金黄色葡萄球菌.pptx

金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌第1页一金黄色葡萄球菌生物学特征一金黄色葡萄球菌生物学特征1、形态与染色形态与染色：(staphylococcusaureus)经典金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8m左右，显微镜下排列成葡萄串状葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。革兰氏染色阳性革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌第2页金黄色葡萄球菌显微照片金黄色葡萄球菌显微照片经典金黄色葡萄球菌为球型，经典金黄色葡萄球菌为球型，直径直径0.8m左右，显微镜下排列成葡萄串状左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜金黄色葡萄球菌第3页金黄色葡萄球菌扫描电镜照片金黄色葡萄球菌扫描电镜照片金黄色葡萄球菌透射电镜照片金黄色葡萄球菌透射电镜照片金黄色葡萄球菌第4页2、培养特征培养特征：金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37C，最适生长pH7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明溶血环。金黄色葡萄球菌有高度耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。金黄色葡萄球菌第5页3、生化特征：生化特征：可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌含有较强抵抗力，对磺胺类药品敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。金黄色葡萄球菌第6页二金黄色葡萄球菌抗原结构和分二金黄色葡萄球菌抗原结构和分型型型型对分型进行简单了解、血清学分型：血清学分型：金葡水解，取得两种抗原成份：蛋白抗原和多糖抗原。蛋白抗原是凝集抗原，无特异性。多糖抗原有特异性。绝大多数金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶阴性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。、噬菌体分型：、噬菌体分型：、依据肠毒素分型：、依据肠毒素分型：、依据血浆凝固酶分型：、依据血浆凝固酶分型：金黄色葡萄球菌第7页三金黄色葡萄球菌致病性三金黄色葡萄球菌致病性三金黄色葡萄球菌致病性三金黄色葡萄球菌致病性金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见病原菌，可引发局部化脓感染，也可引发肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌致病力强弱主要取决于其产生毒素和侵袭性酶金黄色葡萄球菌致病力强弱主要取决于其产生毒素和侵袭性酶：a.溶血毒素溶血毒素：外毒素，分、四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引发肌体局部缺血和坏死；b.杀白细胞素杀白细胞素：可破坏人白细胞和巨噬细胞；c.血浆凝固酶血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，妨碍吞噬细胞吞噬作用。葡萄球菌形成感染易局部化与此酶相关；d.脱氧核糖核酸酶脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据判定金黄色葡萄球菌；e.肠毒素肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引发急性胃肠炎蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F五种血清型。当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量肠毒素。肠毒素可耐受肠毒素可耐受100C煮沸煮沸30分钟而不被破坏分钟而不被破坏,它引发食物中毒症状是呕吐和腹泻。另外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。金黄色葡萄球菌第8页四金黄色葡萄球菌流行病学四金黄色葡萄球菌流行病学四金黄色葡萄球菌流行病学四金黄色葡萄球菌流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物排泄物中都可找到。作为人和动物常见病原菌，其主要存在于人和动物鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染机会很多。近年来，美国疾病控制中心汇报，由金黄色葡萄球菌引发感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌流行病学普通有以下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。另外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引发中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。普通说，金黄色葡萄球菌可经过以下路径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引发食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其它部位污染。