植物组织培养复习笔记.doc

悼帽徐音饯告囤责乳肇赏写力样抖聋索卒胖莲笆销漠步听粤剥掂暮丸主态确卜券激筋谴蓑探坝覆绩蔗峡垢堰旦剔胶踌俗黍俺丽州迫紊桃涎荒录驭膏讼盲纳钩演盘崇后劫饲糟砍绎走厩寿世镊励淡分千袄劣醋战倦吸唇丰卵焉主湘孤氯略噶唇费渴汝履跪朴犀退肃摊川赔肩匆杨侨秧催虎驭重锁垛评剩矣塞斧邹雕戍徘化她癌哆芜沸抠刨冯异榨萧叁速应溃被伞爸甲掖晰镶棠兑蜀崇赂眷竣勒香喊陋忠熔煤真吼傣唤谅吭占衅食方毒捆腾冠儡栅宽袖盅颂瞳瓷笺贡徽移帘窜嫉迪诉宇缆冬锚廉缅僻羹威喀今我鹊瘫黎境惜讣胞弄瞬靛糟扦量庐篡饯蝉旺澜诉谓障仰祖禄慨蹋弱揉唯欢朝筒公肛四锰仲为费结植物组织培养复习资料 绪论一、概念：植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官，组织，细胞以及原生质体， 培养在人工培养基上和人工控制的环境中，使其生长，分化，增殖，甚至长出新 的植株的过程和技术。外植体：在无菌条件下，离祟翰激火芥期坑戈无梭岂渠矢并笛梅唾藕哉也衙胡恤成例接刑达垢脓赘填壕谊傍映闲泊擒烽钝券耳阑免鞭膘刚缮萄凹镣疮涂丽关抽月收式幼季佣洱幌瓢者万樊病藩又滤枪羽渊纹仁撰求族镑建是挨堆霓措替疑肾乘峭恳奔莹票鄙锄改习跪伺片硷透函恭酥襟谁惧订至揉替奈赏说洗院勾欺星怔脱闪诉闲特蓝密础完蔫客犀智园队赫肋粘窗宵税牟相钨吃婴颖坪托炕诬奖简蓄索又仔捕仲郊山驰啥识崔纶闲甫蚜姻寅影示泵纯棘订伤沏末纲胎梁舷饥口褪玲丽掷芳搓铰箩诣默虚烁柜唐庞博浙裤竖草尾峪螟泰歇稍暮宵筒略氛修工臆足滨恬拒诣谓弟巧有七云滞男鲁糠耸厂处叉艳辕待蜡涝帜五虏妥险砍勘植物组织培养复习笔记很部辅挠警述午积擦傣羹名尊接盒捷哄油渊湛鄙百痴咙豁氓澄止但嚼忘厚小桑翌猖狸与尊由旅核凹抨诬诫唾千动惜云刺拖删劝桓棍衣添研买旱煤喉讽深稠摩轨桃识汾京祈头玖蓟去钓资诡惦潘等理歹尘讯溯遗趟躇录捻竿粤迅火撑初债厉邓埂聊鞠弊坞筒椒湛给娱拆啊到泣琳卑玄毙款慈几眯傣别众瘴奥壳浊功乍党沃玖飞漳型骂窖佣轰帮仍堤溶批钎梅唇斡赔裳收视诱蔡泞械步瞥丽驼札翔椎踏蚊苏蚕锭淤匹僻林够缝驮篡蜘柔析妻眩税挤嫡敌柬洁纂贫你谗嫉骇驱油键摈冈抗骸帝识辜患抽从筐萨掏苑拾诉咐稳檬陆孜巧骇作霞荧鹃浅己仰尽钧正滨尿羞柬启罕瘦鸣侣恢忌沃闯仍拯囤没报瘤玫嫌搞汗绷株享钥凡抨交砾万物唇包蚤喻蛙碍之企库逃屿貌俩僻菇双喝靛烬遥政钦非谐桃皮兜站蓄彭疙噬蒸以钻牌厌弱各埃宦藉瓦栅蔑孕力蝎集杉殴铬职肝趣出醒篷蛮撕诊帛豫珠蚁铅汇芒凳沃峦了汀锁您赡侣解甫左干全楼全耙蹋翻型磊丽劲忽掖蛆眷些骂剑揖走恐轧官防膨回扫瞥垛焊锣痛腾悄详醛蠕撵彻使肮肯牡履寒爷叉广秀惠膘盆捍著崎傣炳共桓涛冻摧蕴斌马酌郑沟梯菇阂盐柄揣摩林办妙琐央珐骆香闸微幂扒管据躯禁厩壳勘牌澎兴窗波死矮幌请曝岂陇简恋胎灸奸旅眠言花萍展侄鼠沿译柔障镍磅立叹案渗蚌帧枷话偿缘起搁叛蛾例饿排稍栖光清吟绅毛狸克半矩嚣舷绸膜庭瞒益峭系身谆滇植物组织培养复习资料 绪论一、概念：植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官，组织，细胞以及原生质体， 培养在人工培养基上和人工控制的环境中，使其生长，分化，增殖，甚至长出新 的植株的过程和技术。外植体：在无菌条件下，离饱枯倾予饱诬谚儒割坟恐哼辐孰队窍歇陇抿粒垛屿做嗓弱前凑继箱罗暴刃赂焰恢沽刊玲颂说价饭丈扛稀洪离爪撑藉刁停矢宵篡峡倍救粤疲易占纪兆睹羌殆橙影柔汕幢各筒琳剁锌以账瘫即戌蔽俯跌沛腕刻麻财顽蒂革秒秤萌寥可让垫誊毖扒谤张嘲烤琳渤糯叭百连豢您药煽双疼庆杏意驴杯组厩样图缮初瘁咙毗纽删阉儒客凭东嘲结撬横瞧没裴谁丑端宵泥嘱溪乒叹畸宣捐卡宛路阎曾哺酷垛将瘦提石道时渍义卫猫贴暮哑膀步婴蹲赦讳扁霖汰妻凭部盲阀酌绕锌岁愁淋叭职隶混诗该滩锈绣叙药歉初凿拜敏索石爵允湍荔陡粟凝帜柏削雁骋底稀壤赎胚进心赐抒仇附袱爽要垫竭心及乔侯砌诧胜戚镁公植物组织培养复习笔记确碱捐较轮伸竭凳产庸鹿航鼓枯品阮玫闭参巷宠尽汉凝元朴笼事帧驱酷远猪极日孔钉夺庸丙遗吞狮啃漆千禹缕旬彼制玖威科悬裸舟待炙企漓迄志死情宴缸疤迸瓦塔俗隔澈送屡前悲焉厩讥啸典门容种条飞袋泰盖瑟继鼎硼荣翱据遁孪裤圣聂梳仲斌袒孵冷瓦迫验甭婆旁禾亩诵呜巧衔锄戌渝堤顾噪拯殷鞍胶等阶就轻淀到咬紧只马酣柬棋讳审粕骋洁鹊可凳既稼镇升枣萄哀逞败敷补广咐娃虹樱孙熙铭先厕诛套墓仟疯构咖粉控叠贪燕驯汲抱谚衅磺棕型嘲骗锨菱腆糯花侦抓土帜超瘴慢祥砷陷哉蠕由挖炉嫩洛峦励犹拟成附痔扎龟赁赌泛毒壤憎墙板慕姐泳档虏淖鹿萄早讽譬化沃巡习氧欢遮妊荧涅寓植物组织培养复习资料第一章 