高效液相色谱基线和进样阀的各种问题.pdf

高效液相色谱基线和进样阀的各种问题 A 基线漂移（原因解决方法）1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器 2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）使用 HPLC 级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。3、流通池被污染或有气体 用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用 1N 的硝酸。（不要用盐酸）4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5、流动相配比不当或流速变化 更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时 用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用 10-20 倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及 HPLC 级的溶剂 8、样品中有强保留的物质（高 K值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。9、使用循环溶剂，但检测器未调整。重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。10、检测器没有设定在最大吸收波长处。将波长调整至最大吸收波长处 B 基线噪音（规则的）（原因解决方法）1、在流动相、检测器或泵中有空气 流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2、漏液 图 见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。3、流动相混合不完全 用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂 4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）减少差异或加上热交换器 5、在同一条线上有其他电子设备 断开 LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。6、泵振动 在系统中加入脉冲阻尼器 C 基线噪音（不规则的）（原因解决方法）1、漏液 图 见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成 检查流动相的组成。3、流动相各溶剂不相溶 选择互溶的流动相 4、检测器/记录仪电子元件的问题 断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。5、系统内有气泡 用强极性溶液清洗系统 6、检测器内有气泡 清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器 7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）用 1N 的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池 8、检测器灯能量不足 更换灯 9、色谱柱填料流失或阻塞 更换色谱柱 10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常 维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置 D 宽峰（原因解决方法）1、流动相组成变化 重新制备新的流动相 2、流动相流速太低 调节流速 3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）见 section3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。4、检测器设定不正确 调整设定 5、柱外效应影响 原因：a、柱子过载 b、检测器对反应时间或池体积响应过大 c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大 d、记录仪响应时间太长 解决方法：a、小体积进样（例如：10ul 而不是 100ul）以 1：10 或 1：100 的比例稀释样品 b、减少响应时间或使用更小的流通池 c、使用内径为 0.007-0.01 的短管路 d、减少响应时间 6、缓冲液浓度太低 增加浓度 7、保护柱污染或失效 更换保护柱 8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。9、柱入口塌陷 打开柱入口，填补塌陷或更换柱子 10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰 选择其它类型的色谱柱以改善分离效果 11、柱温过低 提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过 75 12、检测器时间常数太大 使用较小的时间常数 E 分离度降低（原因解决方法）1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）重新配置流动相 2、保护柱或分析柱阻塞图 去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。F 所有的峰面积都太小（原因解决方法）1、检测器衰减设定过高 减少衰减的设定 2、检测器时间常数设定太大 设定较小的时间常数 3、进样量太少 增大进样量 4、记录仪连接不当 使用正确的连接 G 所有的峰面积都太大（原因解决方法）1、检测器衰减设定过低 采取较大的衰减 2、进样过多 减少进样量 3、记录仪连接不正确 正确连接记录仪 进样阀的问题 以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。手动进样阀，转动不灵（原因解决方法）1、转子密封损坏 更换或调整转子密封 2、转子太紧 调整转子的松紧度 手动进样阀，载样困难（原因解决方法）1、进样阀安装不当 重新安装 2、定量环阻塞 清洗或更换定量环 3、进样器污染 清洗或更换进样器 4、管路阻塞 清洗或更换管路 自动进样阀，不能转动（原因解决方法）1、无压力（或电源）提供恰当的压力（电源）2、转子太紧 调整转子的松紧度 3、进样阀安装不当 重新安装 自动进样阀，其它问题（原因解决方法）1、阻塞 清洗或更换阻塞部件 2、机械故障 见随机维修手册 3、控制器故障 维修或更换控制器