量控制准则第48页试验室安全防护试验室安全防护1l培训与告之培训与告之l试验室管理人员及试验人员必须了解相关工作相关危险。对招收新职员、工作开始发生改变或使用新方法，启用新设备时，这点尤为主要。全部工作人员，包含清洁和服务人员都要知道。需要进行口头和书面两种方式通知。相关仪器必须要有字迹清楚其安全使用书面说明。微生物实验室质量控制准则第49页试验室安全防护试验室安全防护2l标志标志l在进行致病性微生物工作房间人口处必须要有警示标志。l试验室房间必须以使与微生物相关危险得以过免方式装置，以使微生物传输得到限制，房间还应便于清洁和消除污染工作台必须由光滑、耐消毒剂材料制成。难以清洁角落、弯头及管道应尽可能地防止污染。微生物实验室质量控制准则第50页试验室安全防护试验室安全防护3l预防空气污染预防空气污染l加热培养蒙或其它化学物质时，粉尘可扩做到空气中这可给工作人员带来过敏反应或出现其它问题所以，设计排风装置很主要，以至包含天平附近抽风点。通常称量应按正确安全规程进行。微生物实验室质量控制准则第51页试验室安全防护试验室安全防护4l有毒有害物防护有毒有害物防护l浓酸和碱及其它腐蚀性化学物质和毒性物质必须专门保留，尽可能锁存，以使它们引发损害减至最低l对试验室所用全部化学物质，试验室必须有记述其危险及操作中可能限制产品表l在所需范围内工作人员必须使用人体防护装置，防护服、手套筹使用安全设施是试验人员职责污染了防护员应尽快地更换，离开工作室时，必须脱去。微生物实验室质量控制准则第52页试验室安全防护试验室安全防护5l消除污染和废物处理消除污染和废物处理l试验室必须要相关于应怎样消除溅出微生物污染书面说明。另外，对废物处理，如用过培养皿和打坏玻璃器皿，应有固定程序。全部被洗物品在洗刷前均经高压灭菌，洗涤工受微生物感染危险就能够尽可能防止。微生物实验室质量控制准则第53页试验室安全防护试验室安全防护6l其它其它l试验室内不准吃饭、饮水及吸烟l悬浮物可影响和污染样品，均质，混合，吸移或离心期间及灼烧接种针时，可形成悬浮物，应注意预防形成悬浮物。l利用常识及良好试验室技术可最好地防止微生物学试验室中事故发生。微生物实验室质量控制准则第54页