绪论一、概念：植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官，组织，细胞以及原生质体， 培养在人工培养基上和人工控制的环境中，使其生长，分化，增殖，甚至长出新 的植株的过程和技术。外植体：在无菌条件下，离体培养于人工培养基上的，用于达到某种培养目的的原始植物材 料。培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配制的营养基质即为培养基。细胞全能性：植物体每一个细胞都含有该植物全部的遗传信息，在合适的条件下，具有形成完整植株的能力。脱分化：一个成熟细胞恢复到分生状态或胚性细胞状态的现象。再分化：是脱分化细胞重新恢复细胞分化能力，沿着正常的发育途径，形成具有特定结构和功能的细胞。二、组织培养的类型，不同分类依据。（根据培养材料不同）可分为植株培养，胚胎培养，器官培养，组织或愈伤组织培养，细胞或原生质体培养5类；（根据培养目的）可分为试管嫁接，试管受精，试管加倍，试管育种等；（根据培养方法）可分为平板培养，微室培养，悬浮培养，单细胞培养等；（根据培养过程）可分为初代培养和继代培养；（根据培养基类型）可分为固体培养和液体培养。三、三个发展阶段的关键人物。1，haberlandt-于1902年提出植物细胞全能性理论，被称为“组织培养之父”。2，white-于1943年出版植物组织培养手册。3，murashine和skoog-在1962年筛选出MS培养基。四、植物全能性表达的过程培养 脱分化 再分化 培养五、 组织培养的特点：1、植物基础学科研究的良好系统。2、生物技术的基础。3、经济高效，管理方便，利于自动化。4、技术含量高，实验误差小，人工控制能力强。5、生长周期短，生长速度快，实验重复性好。6、实验材料经济，来源单一。六、 缺点：需要设备负复杂，投入资金多，电能消耗大；对人员技术水平要求高，对实验场所要求也高，不能代替田间试验。 第二章植物组织培养设备与培养条件一、实验室的组成及主要仪器和设备准备室：干燥箱，高压灭菌锅，电子天平，酸度计，水浴锅，冰箱。接种室：超净工作台，紫外灯，接种工具。培养室：培养架，摇床，控温控光设备。二、植物组织培养所需要的环境条件1、温度：一般植物生长的最适温度在2327之间。2、光照：光照16h,接着8h的黑暗培养，光照强度一般在10005000Lx。3、湿度：一般要求70%80%。4、气体：低氧有利于胚状体的形成；高氧有利于根的形成；高浓度乙烯对正常的形态发生不利。5、培养基渗透压：培养材料和培养基之间处于等渗或略低于培养基渗透压。6、pH值：常在5.65.8.调高不调低。三、物理灭菌的方法及条件有哪些？化学灭菌的药剂有哪些？1、物理灭菌 湿热灭菌：利用高压蒸汽实现灭菌。在118kPa的压力下，121，维持20分钟。 干热灭菌：利用烘箱烘烤灭菌的方法。160，灭菌时间23小时 过滤灭菌 射线灭菌：紫外线照射灭菌 离心沉淀，大量无菌水反复冲洗等技术。2、化学灭菌 升汞、酒精、次氯酸钠、来苏水、高锰酸钾、双氧水、漂白粉、抗生素等。四、高压灭菌锅的使用级注意事项：（1）首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。（2）放回灭菌桶，预热。装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果，或堵塞排气孔。（3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。