1、浙江工商大学环境科学与工程学院试验八试验八 水中菌落总数测定及水中菌落总数测定及常见微生物观察常见微生物观察 水中菌落总数的测定及常见微生物观察第1页浙江工商大学环境科学与工程学院1目标要求目标要求2试验原理试验原理3试验材料试验材料4试验步骤试验步骤5菌落计数菌落计数6作作 业业水中菌落总数的测定及常见微生物观察第2页一、目标要求一、目标要求掌握水样中细菌菌落总数测定方法；了解检测水样朱总细菌总数方法原理及其应用中优缺点了解水质与细菌菌落数之间相关性以及水质评价微生物学卫生标准，明白其应用主要性；深入巩固微生物倒平板、稀释涂布平板分离法和无菌操作等技术和方法水中菌落总数的测定及常见微生物观察
2、第3页浙江工商大学环境科学与工程学院二、试验原理二、试验原理 菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。细菌种类很多，有各自生理特征，必须用适合它们生长培养基才能将它们培养出来。然而，在实际工作中不易做到，所以通惯用一个适合大多数细菌生长培养基培养腐生性细菌，以它菌落总数表明有机物污染程度。水中细菌总数与水体受有机污染程度成下相关，所以细菌总数常作为评价水体污染程度一个主要指标。细菌总数越大，说明水体被污染得越严重。水中菌落总数的测定及常见微生物观察第4页浙江工商大学环境科学与工程学院三、试验试剂与器材三、试验试剂与器材 污水样品（2种样品）牛肉膏
3、蛋白胨培养基；无菌试管、无菌三角瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿等；酒精灯、超净工作台、培养箱等。水中菌落总数的测定及常见微生物观察第5页浙江工商大学环境科学与工程学院四、试验步骤四、试验步骤1 采集水样：已经准备好2种污水水样。2 细菌总数测定：（1）水样稀释：按无菌操作法，将水样作10倍系列稀释。（2）选取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度。稀释度选择 是本试验准确度关键，选择适宜者，平皿上菌落总数 介于30和300之间。（3）吸收由高倍至低倍稀释液，每个稀释液分别注入两 个培养皿，每皿1mL。水中菌落总数的测定及常见微生物观察第6页浙江工商大学环境科学与工程学院（4
4、注入彻底融化，然后冷却到45营养琼脂培养基，马上旋摇培养皿，充分混匀。方法是握住平皿，先往一个方向画圆，再朝相反方向回转；或一面画圆，一面适当倾斜。小心勿使这个混合液体溅到培养皿边缘。让平皿基于水平位置放置至固化。（5）接种水样培养皿，倒置于37培养箱中培养48 h。水中菌落总数的测定及常见微生物观察第7页浙江工商大学环境科学与工程学院五、菌落计数五、菌落计数1 1 平板菌落数选择平板菌落数选择（1）进行平皿菌落计数时，记下同一浓度3个平板（或2个）菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍数即为1ml水样中细菌总数。（2）计数时应选择菌落数在30300/皿之间稀释倍数进行计数，若同个稀释度中一个平
5、皿有较大片状菌落生长时，则不宜采取，而应以无片状菌落生长平皿计数该稀释度平均菌落数。若片状菌落少于平皿二分之一时，而另半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数2倍作为全皿数目。在记下各平皿菌落数后，应算出同一稀释度平均菌数，供下步计算时用。水中菌落总数的测定及常见微生物观察第8页浙江工商大学环境科学与工程学院2 2 稀释度选择稀释度选择（l）首先选择平均菌落数在30300者进行计算，当只有一个稀释度平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数。（2）若有两个稀释度平均菌落数都在30300之间，则应按二者比值来决定。若其比值小于2，应汇报二者平均数；若大于2则汇报其中较小菌落数。（3）假如全
6、部稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高平均菌落数乘以稀释倍数汇报之。水中菌落总数的测定及常见微生物观察第9页浙江工商大学环境科学与工程学院（4）若全部稀释度平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低平均菌落数乘以稀释倍数汇报之（5）假如全部稀释度平均菌落数均不在30300之间，则以最靠近300或30平均菌落数乘以稀释倍数汇报之。（6）菌落计数汇报，菌落在100以内时按实有数汇报；大于100时，采取二位有效数字；在二位有效数字后面数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面零数,也可用10指数来表示，在所需汇报菌落数多至无法计算时，应注明水样稀释倍数。水中菌落总数的测定及常见微生物观察第10页浙江工商大学环境科学与工程学院六、作六、作 业业1、测定水中细菌菌落总数有什么实际意义？2、依据我国饮用水水质标准，讨论你这次检验结果。3、本试验中哪些步骤属无菌操作？为何？水中菌落总数的测定及常见微生物观察第11页
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