病原学诊疗和防治专家讲座.pptx

第八章第八章 病原学诊疗与防治病原学诊疗与防治 第一节第一节 细菌学诊疗细菌学诊疗包含；包含；细菌学诊疗细菌学诊疗检测病原菌及其抗原，产物或核酸检测病原菌及其抗原，产物或核酸血清学诊疗血清学诊疗检测患者血清中特异性抗体检测患者血清中特异性抗体病原学诊疗和防治第1页一、病原菌检测一、病原菌检测v标本采集时应注意无菌操作，尽可能防止杂菌污染。标本采集时应注意无菌操作，尽可能防止杂菌污染。v依据致病菌在不一样病期体内分布和排出部位，采取依据致病菌在不一样病期体内分布和排出部位，采取不一样标本。不一样标本。v应在使用抗菌药品前采集标本，不然在培养时应加入应在使用抗菌药品前采集标本，不然在培养时应加入拮抗剂。拮抗剂。v尽可能采集病变显著部位材料。尽可能采集病变显著部位材料。v标本必须新鲜，采集后尽快送检。标本必须新鲜，采集后尽快送检。v送检过程中要采取适当保留方式。送检过程中要采取适当保留方式。v标本做好标识，详细填写化验单，确保各步骤准确无标本做好标识，详细填写化验单，确保各步骤准确无误。误。标本采集与送检标准标本采集与送检标准病原学诊疗和防治第2页致病菌检验程序致病菌检验程序标本标本直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检分离培养与判定分离培养与判定病原菌抗原检测病原菌抗原检测 其它检测其它检测形态、结构、形态、结构、染色性染色性涂片涂片镜检镜检菌落菌落特征特征生化生化反应反应药敏药敏试验试验血清学血清学反应反应沉淀反应沉淀反应协同凝集协同凝集免疫荧光免疫荧光对流免疫电泳对流免疫电泳酶免疫测定酶免疫测定免疫印迹免疫印迹细菌代谢产物细菌代谢产物（气相色谱）（气相色谱）细菌核酸细菌核酸（PCR）噬菌体分离噬菌体分离细菌素测定细菌素测定分子生物学技术分子生物学技术动物动物试验试验病原学诊疗和防治第3页人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体量常随感染过程而增多，表答而产生特异性抗体。抗体量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）升高。所以，用已知细菌或其特异性现为效价（滴度）升高。所以，用已知细菌或其特异性抗原检测患者体液中有没有对应特异抗体和其效价动态抗原检测患者体液中有没有对应特异抗体和其效价动态改变，可作为一些传染病辅助诊疗。普通采取病人血清改变，可作为一些传染病辅助诊疗。普通采取病人血清进行试验，故称为进行试验，故称为血清学诊疗血清学诊疗(serologicaldiagnosis)。血清学诊疗试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标血清学诊疗试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者抗体效价比前者本，当后者抗体效价比前者升高大于等于升高大于等于4倍倍时方有意时方有意义。义。惯用方法：直接凝集试验、乳胶惯用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验补体结合试验、中和试验、ELISA。第二节第二节 血清学诊疗血清学诊疗病原学诊疗和防治第4页第二节第二节病毒学诊疗病毒学诊疗一一 标标本本采采集集与与送送检检（principle of collectionspecimen）1早期（前驱期、急性期、发病前早期（前驱期、急性期、发病前12天）天）2依据不一样病毒感染，采集不一样部位标本依据不一样病毒感染，采集不一样部位标本3病病毒毒易易被被灭灭活活（细细胞胞内内寄寄生生，怕怕热热不不怕怕冷冷），低低温温保保留，快速送检留，快速送检4标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并预防污染）标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并预防污染）5血清学试验检验抗体（双分血清）血清学试验检验抗体（双分血清）病原学诊疗和防治第5页二二病毒分离培养与判定（病毒分离培养与判定（virusisolationanddetermination）n（一）病毒分离（一）病毒分离n方法方法n动物接种动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况选择易感动物及接种部位，观察发病情况n鸡胚培养鸡胚培养不一样病毒选择不一样接种部位（绒毛尿不一样病毒选择不一样接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最惯用。