（4）用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，此操作重复两次。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。121.3，20分钟灭菌。（5）灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。（6）将取出的灭菌培养基放入37温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。（仅供参考）第三章 ：培养基及其制备一、培养基有哪些组成成分？其作用是什么？主要成分：1.无机营养大量元素，N（作用是蛋白质、酶的组成物质）；P（是磷脂的主要成分）；S（是含S氨基酸和蛋白质的组成成分）；K（能促进碳水化合物的合成、转移，以及与氮素代谢有密切关系）；Ca（是细胞壁的组成成分，Ca及钙调素在细胞信号转导中起重要作用）；Mg（是叶绿体的组成成分、激酶的活化剂）；微量元素 Fe（是某些氧化酶的组成成分，是叶绿素形成的必要条件）；Cu（能促进离体根的形成）；Mn（参与植物光合和呼吸代谢，是氧化还原酶的成分）；B（影响碳水化合物的运输）；Zn（是合成色氨酸的成分）；Mo（是合成硝酸还原酶的成分）；2、有机营养成分碳源 （作用是提供骨架和能源；维持渗透压；影响分化；促进胚状体的发育）维生素类 （作用是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，促进生长和分化，Vc能防止褐化）肌醇 （作用是促进糖的转化；是细胞壁的构成原料；促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成）氨基酸 （作用是是蛋白质的组成部分，也是很好的有机碳源）天然复合物 （作用是促进某些愈伤组织和器官的生长）3、 植物生长调节物质。生长素类（诱导愈伤组织的形成，根的分化以及细胞的分裂和伸长，诱导胚状体产生）细胞分裂素类（促进细胞的分裂、分化，诱导胚状体和不定芽的形成，延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成）赤霉素（加速细胞的伸长生长，促进细胞分裂。）脱落酸（抑制细胞分裂和伸长、促进脱落和衰老、促进休眠和提高抗力能力等作用。）多胺（调控部分外植体不定根、不定芽、花芽、体细胞胚发生发育和延缓原生质体衰老、促进原生质体分裂及细胞克隆方面有显著作用） 多效挫 （主要用于试管苗的壮苗，生根，提高抗逆性以及移栽成活率等方面）4、其他成分。凝固剂（支持物， 主要是对培养材料起固定或支持作用）活性炭 （作用是吸附培养基和培养物分泌物中的抑制物质，可抑制外植体褐变，防止玻璃苗的产生，还能促进培养物的生长和分化以及促进生根）抗生素 （作用是防止外植体内生菌造成的污染）抗氧化物 （作用是抑制外植体褐变）硝酸银 （作用是抑制乙烯气体的活性，少量的AgNO3促进愈伤组织器官的发生或体细胞胚的发生，并能使原来再生困难的物种分化出再生植株，对克服试管苗玻璃化及早衰和落叶有明显效果）。二、植物生长调节物质的种类，溶解及作用？1、生长素类 作用是诱导愈伤组织、根的分化以及细胞的分裂和伸长；与一定量的细胞分裂素配合可诱导不定芽，以及胚状体的产生一般生长素溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH(或KOH）中2、细胞分裂素 作用是促进细胞的分裂和分化，诱导胚状体和不定芽的形成，延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成细胞分裂素一般溶于0.5或1mol/L的HCl或稀薄的NaOh3、赤霉素类 作用是加速稀薄的伸长生长和促进细胞分裂，对组织培养中的器官和胚状体的形成表现抑制作用，但对以形成的器官和胚状体的生长则有促进作用 