食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验.pptx

食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验副溶血性弧菌检验全国食品卫生标准委员会微生物标准协作组.11食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第1页一个主要食源性致病菌一个主要食源性致病菌主要与海产品消费相关主要与海产品消费相关我国沿海地域细菌性食源性疾病暴发最主要致病因子我国沿海地域细菌性食源性疾病暴发最主要致病因子国外海产品副溶菌限量国外海产品副溶菌限量 美国美国FDA要求软体贝类总体副溶菌密度要求软体贝类总体副溶菌密度104 MPN/g；日本要求生食贝类与鱼片总体副溶菌密度日本要求生食贝类与鱼片总体副溶菌密度100 CFU/g 副溶血性弧菌副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第2页国外检验方法国外检验方法美国美国FDA方法方法BAM 网络版网络版 第第9章章 弧菌弧菌 第第8版版 1995/1998加拿大加拿大 MFHPB-15 海产品和贝类副溶血性弧菌检验海产品和贝类副溶血性弧菌检验,1997 MFLP-57 海产品和贝类副溶血性弧菌计数海产品和贝类副溶血性弧菌计数,1996日本日本 食品卫生检验指针微生物编食品卫生检验指针微生物编,ISO标准标准 8914:1990（E）微生物学：副溶血性弧菌检验总体指南）微生物学：副溶血性弧菌检验总体指南NMKL 食品中致病菌检测和计数食品中致病菌检测和计数,1997CCFRA 副溶血性弧菌检验副溶血性弧菌检验 17.1:1995食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第3页以科学技术和实践经验为依据，经科学以科学技术和实践经验为依据，经科学研究制订研究制订与国际方法接轨与国际方法接轨修订法同时表达定性、定量分析流程修订法同时表达定性、定量分析流程标准修订标准标准修订标准食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第4页试验室内研究试验室内研究食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第5页MPNMPN计数与涂布平板计数对比计数与涂布平板计数对比 食品类别食品类别加标菌株加标菌株稀释倍数稀释倍数MPN法法（MPN/g）涂布平板计数涂布平板计数（CFU/g）猪肉馅猪肉馅05VP33710-62.41.405VP33710-70.43冻虾仁冻虾仁05VP33710-60.930.605VP33710-70.04海鱼海鱼ATCC1780210-60.04ATCC1780210-70.03食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第6页培养基上可疑菌落准确性培养基上可疑菌落准确性 食品食品类别类别国家标准法可疑菌可疑菌落数落数阳性阳性数数准确率准确率（%）修订法修订法可疑菌可疑菌落数落数阳性阳性数数准确率准确率（%）猪肉馅猪肉馅选择性平板选择性平板3030100科玛嘉科玛嘉4040100蔗糖平板蔗糖平板3030100TCBS4040100冻虾仁冻虾仁选择性平板选择性平板63427878科玛嘉科玛嘉2525100蔗糖平板蔗糖平板57356161TCBS7474100海鱼海鱼选择性平板选择性平板30289393科玛嘉科玛嘉7474100蔗糖平板蔗糖平板30258383TCBS5151100牡蛎牡蛎选择性平板选择性平板2762222科玛嘉科玛嘉28269393蔗糖平板蔗糖平板18528TCBS1919100食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第7页染菌试验试验室内研究染菌试验试验室内研究 食品类别食品类别加样浓度加样浓度等级等级MPN/g试样数试样数阳性数阳性数国家标准法修订法修订法猪肉馅猪肉馅高高2.4101010低低0.43101010对照对照0.031000冻虾仁冻虾仁高高0.93101010低低0.04959对照对照0.031000海鱼海鱼低低0.0410910极低极低0.041014对照对照0.031000牡蛎牡蛎对照对照0.231136食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第8页染菌试验合作研究染菌试验合作研究食品类别加样浓度等级MPN/g试样数阳性数国家标准法修订法牛肉馅天然污染0.032476低0.032413阴性对照0.032400冻鳕鱼第一批2.124521第二批0.032405第三批0.032401牡蛎肉第一批2.9242023第二批0.24211218第三批0.032426食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第9页合作比对研究合作比对研究食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第10页n样品制备样品制备n增菌（定性增菌（定性/定量）定量）n分离分离n纯培养纯培养n初步判定初步判定n确定判定确定判定n汇报汇报检验方法文本关键点检验方法文本关键点食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第11页n818hnFDA:1618h增菌时间增菌时间食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第12页 TCBS平板 科玛嘉弧菌显色平板圆、半透明、表面光滑粉紫色菌落，直径2 mm3 mm圆、半透明、表面光滑绿色菌落，有粘性，直径2 mm3 mm食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第13页nTSAn3个或以上个或以上纯培养纯培养食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第14页使用MPN表示例示例10 g1 g0.1 g0.01 g0.001 gA31000310n首先，假如最高稀释度及其相邻较低稀释度全部管均为阴性，剔除最高稀释度。只要这种情形存在，而且余下4个稀释度，继续剔除这些稀释度。n其次，假如只余下3个稀释度，采取这3个稀释度，如A所表示。食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第15页使用MPN表示例示例10 g1 g0.1 g0.01 g0.001 gB33100310C23231 231n假如还剩下3个以上稀释度，那么找到全部管均为阳性最高稀释度。此处存在3种情形。n第1种情形，全部管均为阳性稀释度在余下3个最高稀释度中，采取这3个稀释度。示例B中，首先剔除最高稀释度，因为全部管均为阳性稀释度在余下3个最高稀释度中，所以使用这3个稀释度。示例C中，全部管均为阳性稀释度在余下3个最高稀释度中。食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第16页使用MPN表示例示例10 g1 g0.1 g0.01 g0.001 gD23221 221n第2种情形，全部管均为阳性稀释度不在余下3个最高稀释度中。那么，选择靠近全部管均为阳性稀释度2个更高稀释度，并将更高稀释度阳性管数加到第3个更高稀释度中，示例D中。全部管均为阳性稀释度为1 g，选择0.1 g和0.01 g，形成第3个稀释度0.001 g有阳性管更高稀释度只要一个。食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第17页使用MPN表示例示例10 g1 g0.1 g0.01 g0.001 gE21011212n第3种情形，没有全部管均为阳性稀释度。那么，选择最低2个稀释度，将余下更高稀释度阳性管数加到第3低稀释度中。示例E中，没有全部管均为阳性稀释度，最低2个稀释度为10g和1g，将0.1g、0.01g和0.001g阳性管数相加，形成第3个稀释度0.1 g。食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第18页使用MPN表示例示例10 g1 g0.1 g0.01 g0.001 gF22221 221n假如选择假如选择3个稀释度不在表中，如有可能，重做试个稀释度不在表中，如有可能，重做试验。假如依然需要这个验。假如依然需要这个MPN值，使用值，使用3个最高稀释个最高稀释度。示例度。示例F中，使用了中，使用了3个最高稀释度。个最高稀释度。食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第19页使用MPN表示例示例10 g1 g0.1 g0.01 g0.001 gG22122n假如这些稀释度仍不在表中，那么使用有阳性管最高稀假如这些稀释度仍不在表中，那么使用有阳性管最高稀释度，释度，nMPN/g=(1/m)*2.303*log10(全部管样品克数之和/阴性管样品克数之和)其中，m表示含有阳性管稀释度中每管样品量。食品卫生微生物学检验之副溶血性弧菌检验第20页