惯用。n细胞培养：分离病毒最惯用方法细胞培养：分离病毒最惯用方法（1）原代细胞）原代细胞起源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，起源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对各种病毒敏感，但只能传对各种病毒敏感，但只能传2-3代。代。（2）二倍体细胞）二倍体细胞在体外分裂在体外分裂50-100代后仍保持代后仍保持2倍倍体染色体数目标单层细胞。体染色体数目标单层细胞。（3）传代细胞传代细胞能在体外无限传代细胞多由癌细胞或能在体外无限传代细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。二倍体细胞突变而来。病原学诊疗和防治第6页病毒在培养细胞中增殖指标病毒在培养细胞中增殖指标n细胞改变细胞改变n（1）出现）出现细胞病变效应（细胞病变效应（CPE）：即一些病毒在即一些病毒在细胞内增殖引发特有细胞病变（细胞变圆、聚集、细胞内增殖引发特有细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、脱落等）坏死、脱落等）n（2）形成细胞融合（多巨核细胞）形成细胞融合（多巨核细胞）n（3）形成包涵体：一些病毒在细胞浆或核内增殖）形成包涵体：一些病毒在细胞浆或核内增殖后形成嗜酸或嗜碱性团块状结构。（病毒增殖场所）后形成嗜酸或嗜碱性团块状结构。（病毒增殖场所）n红细胞吸附红细胞吸附n干扰现象干扰现象n细胞代谢改变（细胞代谢改变（pH）病原学诊疗和防治第7页正常细胞正常细胞病变细胞病变细胞病原学诊疗和防治第8页（二）病毒数量与感染性测定（二）病毒数量与感染性测定（三）新分离病毒判定（三）新分离病毒判定n核酸类型、理化性状、形态、血清学判定、核酸类型、理化性状、形态、血清学判定、基因测序和生物对比。基因测序和生物对比。病原学诊疗和防治第9页三、病毒感染血清学诊疗三、病毒感染血清学诊疗用已知病毒抗原检测病人血清中对应抗体用已知病毒抗原检测病人血清中对应抗体以诊疗病毒性疾病（中和试验、补体结合试验、以诊疗病毒性疾病（中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验、凝胶免疫扩散等）血凝抑制试验、凝胶免疫扩散等）病原学诊疗和防治第10页四、四、病毒感染快速诊疗病毒感染快速诊疗(一一)形态学形态学电镜和免疫电镜电镜和免疫电镜直接观察病毒直接观察病毒光镜光镜大病毒大病毒和包涵体和包涵体病原学诊疗和防治第11页病原学诊疗和防治第12页病原学诊疗和防治第13页病原学诊疗和防治第14页病原学诊疗和防治第15页病原学诊疗和防治第16页病原学诊疗和防治第17页（二）检测病毒蛋白抗原（二）检测病毒蛋白抗原用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异）敏感、特异）惯用方法：惯用方法：免疫荧光技术（免疫荧光技术（IF）固相放射免疫测定（固相放射免疫测定（SPRIT）酶免疫技术（酶免疫技术（EIA）等。等。病原学诊疗和防治第18页（三）（三）检测病毒特异性检测病毒特异性IgM抗体抗体检检测测病病毒毒特特异异性性IgM抗抗体体可可诊诊疗疗急急性性感感染染或证实病毒复制。或证实病毒复制。病原学诊疗和防治第19页（四）（四）检测病毒核酸检测病毒核酸1核酸杂交核酸杂交n斑点杂交（斑点杂交（dothybridization）n原位杂交（原位杂交（insitehybridization）nDNA印迹杂交（印迹杂交（Southernblot）nRNA印迹杂交印迹杂交（northernblot）2核酸扩增核酸扩增n聚聚合合酶酶链链反反应应（polymerasechainreaction，PCRDNA）n连接酶链反应（连接酶链反应（ligasechainreaction，LCR）n反反转转录录PCR（ReversetranscrptasePCR，RTPCR(RNA)3基因芯片技术（基因芯片技术（genechip）病原学诊疗和防治第20页第三节第三节真菌学诊疗真菌学诊疗标本标本直接镜检直接镜检深部标深部标本本染色标染色标本本G染色染色G+圆形圆形大小不大小不均均有芽生有芽生孢子孢子分离培养分离培养沙氏培养基沙氏培养基菌落观察菌落观察角质标角质标本本不染色不染色标本标本10%KOH观察菌观察菌丝、孢丝、孢子子类型类型 