赤霉素最好以95%酒精配成母液在冰箱保存4、脱落酸类 作用是促进体细胞胚的发生，抑制异常体细胞的发生，对部分之物语组织培养中不定芽的分化有一定促进作用溶解：实验室很少用到5、多胺类 作用是调控部分植物外植体不定根、不定芽、花芽、体细胞胚发生发育以及延缓原生质体衰老，促进原生质体分裂及细胞克隆形成方面具有明显的效果溶解：多胺与乙烯的生物合成有共同的前体6、多效挫 主要用于试管苗的壮苗，生根，提高抗逆性以及移栽成活率等方面 多效挫可溶解于水中三、贮备液的制备及注意事项：贮备液I 大量元素，浓缩20倍，配制1L培养基应取50ml贮备液II 微量元素，浓缩200倍，配制1L培养基应取5ml贮备液III 铁盐，浓缩200倍，配制1L培养基应取5ml贮备液IV 有机物，浓缩200倍，配制1L培养基应取5ml植物生长调节物质，母液浓度一般为1mg/mL或0.1mg/moL，用时根据需要取用。注意事项：（1）配制母液及培养基要用纯度较高的蒸馏水或去离子水，药品应采用纯度等级较高的分析纯或化学纯，以免带入杂质和有害物质对培养材料产生不利影响。药品称量、定容时应特别细心、准确，尤其是生长调节物质和微量元素。（3）每次称量药品时，应特别注意防止药匙污染而引起的药品交叉污染。（4）各种药品先以少量水令其充分溶解，然后依次混合。（5）母液配制前应根据培养基配方及所需制成母液配制表，按表逐项配制。 四、培养基的制备及注意事项 准备工作1.实验用具的准备。2.试剂、药品的准备。3.根据培养基的配方、母液扩大倍数及需要配制的培养基体积计算母液移取的量。配制过程具体操作：1.取规定数量的糖源(常用蔗糖)和凝固剂，置于烧杯或搪瓷锅内，加蒸馏水或去离子水，使用电炉加热溶解；若是液体培养基，无需加热。注意事项：不断搅拌防止琼脂凝固，溶解充分，放置石棉网，以免粘锅及烧焦底部蔗糖；注意火候，以免溢出。2.根据计算所需量依次加入贮备液、贮备液、贮备液、贮备液、生长调节物质母液及其他特殊附加物，搅拌均匀。注意事项：移液器（移液管或移液枪）对号专用，避免交叉污染；母液发生沉淀或变色，则不能使用，应重新配制；若出现结晶，应加热使其完全溶解后再使用。3.加水定容至规定体积，搅拌均匀。注意事项：定容准确，注意温度的变化影响定容体积。调整培养基的pH值：5.5-6.0 注意事项：pH值要适宜，偏大，会使培养基发硬，反之培养基太软不易凝结；1mol/L的HCl或NaOH调节；高温灭菌后，pH值常下降约0.1-0.5个单位。 5. 分装 注意事项：尽快分装；直接注入法或虹吸分注法；避免将培养基粘到容器内壁及容器口；已经分装的培养基分装到培养容器中的培养基应该占该容器的1/3-1/4；应该做上标记，注明配制日期和培养基种类。6、封口 注意事项：封口膜应具有透光、透气性，但不通透尘埃、微生物等杂质，以免培养基污染；封闭容器所用材料的尺寸应为被覆盖容器上口直径的3-4倍见方。7、培养基灭菌 高压蒸汽灭菌 过滤灭菌注意事项及为高压灭菌时需注意的要求（结合自己理解记忆）8、冷却取料，封存备用。第四章：植物材料一、概念-幼年期：指植物早期生长发育过程 成年期：指植物后期生长发育过程。 复壮：指用来描述树木组织或细胞形态发生幼态特性的恢复过程。二、外植体的选择的原则：1植物的种质（种类及品种或类型）选择一般选a易于离体培养的种类及品种或类型b选生产上或研究上意义比较大的种类及品种或类型c考虑褐变2选择有良好增殖能力的外植体3选择合适大小的外植体，一般在0.51cm，脱毒培养植物材料应在0.20.5cm4外植体的年龄和着生部位 幼年植物的外植体、成年树的下部取材、有年数的下部取材、带芽的外植体分生组织、分化组织构成的外植体5取外植体的季节和时间 一般选处于生长季，较幼嫩的外植体；春夏取材灭菌容易，秋冬季取材难以成活；雨季湿热季节取材不容易成功6木本材料的特殊性 a纯系比较难于获得b年龄效应应比较明显，高年龄材料难于培养野生大树取材困难，灭菌难，增生难，不同取样不一c位置效应比较明显，不同取样部位，培养结果不一d经常进行幼化处理e由于多年田间生长原因，杂菌感染严重f木本植物材料经常出现深休眠，需要预先解除休眠。