大鼠灌注固定的方法.doc

大、小鼠灌注固定的方法

准备物品：1、灌注针（灌注用的针可以是临床上的静脉套管针，便于穿刺)2、医用输液器3、500ml输液用玻璃瓶4、血管钳5、剪刀6、生理盐水7、4%多聚甲醛（4℃），0。1M的PB配制大 鼠深度麻醉，迅速打开胸腔,暴露心脏，此时注意用血管钳钝性分离心包及周围软组织以便充分暴露心脏。左手持镊子捏住心脏,右手持套管针从心尖部位插入，向 上进针到升主动脉.取出套管针内芯，连接生理盐水，打开输液开关，快速灌注，同时用剪刀在右心耳处剪一小口，待流出的液体无色后(约60ml即可）更换为 多聚甲醛。多聚甲醛灌注速度为先快后慢，快速灌注50ml后放慢速度，缓慢滴注维持即可,每只大鼠约需100ml.如果多聚甲醛灌注充分，则动物四肢和全 身肌肉会不停抽动。如此灌注约需1小时时间。
充分暴露升主动脉
套管针从心尖部位插入，向上进针到升主动脉 1、暴露心脏时要小心，速度要快,但不可损伤心脏及大血管,如果出现血液凝固或大血管损伤,灌流将失败.2、最好是剖开右心室,但是因为暴露的问题,有误剪到左心室的可能。相对来说,剪开右心耳更为方便。我们就是这样做的.3、灌流的效果：PBS或NS灌流时，血流丰富的脏器如肝脾肾等的颜色会迅速转为灰白,此为灌流正常.另外，大鼠耳尖，口唇，四肢掌部也会变苍白。4、PBS或NS灌流需缓慢而持续,防止血液血管内凝固。有条件的话可加点肝素。5、先主动脉插管，再右心耳放血,这样插管容易些。先剪右心耳的话，心脏会瘪下去的。
小鼠灌注固定方法：
采用水合氯醛麻醉后剪开胸腔，动作要快，经左心室插入头皮针连接的20 mL注射器（头皮针磨钝，从与身体纵轴成45°角的方向进针，针尖插入升主动脉内，可以看见，动作要轻柔），同时剪开右心耳，推入20 mL 生理盐水。推完以后迅速换4 ℃多聚甲醛20 mL,灌完以后取材基本就可以了。