HPLC保养维护知识.pptx

2011 Waters Corporation 1能引起能引起HPLCHPLC发生问题的潜在因素发生问题的潜在因素:工作工作环境境电源及源及地地线流流动相相泵进样器器保保护柱柱在在线过滤器器连接管路接管路色色谱柱柱检测器器数据数据处理装置理装置操作操作2011 Waters Corporation 2逻辑判断及处理逻辑判断及处理问题问题问题问题 化学品化学品环环境境 仪仪器器*色色谱谱柱柱/保保护护柱柱*电电源源 *泵泵*流流动动相相*地地线线 *进样进样器器*样样品品*温度温度 *检测检测器器*湿度湿度 *数据数据处处理理单单元元*清清洁洁程度程度从最简单从最简单,容易之处入手容易之处入手:如如 1.1.停止流速停止流速;2.2.去掉柱子去掉柱子;2011 Waters Corporation 3系统冲洗系统冲洗-去掉柱子和保护柱，用二通代替去掉柱子和保护柱，用二通代替1.检查反压-应该为零或者很小;2.进空白-基线应无问题;3.检查基线状况;2011 Waters Corporation 4基线问题分析2011 Waters Corporation 5基线噪声基线噪声流动相内含有空气流动相内含有空气-脱气处理脱气处理检测池内有气泡检测池内有气泡 冲洗检测池或冲洗检测池或增强检测出口背压（一般只适用增强检测出口背压（一般只适用UVUV检测器检测器)色谱柱内有未洗脱尽的组份色谱柱内有未洗脱尽的组份-洗脱色谱柱洗脱色谱柱系统有漏液之处系统有漏液之处-检漏并处理检漏并处理电噪声电噪声-去除噪声源去除噪声源,信号线屏蔽信号线屏蔽,检查系统接地状况检查系统接地状况检测器光源灯能量低检测器光源灯能量低-更换光源灯更换光源灯检测池污染检测池污染-冲洗检测池冲洗检测池2011 Waters Corporation 6基线周期性噪声基线周期性噪声绝大多数情况下是来源于泵的问题绝大多数情况下是来源于泵的问题泵头内有气泡泵头内有气泡-流动相脱气流动相脱气,泵头排气泵头排气泵进出口阀有问题泵进出口阀有问题-更换单向阀组件更换单向阀组件柱塞杆有问题柱塞杆有问题-更换柱塞杆及其密封圈更换柱塞杆及其密封圈溶剂混合不良溶剂混合不良-加装混合器加装混合器电噪声电噪声-去除噪声源去除噪声源2011 Waters Corporation 7非周期性噪声气泡-流动相脱气检测池内有气泡-流动相脱气,检测池后加适当反压系统有漏液之处-检漏并处理溶剂混合不良-加装混合器电噪声-去除噪声源2011 Waters Corporation 8基线漂移梯度系统-溶剂A于溶剂B的ABS值相差大-试用另种溶剂或使用基线扣除法色谱柱有其他组份被洗脱出-冲洗,直至基线稳定溶剂发生变化(如溶入气体或溶剂挥发)-氦气或脱气机脱气,溶剂瓶避光,密封(但要 注意防止溶剂瓶内产生负压)系统有漏液之处-检漏并处理环境温度影响(尤其对示差,电导,电化学检测)-室温,柱温,检测池温度控制环境湿度影 对光检测器有较大影响反压变化-溶剂和样品过滤.注意黏度过大的样品 2011 Waters Corporation 9基线周期性波动基线周期性波动温度影响-环境温度及检测池温度控制.注意空调的影响溶剂混合不良-加装混合器流动相脱气不良-流动相脱气供电电源的影响 泵不良 检修泵2011 Waters Corporation 10基线有无规律的尖峰基线有无规律的尖峰气泡-溶剂脱气电路接触不良-保证清洁,接线牢固,接点无氧化光源灯不良-检查处理电噪声-去除噪声源2011 Waters Corporation 11脱气方法脱气方法在线脱气机脱气 氦气脱气真空过滤脱气注意:溶剂应每天脱气2011 Waters Corporation 12无样品峰无样品峰进样器未进样，样品瓶放置不正确或者未达到所需要样品量泵未工作，没有流速或者流速变小系统漏液流动相或样品的问题柱子或保护柱的问题数据采集装置的问题或其与检测器连线的问题最简单快捷的检查-泵是否工作,系统是否漏液,进一针丙酮溶液检查检测器读数及数据单元是否有响应 2011 Waters Corporation 13负峰负峰负峰负峰组份的组份的ABSABS值小于溶剂的值小于溶剂的ABSABS值值气泡通过了检测池气泡通过了检测池对对RIRI检测器不一定是有了问题，很可能是正常的检测器不一定是有了问题，很可能是正常的所有峰都是负峰所有峰都是负峰 软件设置或者是软件设置或者是检测器输出与检测器输出与数数 