金黄色葡萄球菌肠毒素金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引发食物中毒占整个细菌性食物中毒33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生这类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件：存放温度，在37C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉食物，肠毒素易生成。金黄色葡萄球菌第9页五金黄色葡萄球菌检验五金黄色葡萄球菌检验五金黄色葡萄球菌检验五金黄色葡萄球菌检验我们以SN标准中最近似值(MPN)测定法来进行讲解：这种方法适合用于检测认为带有大量竞争菌食品及其原料和未经处理食品中少许金黄色葡萄球菌。1、样品制备：固体或半固体食品:以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水灭菌均质杯内,于8000r/min均质12min,制成1:10样品匀液。液体食品:用灭菌吸管吸收25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。2、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1mL稀释样品液，接种3管含10氯化钠氯化钠why?胰蛋白胨大豆肉汤。样品最高稀释度必须到达能取得阴性终点,置361培养48h。3、用3mm接种环,从有细菌生长各管中移取1环,划线接种于表面干燥Baird-Parker琼脂平板,置361培养4548h。4、从有细菌生长每一平板上最少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落,移种到肉汤培养基中,置361培养2024h。5、取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm100mm试管内充分混合,置361培养,定时观察是否有凝块形成,最少观察6h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其它辅助试验如耐热核酸酶试验等加以证实。6、汇报结果：依据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表,汇报金黄色葡萄球菌MPN/g(mL)。金黄色葡萄球菌第10页SN标准中最近似值(MPN)测定法这种方法适合用于检测认为带有大量竞争菌食品及其原料和未经处理食品中少许金黄色葡萄球菌。1、样品制备：固体或半固体食品:以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水灭菌均质杯内,于8000r/min均质12min,制成1:10样品匀液。液体食品:用灭菌吸管吸收25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。2、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1mL稀释样品液，接种3管含10氯化钠why?还记得么？金黄色葡萄球菌有高度耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。所以，这实际上是一个选择性增菌。胰蛋白胨大豆肉汤。样品最高稀释度必须到达能取得阴性终点,置361培养48h。3、用3mm接种环,从有细菌生长各管中移取1环,划线接种于表面干燥Baird-Parker琼脂平板,置361培养4548h。4、从有细菌生长每一平板上最少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落,移种到肉汤培养基中,置361培养2024h。5、取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm100mm试管内充分混合,置361培养,定时观察是否有凝块形成,最少观察6h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其它辅助试验如耐热核酸酶试验等加以证实。附：金黄色葡萄球菌血浆凝固酶试验6、汇报结果：依据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表,汇报金黄色葡萄球菌MPN/g(mL)。金黄色葡萄球菌第11页六金黄色葡萄球菌肠毒素检测（介绍）金黄色葡萄球菌肠毒素检测（介绍）一、动物学试验：主要用幼猫和猴。二、血清学试验：肠毒素作为抗原，能够和特异性抗体发生结合性反应，产生可见沉淀。用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠毒素，方法主要有：免疫琼脂扩散法反向间接血凝试验免疫荧光法酶联免役吸附法金黄色葡萄球菌第12页血清学试验介绍血清学试验介绍血清学试验介绍血清学试验介绍血清学反应是指：对应抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见沉淀、凝集现象。在食品微生物检验中，惯用血清学反应来判定分离到细菌，以最终确认检测结果。血清学反应普通特点：1)抗原体结合含有特异性，当有共同抗原体存在时，会出现交叉反应。2)抗原体结合是分子表面结合，这种结合虽相当稳定，不过可逆。3)抗原体结合是按一定百分比进行，只有百分比适当初，才能出现可见反应。4)血清学反应大致分为两个阶段进行，但其间无严格界限。第一阶段为抗原体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完成，但不出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原体反应可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。而且，在第二阶段反应中，电解质、PH、温度等环境原因改变，都直接影响血清学反应结果。习惯上将经典血清学反应分三种类别：凝集反应、沉淀反应和补体结合反应。