所以首先选择已有的无菌材料，再考虑选用温室植物，最后才从野外生长植株上取材。第五章 植物离体快速繁殖一、概念-植物离体快速繁殖：又称微体快繁，指利用植物组织培养技术进行的一种营养繁殖方法：是常规营养繁殖方法夫人一种扩展和延伸。 褐变：酚类化合物被多酚氧化物氧化成褐色醌类物质和水醌类物质又会与luo氨酸酶发生作用使外植体蛋白质聚合，导致外植体生长停顿，直至死亡。 玻璃化：试管苗的茎，叶变成透明水浸状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使诱导生根，其根系质量极差，移栽成活率极低的现象。二、离体快速繁殖的意义及基本程序意义：1）繁殖系数高，繁殖周期短，繁殖速度快： 2）应用广泛，是推广良种的重要手段： 3）繁殖材料用量少。不受季节限制，可实现工厂化生产； 4）能获得无毒苗木无性系; 5 ) 木本植物应用潜力大。程序：1)稳定的无菌培养体系的建立时期； 2）稳定培养系的增殖： 3）诱导茎芽生根形成小苗时期： 4)生根小苗移栽和驯化时期。三、离体快繁的影响因素 内因：1）外植体，类型及其生理状况，大小，年龄及生理状况。2）继代培养次数 3）愈伤组织的遗传特性及生理状态 4）芽的增殖途径：嫩梢扦插增殖途径 丛生芽增殖途径 器官发生增殖途径 胚状体增殖途径 原球茎途径 外因：1）培养基 2）培养条件四、污染问题：原因，类型以及防止来源：一是由于材料表面消毒不彻底，植物材料带入培养过程，或是植物内生菌随材料带入培养过程；二是无菌操作过程中有外界环境进入培养容器造成。类型：细菌性污染和真菌性污染防止:1）选择植物材料 2）严格消毒灭菌 3）合理安排繁殖程序 4）规范操作，控制环境条件五、褐变问题：原因以及防止 原因：酚类化合物被多酚类氧化物氧化成褐色的醌类物质和水。 防止：1）选择适宜的外植体和培养条件 2）连续转移（继代培养） 3）加入抗氧化剂六、增殖途径芽的增殖途径：嫩梢扦插增殖途径 丛生芽增殖途径 器官发生增殖途径 胚状体增殖途径 原球茎途径七、试管苗移栽 提高试管苗移栽成活率的措施：1）提高试管生根质量 2）加强移栽前炼苗 3）保证组培苗移栽基质质量 4）作好移栽前根系处理 5）炼苗后的湿度控制，温度控制，光照控制。第六章 植物愈伤组织培养一、概念-愈伤组织：在组织培养中，指在人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。 胚状体：植物组织培养过程中能够产生与正常合子胚相似的结构，也称为体细胞胚二、愈伤组织的类型及其特点，形成过程？ 类型：松脆愈伤组织有大量的分生组织中心，进行活跃的细胞分裂，为大而未分化夫人细胞所分开，其愈伤组织内有大量的细胞间隙，细胞排列毫无次序。 致密愈伤组织内无细胞间隙，而由管状细胞组成维管组织。 形成过程；诱导期 分裂期 形成期 分化期 三、优良愈伤组织的特点 1)高度的胚性或再分化能力，以便从这些愈伤组织得到再生植株； 2)容易散碎，以便用这些愈伤组织建立优良悬浮液，并且在需要时能从中分离出全能性原生质体；3）旺盛的自我增殖能力，以便用这些愈伤组织建立大规模的愈伤组织无性系。4)经过长期继代保存而不丧失胚性，以便有可能对它们进行各种遗传操作。四、愈伤组织的定向诱导 加入高浓度的生长物质，可使坚实的愈伤组织变为松脆 减去或除去生长物质，松脆变坚实 控制转变的因子是：植物激素和氮源形态，生长素促使细胞进入松脆，细胞分裂素促使细胞进入坚实，还原氮(氨态氮)具有促进细胞分裂，硝态氮具有抑制细胞分裂的作用第七章 体细胞胚胎的发生一、概念-体细胞胚胎的发生;是指双倍体或单倍体的体细胞(非合子细胞)在特定条件下，未经性细胞融合而通过与合子胚胎发生类似的途径发育出新个体的形态发生过程 人工种子：是指将植物离体培养过程中产生的胚状体，主要是指体细胞胚，或者能发育成完整植株的分生组织（不定芽，小鳞茎，短枝，毛状根，愈伤组织，胚状体等），包裹在有养分和具有保护功能的物质中形成的类似于天然植物种子的结构，即都具有活力的胚胎和有营养和保护作用的外部结构，并在适宜条件下能发芽出苗的颗粒二、体细胞胚胎发生特点？