据据单元连单元连线极性线极性接反接反2011 Waters Corporation 14峰形不好峰形不好峰形不好峰形不好-如峰拖尾如峰拖尾如峰拖尾如峰拖尾,峰分叉峰分叉峰分叉峰分叉,出肩膀出肩膀出肩膀出肩膀在线过滤器在线过滤器(IN LINE FILTER)IN LINE FILTER)污染污染(通常会伴随有系统压力升高之现象通常会伴随有系统压力升高之现象)色谱柱污染色谱柱污染系统有不正常的死体积系统有不正常的死体积-检查管路连接是否正确检查管路连接是否正确-内径内径,接头接头保护柱保护柱(GUARD COLUMN)GUARD COLUMN)污染污染溶剂不好或使用不对溶剂不好或使用不对样品不好样品不好色谱柱坏了色谱柱坏了-*-*PH 2 PH 8 8 会破坏柱子内的填料会破坏柱子内的填料 *流速变化率太大流速变化率太大-操作上操作上应应注意注意2011 Waters Corporation 15在线过滤器装置保护色谱柱的其他技术在进样器与色谱柱之间的在线过滤器样品的过滤（不能防护密封圈的脱落物）通过固相提取（SPE）净化样品干净的过滤芯脏的过滤芯，反压高2011 Waters Corporation 16保护柱污染大多数的色谱柱变差的原因都是污染使用保护柱可以增加色谱柱的使用寿命，使其10,000次进样保护柱应当被认为是延长分析色谱柱使用寿命的一种划算的牺牲保护柱的填料应该与分析色谱柱一致实际上，设计、装填良好的保护柱将改善分析色谱柱的分离效率2011 Waters Corporation 17色谱柱问题双峰 前沿峰 所有的峰都有变化色谱柱连接更换筛板再生或者更换色谱柱色谱柱被破坏pH8,硅胶基质溶解2011 Waters Corporation 18色谱峰延展-系统死体积.009.020.040样品谱带在管路内部扩散样品谱带在管路内部扩散 注意注意:较长的管路制造了更多的谱带展宽较长的管路制造了更多的谱带展宽2011 Waters Corporation 19色谱峰延展-系统死体积谱带展宽谱带展宽连接适当连接不妥由于色谱柱连接不当引起的谱带展宽，机械问题连接不妥，造成漏液色谱柱安装及连接的机械因素2011 Waters Corporation 20色谱柱连接机械因素2011 Waters Corporation 21不恰当样品溶剂样品用甲醇溶解样品用流动相溶解（0.1%TFA。4%ACN以及5%MeOH在水中）2011 Waters Corporation 22进样体积过载500 L300 L100 L10 L进样体积对色谱峰形的影响进样体积对色谱峰形的影响2011 Waters Corporation 23样品质量过载6.25 g injected2Minutes分析规模上样量(6g)获得良好的色谱峰形 46Absorbance 当上样量超过一定限度时发生当上样量超过一定限度时发生 注意峰起点提前，注意峰起点提前，注意：分析与制备之色谱峰的落点位于相同保留时间Absorbance25 mg injected制备规模上样量(25 mg)产生质量过载的色谱峰形24Minutes62011 Waters Corporation 24系统峰面积重现性RT RT RT RT 重重重重现现性好性好性好性好,但峰面但峰面但峰面但峰面积积重重重重现现性不好性不好性不好性不好 *进样进样量量-选选用用定量定量环进环进样时样时,进进样样体体积积应应大于大于3 3倍定量管倍定量管容容积积;*样样品品,气泡气泡;*样样品在流品在流动动相各相各组组份中不能份中不能充分溶解充分溶解(通常伴随有柱通常伴随有柱压压逐逐渐渐升高且升高且经经反冲后反冲后,柱柱压压会恢复正常之会恢复正常之现现 象象););*基基线线噪声的影响噪声的影响;*积积分分处处理的影响理的影响;*自自动进样动进样器消耗品部件磨器消耗品部件磨损损2011 Waters Corporation 25RT重现性差重现性温度pH控制离子对泵运行漂移平衡固定相的稳定性色谱柱污染疏水塌陷溶剂组成2011 Waters Corporation 26工作环境电源电源-容量，稳定性容量，稳定性地线地线-系统统一电源系统统一电源,统一接地统一接地清洁清洁-不要轻视灰尘的影响不要轻视灰尘的影响湿度湿度-特别是近海地区特别是近海地区温度温度-空调的影响空调的影响 2011 Waters Corporation 27一些别的因素无线装置或于仪器同一供电线路中的高频设备及频繁启动的大功率设备可能会带来噪声干扰载液容器不清洁带来干扰质量不良的化学品或使用不当(如滤膜)带来的影响实验前/后的准备和收尾工作.