、凝集反应颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与对应抗体结合，在电解质参加下所形成肉眼可见凝集现象，称为凝集反应（Agglutinationreaction）。其中抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，因为单位体积抗体量大，做定量试验时，应稀释抗体。）直接凝集反应颗粒性抗原与对应抗体直接结合所出现反应，称为直接凝集反应(Directagglutionreaction)。a.玻片凝集法。是一个常规定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。惯用于判定菌种、血型。如将含有痢疾杆菌抗体血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见凝集块，即阳性反应，证实该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能进行定量测定。b.试管凝集法。是一个定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有没有对应抗体及其含量。惯用于帮助诊疗一些传染病及进行流行病学调查。如肥达氏反应就是诊疗伤寒、付伤寒试管凝集试验。因为要测定抗体含量，故将待检验血清用等渗盐水倍比稀释成不一样浓度，然后加入等量抗原，37或56，24小时观察，血清最高稀释度仍有显著凝集现象，为该抗血清凝集效价。）间接凝集反应将可溶性抗原（抗体）先吸附在一个与免疫无关，颗粒状微球表面，然后与对应抗体（抗原）作用，在有电解质存在条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应(Indirectagglutination)。因为载体增大了可溶性抗原反应面积。当载体上有少许抗原与抗体结合。就出现肉眼可见反应，敏感性很高。、沉淀反应可溶性抗原与对应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。反应中抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。因为在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原稀释度作为沉淀反应效价。）环状沉淀反应：是一个定性试验方法，可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中，然后沿管壁渐渐加入等量抗原，如抗原与抗体对应，则在两液界面出现白色沉淀圆环。）絮状沉淀反应：将已知抗原与抗体在试管（如凹玻片）内混匀，如抗原抗体对应，而又二者百分比适当初，会出现肉眼可见絮状沉淀，此为阳性反应。）琼脂扩散试验：利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散，若抗原抗体对应，且二者百分比适当，在其扩散某一部分就会出现白色沉淀线。每反抗原抗体可形成一条沉淀线。有几反抗原抗体，就可分别形成几条沉淀线。琼脂扩散可分为单向扩散和双向扩散两种类型。单向扩散是一个定量试验。可用于免疫蛋白含量测定。而双向扩散多用于定性试验。因为方法简便易行，惯用于测定分析和判定复杂抗原成份。、补体结合反应补体结合反应(Complementfixationreaction)是在补体参加下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统抗原抗体反应。补体无特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合而引发反应。假如补体与绵羊红细胞、溶血素复合物结合，就会出现溶血现象，假如与细菌及对应抗体复合物结合，就会出现溶菌现象。所以，整个试验需要有补体、待检系统（已知抗体或抗原、未知抗原或抗体）及指示系统（绵羊细胞和溶血素）五种成份参加。其试验原理是补体不单独和抗原或抗体结合。假如出现溶菌，是补体与待检系统结合结果，说明抗原抗体是相对应，假如出现溶血，说明抗原抗体不相对应。此反应操作复杂，敏感性高，特异性强，能测出少许抗原和抗体，所以应用范围较广。金黄色葡萄球菌第13页七金黄色葡萄球菌快速检测方法（介绍）金黄色葡萄球菌快速检测方法（介绍）当前，伴随研究深入，一些快速和采取当代技术检测方法不停出现，这些新快速方法，普通都缩短了传统检测方法时间，能够较快地得到检测结果，而且操作相对简单。比如：法国梅里埃企业生产RPF试剂盒、API检测系统等。梅里埃企业生产miniVIDAS利用荧光免疫方法检测葡萄球菌肠毒素，在仪器上45分钟能够得到结果。比如：美国3M企业生产金黄色葡萄球菌快速检测试片，能够直接计数产生耐热核酸酶金黄色葡萄球菌，操作简单，缩短了时间。金黄色葡萄球菌第14页八八金黄色葡萄球菌污染控制金黄色葡萄球菌污染控制金黄色葡萄球菌污染控制金黄色葡萄球菌污染控制预防金黄色葡萄球菌污染食品预防金黄色葡萄球菌污染食品预防带菌人群对各种食物污染：定时对生产加工人员进行健康检验，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）人员要暂时停顿其工作或调换岗位。预防金黄色葡萄球菌对奶及其制品污染：如牛奶厂要定时检验奶牛乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎牛奶；奶挤出后，要快速冷至-10以下，以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，注意低温保留。对肉制品加工厂，患局部化脓感染禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其它适当方式处理后进行加工生产。预防金黄色葡萄球菌肠毒素生成预防金黄色葡萄球菌肠毒素生成应在低温和通风良好条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超出6小时，而且食用前要彻底加热。金黄色葡萄球菌第15页