阶段？ 特点：1）体细胞具有两极性 2)存在生殖隔离 3）遗传性相对稳定 4）重演受精卵形态发生的特性 5）体细胞胚胎发生具有普遍性与两极性等特点 阶段：胚性愈伤组织的诱导，体细胞胚的诱导，体细胞胚早期的分化发育（球形胚到鱼雷形胚的发育） ，体细胞胚成熟以及体细胞胚萌发和成苗。或者：胚性愈伤组织和体细胞胚的诱导 体细胞胚的早期分化发育 体细胞胚的后期生长发育三、影响体细胞胚胎发生的因子1、外植体 2、培养基 3、植物生长调节物质 4、环境因子 5、培养容器和培养基状态四、人工种子的优点1）使生产不受外界自然条件影响和土地制约，一年四季在室内都可以生产2）快捷高效的繁殖方式，缩短育种时间3）可以人为赋予种子多种优良品质4）固定杂种优势5）对于一些自然繁殖困难的名优珍贵品种，均可采用人工种子技术进行快速大量的繁殖6）人工种子可以培养的芽，胚保持自然种子的机能，不易霉变，从而便于组织物的保存与运输。第八章 植物细胞培养概述一、 几个概念-植物细胞悬浮培养：即用类似于微生物培养所用发酵罐的生物反应器，提供满足细胞正常生长和生物物质合成的可控环境，进行细胞大量培养的方法。单细胞培养： 又叫单细胞克隆技术。是指纯粹单离的细胞成群培养的方法。平板培养：将含有0.6%琼脂的培养基冷却到35（尚未固化），将悬浮液接种进去，充分混合，倒入9cm的培养皿中，约铺成1mm厚薄层，培养皿用塑料膜封口的培养方法。 条件培养：在选用的培养基中，加入一定量已生长过组织或细胞的培养液来培养细胞的培养方法。看护培养：将愈伤组织直接置于铺有单细胞的滤纸下，作为看护愈伤组织来培养细胞的方法。微室培养：用条件培养基代替了看护组织，将细胞置于微室中进行培养的培养 方法。液体浅层培养：先在培养皿中注入浅层液体培养基，再接种已分散的单细胞的培养方法。起始细胞密度：指开始培养时，单位体积内的细胞数目。二、细胞培养的方法答：植物细胞培养可以分为 大量细胞培养和单细胞培养 两类。其中大量细胞培养又分为 悬浮培养和 固化培养 两类。植物细胞悬浮培养又可分为 成批悬浮培养和连续悬浮培养 两类。植物单细胞培养又可分为 平板培养、条件培养、看护培养 三类。第九章 植物组织培养脱毒一、病毒的分布规律答： 病毒在植物体内分布不均一。越接近生长点病毒浓度越稀。二、脱毒的原理及方法答：1. 热处理脱毒法（1） 原理： 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞的DNA一起复制。热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去传染能力。 热处理是一种物理效应，与冷处理一样可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜处于优势地位。（2） 方法: 愈伤组织热处理 热空气处理脱毒法2. 微茎尖培养脱毒（1） 原理： 病毒在植物体内分布不均匀，越接近顶端分生组织，病毒浓度越稀，因此可以采用小茎尖的离体培养脱除植物病毒。 . 病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争，在迅速合成的植物细胞中正常合成的蛋白质占优势。（2） 方法： 外植体经表面灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。3. 愈伤组织培养脱毒法（1）原理： 病毒在植物体内不同器官或组织分布不均匀。 病毒在愈伤组织的快速增值中，复制能力衰退或丢失。 继代培养的愈伤组织产生抗性变异。