实验器皿和器械的清洁正确的开机/关机操作2011 Waters Corporation 28日常检查日常检查泵泵泵泵耐压检查耐压检查流量检查流量检查-用脱气的甲醇用脱气的甲醇,泵后要有约泵后要有约10001000PSIPSI的反压的反压 进样器进样器进样器进样器同样进样量的重现性同样进样量的重现性检测器检测器检测器检测器开机自检开机自检(CALIBRATION)CALIBRATION)SE/RESE/RE值值(UVUV检测器检测器)定期清洗系统定期清洗系统定期清洗系统定期清洗系统-溶剂过滤头溶剂过滤头,泵泵,进样器进样器,检测器检测器 清洗方法清洗方法定期清洁系统定期清洁系统定期清洁系统定期清洁系统-除尘除尘 清洁电路时清洁电路时,需注意人身安全及防止静电损坏需注意人身安全及防止静电损坏电路板电路板2011 Waters Corporation 29Alliance 2695/e26952011 Waters Corporation 30Alliance 泵流路2011 Waters Corporation 31泵流路2011 Waters Corporation 32泵头活塞组件2011 Waters Corporation 33泵头密封圈及清洗密封注意：更换密封组件前应使用甲醇充分浸泡2011 Waters Corporation 34Alliance比例阀及脱气系统注意：标配脱气机不能使用在正相流动相中2011 Waters Corporation 35Alliance 进样系统5个盘，每个盘24位5个盘不能互换保持样品式清浩请使用Waters标准进样瓶进样注射器，标配250ul,疲劳后影响重现性2011 Waters Corporation 36Alliance 进样针部件老式进样器部件保持滑杆清洁，必要时可以添加润滑油新式进样器部件2011 Waters Corporation 37进样针擦洗部件污染后进样残留，更换2011 Waters Corporation 38正常情况:每年更换一次易损件经常使用高浓度的缓冲液:建议每6-9月更换一次易损件 易损件包括:柱塞密封圈，清洗密封圈，柱塞杆，在线过滤芯，单向阀，进样器密封，进样针，注射器保养与维护2011 Waters Corporation 39Bubble found on compression压缩比超过1.5倍以上出现错误Wet Primer 系统流动相脱气，打开在线脱气机检查溶剂过滤头，清洗或者更换检查单向阀，清洗或者过滤Alliance 常见故障2011 Waters Corporation 40Lost prime系统压力长时间低于25PSI出现错误 Wet Prime 系统 清洗单向阀 更换单向阀Alliance 常见故障2011 Waters Corporation 41Plunger homing over pressure柱塞复位时超压在线过滤堵，清洗过滤芯更换在线过滤芯泵出口管路堵塞，更换管路Alliance 常见故障2011 Waters Corporation 42Needle Malfunction针故障，进样针未到达指定位置清洗进样针部件滑杆，去除灰尘添加润滑油机械故障，打Waters 800电话Alliance 常见故障2011 Waters Corporation 432487/9 UV检测器2011 Waters Corporation 44检测器光路装置2011 Waters Corporation 45Peak not found:656 nm Deuterium设备传感器无法确定 656纳米峰冲洗流通池，重新校正重新开机能量低尝试更换灯其它光路问题，需要维修UV检测器常见故障2011 Waters Corporation 46Lamp data not foundSystem not calibratedMethod not found电池耗尽，更换电池操作时注意断电，防止静电损坏仪器UV检测器常见故障2011 Waters Corporation 47开机过程中反复重启电源线老化，断电情况 下反复插拔几下5V电压偏低，调整电压 R43到 5V左右，不能超 过5.2V检测器自动重启2011 Waters Corporation 48提问2011 Waters Corporation 49谢谢大家