大小大小 颜色颜色 皱摺皱摺 判定判定动物试验动物试验（致病性真菌）（致病性真菌）接种接种观察发病情况观察发病情况死亡后取标本死亡后取标本深入判定深入判定皮肤超敏反应皮肤超敏反应快速诊疗快速诊疗血清学试验血清学试验核酸检测核酸检测真菌毒素检真菌毒素检测测病原学诊疗和防治第21页死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗类毒素类毒素新型活疫苗新型活疫苗基因工程疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗重组载体疫苗第四节第四节 特异性预防与治疗特异性预防与治疗一、人工主动免疫一、人工主动免疫(artificial active immunity)：将疫苗将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体或类毒素接种于人体，使机体产生取得性免疫力一个防治微生物感染办法，主产生取得性免疫力一个防治微生物感染办法，主要用于预防。要用于预防。合成疫苗合成疫苗亚单位疫苗亚单位疫苗DNA疫苗疫苗转基因植物疫苗转基因植物疫苗治疗性疫苗治疗性疫苗病原学诊疗和防治第22页抗毒素抗毒素抗菌血清抗菌血清胎盘球蛋白、丙种球蛋白胎盘球蛋白、丙种球蛋白细胞免疫制剂细胞免疫制剂二、二、人工被动免疫人工被动免疫人工被动免疫人工被动免疫(artificial passtive immunity)：注射含有特异性抗体免疫血清或纯化免疫球蛋白，注射含有特异性抗体免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻取得特异性或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻取得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生，故维持时间短。主要用于治疗或紧急自己产生，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。预防。病原学诊疗和防治第23页两种人工免疫比较两种人工免疫比较n区分关键点人工主动免疫人工主动免疫人工被动免疫人工被动免疫免疫物质免疫物质抗原抗原抗体或细胞因子等抗体或细胞因子等接种次数接种次数1-3次次1次次免疫出现时间免疫出现时间慢（注射后慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出快（注射后立刻出现）现）免疫维持时间免疫维持时间n长（数月多年）短（短（2-3W）用途用途多用于预防多用于预防多用于治疗或应急多用于治疗或应急预防预防病原学诊疗和防治第24页三、细菌感染治疗三、细菌感染治疗抗菌药品种类（抗生素及人工合成化学制剂）抗菌药品种类（抗生素及人工合成化学制剂）主要作用机制主要作用机制影响细胞壁合成影响细胞壁合成影响细胞膜功效影响细胞膜功效影响细菌蛋白合成影响细菌蛋白合成影响细菌核酸合成影响细菌核酸合成病原学诊疗和防治第25页四、病毒感染治疗四、病毒感染治疗n药品治疗药品治疗n核苷类药品核苷类药品抑制病毒基因复制抑制病毒基因复制抑制病毒基因转录抑制病毒基因转录n蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂n天然药品（中草药）天然药品（中草药）n其它药品（金刚烷胺）其它药品（金刚烷胺）n干扰素及干扰素诱生剂治疗干扰素及干扰素诱生剂治疗n基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制）基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制）n免疫治疗（特异性抗体、免疫调整剂、治疗性疫苗等。免疫治疗（特异性抗体、免疫调整剂、治疗性疫苗等。病原学诊疗和防治第26页五、真菌治疗五、真菌治疗n各种癣症各种癣症外用抗真药（易复发）外用抗真药（易复发）n深部真菌病深部真菌病除去诱因，提升免疫力，除去诱因，提升免疫力，用抗真菌药品（副作用大）用抗真菌药品（副作用大）病原学诊疗和防治第27页