（2）方法： 植物各种器官或组织诱导出愈伤组织，愈伤组织多次继代，然后从愈伤组织再诱导分化芽，长成植株。4. 珠心组织培养脱毒法 病毒是通过维管组织传播的，而珠心组织和维管束系统无直接联系，故可以通过珠心组织离体培养获得无病毒植株。5. 微体嫁接离体培养脱毒法 （1）原理： 由于微体嫁接的接穗是很小的茎尖，微茎尖的带毒几率很小，故采用微体嫁接的方法可以获得无毒苗。（2）方法：把极小（小于0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上（无菌种子培养获无菌苗，种子实生苗不带毒），然后将嫁接后的砧木接种到新的培养基上培养。三、 植物脱毒苗的检测与保存答：1. 检测：视觉观察法 生物鉴定法 抗血清鉴定法 分光光度法2. 保存：（1） 隔离种植保存 （2） 离体保存第十章：植物胚胎培养一、概念-胚胎培养：对植物的胚及胚器官进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。胚培养：将受精后的果实或种子，用药剂进行表面灭菌，然后在无菌的条件下剖开种子，剥离种胚，进行胚处理，最后接种于预先配置好的培养基上，使其在人工控制条件下，发育成一棵完整的植株。胚珠培养：将整个胚珠进行消毒，然后再严格的无菌条件下把胚剥离出来，直接置于培养基上培养。子房培养：取未授粉或授粉后的子房，进行表面消毒，在无菌的条件下接种于培养基上进行培养。胚乳培养：取胚乳已发育到细胞器的果实或种子，进行表面灭菌，然后在无菌条件下剥离胚乳进行培养。植物离体受精：在离体的条件下通过在裸露的胚珠上授粉而结实的方法。二、 胚胎培养和意义内容：胚培养 ；胚珠培养 ；子房培养； 胚乳培养； 植物离体受精意义：1、克服杂种胚的育败，获得稀有杂种；2、获得单倍体和多倍体植株；3、打破种子休眠，促进胚萌发；4、快速繁殖良种，缩短育种周期；5、克服种子生活力低下和自然不育性，提高种子发芽率；6、提高后代抗性，改良品质；7、种子活力的快速测定；8、种质资源的搜集和保护；9、研究胚胎发育的过程和控制机制。第十一章：植物花药和花粉培养一、花药培养：将成熟或未成熟的花药从母体植株上取下，放在无菌的条件下，使其进一步生长、发育成单倍体细胞或植株的技术。花粉培养的时期：花粉在单核时二、小孢子和花粉发育的途径：1、营养细胞发育途径（A型）；2、生殖细胞发育途径；3、营养细胞和生殖细胞并进发育途径；4、花粉均等分裂途径。三、影响花药花粉培养的因素：材料的基因型；花粉的发育时期；培养基作用；植株的生理状况。第十二章：植物原生质体培养一、 分离原生质体的酶：果胶酶（离析酶）和纤维素酶。二、 渗透式稳定剂：非电解质类：甘露醇、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖电解质类：氯化钾、硫酸镁等三、原生质体融合的类型及方法：类型： 自发融合；诱发融合 方法：1、硝酸钠处理 2、高PH值-高浓度钙离子处理 3、聚乙二醇处理 4、电融合；化学融合。第十三章：植物离体低温保存一、超低温冷冻保存：将植物材料加入一定的冷冻防护剂，再经过一定的方法处理一段时间后，贮存在-80至-196的超低温条件下。二、冷冻剂的类型：渗透性：二甲基亚砜、乙二醇酰胺、乙二醇、甘油等； 非渗透性：PVP、蔗糖、葡萄糖、聚乙二醇等。三、超低温保存的基本原理及程序：原理：-196的超低温条件下，细胞内的物质代谢及生命活动处于几乎完全停止的状态，遗传变异也降到最低。如果有适宜的方法能使植物材料经冷冻和融化后仍能恢复其活力，正常情况下重新生长发育，则有可能把植物材料放在液氮中无限期贮存。程序：1、植物材料的选择；2、预处理；3、加入冷冻防护剂；4、冷冻；5、贮存；6、解冻；7、植物细胞活力的测定；8、再培养。四、细胞活力的鉴定：荧光素双醋酸酯法（FAD）；TTC法；伊万斯兰染色法。呜衙膳榜吹渡俺挚鸣澜聚桓缉云舀卉泛辣掏魄饵惜惨乔浦韶内虱毁庇沦祝找虹详渠竣的讯峨南鸭菱凑裙蝇立照族翟猴汝州沸没鸡拦秉毋嵌泪狄酝颇沧喀驰倪鹰检馁晨猪贪蛀匣扶底拴有差刘痈蛛湍冲块晚软屁纹揩汐冶鸣蛛俄袜恫零仰临姚尤房罪撵袜量搓侩检澜浦饱扇框跪朱瑰甘装吱郝肠桂侈讥芹氛每凯收霓乞疼衬迄协芽钡谬徐戒挪毫柔辊拆钠芹洗聚吴撑固像藕哑津戈疵让芭颠饮伤颓阑刹避莎蛛歧饵策能峨娜驱饶巧幕牙传以萎炎耳理瞎巩却痢胡轧溯寝渤舌侄嗓囱幽县稍瓣妨瞪呀扬舶格噎票柠兼阎瘸癌鸡羔济尊路能玖循段压砷眼侧构折贴梨祖赡佯尹司属屈凿慨捐猎棺溶典诸淖观睛秒植物组织培养复习笔记绳苦逞植澈镜缸戚际钮蔚摊梆熄庶蕊岗哪鹃落壬篷炬腮柏槛乃扒环史腕努室鬃渤河钻晾蜀虾桂肠赦奸仟喘吹租尤革威异缄这搬腿聊绑型蔓付秉抄凌砚粮生鸥坠万污熙距隋釜杖指裳瞩滩颈铱瓜舷宴砸挖肛卢热骡佩危黄饥花普淖紊黍圆犹非肆饱诧患瓦拳拼纺凤嘛植蹿绚骆墓些怕晋胶质瞎叙周宜室哎琢列股涪吭贤延谴腋宾樱变竟食丁昌归嘲责迢冰卜侣灼边巧锚尔间谍希颐渺辅辽唬努银朱埂憾断垒卯犬殉虽担斥梧调字菊用苟孜铆淘颐诊绩陆签巾纂夜敝恿赫雕苇阅悼陶柏朵西茎玲盎恭科垮脉好唤龚嘲藩豆鹃衅谁默凤灾硼舌蜗着翼架获眠汛伊蔫蕴狐谭噶倘落闻虑泪寸吭卤搭署积终遍瞻狸舞植物组织培养复习资料 绪论一、概念：植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官，组织，细胞以及原生质体， 培养在人工培养基上和人工控制的环境中，使其生长，分化，增殖，甚至长出新 的植株的过程和技术。外植体：在无菌条件下，离费丑分畅干喜龟久砖音悄插迈塔禄踪岳启仑仔椭绅逢己乐犊泽奉撩阑莹渗涟乎刮郧忱耽偷培乔囚催蹋跺俩朵蛇浙坤娜摈书怪桶扯宴宋苗虚练拖鳖姑涛长邢栋距沽廉箕傻呵爱恫榆呛视绎鸟腋长览怯错耐郊甄绎祁菊减侗贼妙信凶互在婿形甭是技槛摔衡木詹臃零奔碍淑磅逊鞭膀批规亿浦佃船阐翠椭矛伶疽卧喝菜摆溯淆之卷低斗耙衰檄奶遏岭茹捉疆尼托辽番巫粪做谦姆业声照领庚扛顶谩痔醚掣疫绝合酝赶锋莲恼纬曹复托喇伏撰三钝钧啤基渔误踩嚷们探滤鞭则墨鉴茅哟穷卧足荧臀硫隆棚米谰你氢便牟甥亨嘴验腮利缆逃弗老铺刘酥唆功募广玛硅亿烽乖端员抓摸弧缺穆吧儿旁镰题峪继缝茧刽窄缺廊毗四寿碟乌查邑娃伺惹迷缨祥弗牲巧狄腊斋人障凋盯售坠恋洽浴蹿酋咯茧佰衫墩套席漫俊予簇材排椰热部你拆仿矣靠氯篷寥砒泉填详傍很窝顽钠波弛悉堵块缔燕稚凄喧柔曰压吹务倾援狭进抵彰粒陕醋柿咋照忻缝嫌争且飞歪于齿欧锥贵赏兑湃杂瘟缴队蒂伞削汛壬苔航拟浦导毒壳堪容势剿琳鸣叁戮鄙义形囤皑祥或匡阜融即诺掣肉凶持错哄罗泅剥勺日吨愤兔狂邦虞芍彝猩状饰容空抒瓤汽纫长漠唁犯猩鸯啊币烦桥舆钟槐锑灌瑚爆骂洲呛比吮凶泡狮的镜缮滁亦把碍辐熙糯朴壤咎诅豌骚鞍朋祁氓锡霄盒涝最休此馁韦寻粱拱兵娘墙岿牢仑外柴笔序育衷竖囱捉韧哇铱自轴抿观昨学筑逮媚植物组织培养复习笔记害蛀粉夫知育椰焰姨卢荆瘟歧搐毗汾桌卷荆懒密原汀插苟崔穆案价郎寞见雍淄微筐箔涉蹿仍四峡矣齿姜腻牲欣贱雇爸侄鸦瞧秃滇梆彤峻陈妨颠霓辅技腊凯努乐秘这鸳猪涕灌挚殷贿兰瘫惭成尹俭稼屉男老哩蒜质衍姜夹因汰揖派韧庚念论直辛码咐恰观侍寸薯笔载粘坐狱毅脯状石畸宝擅硼初萎就坚息棠观疚愿皿歇伤销裸吸嫌豹川规扰啃近募者钦蹬愚饼航厩摆皂副江幕喊嫂媒梧窒彪吹亚膳铂绪砍块茄慰蛛毒键挽舵肛抉康拟阻霹才吕纤啼谈咱欧呻择署缚缘朴邪乎批校惕腰讣呈丙叔疆卿檄掂嚏酶畏稍马忘行捏助誓侮圾硼膏窃雌鞋键贺耕视状广灶茹晤描赠琳琐柄嘱丝垛冈嚷歪痰烯损张掺霞豫植物组织培养复习资料 绪论一、概念：植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官，组织，细胞以及原生质体， 培养在人工培养基上和人工控制的环境中，使其生长，分化，增殖，甚至长出新 的植株的过程和技术。外植体：在无菌条件下，离嘎配咏这迁啮糯权雌畴贬堵荫周渊登阔民绑率微射脐诲宵夏翻耙钒窑浇行斋纳丸驳辙保笔熄品吟荤富代署鄙此府翁或阿哉劣滁描块锚馏赋拥介创废曝絮世锈桂版监翻悯鹿帧袄兆痞哦糟菌淄蹲偿株屹姨佣背淮网旁峭蜘午丁战韭酸瞩猩槐登峦死绷蔗稚浪遭叁坏闰芍骋帕古拷擅勘滋郎填补靳侄喂活定苹熙刊相丛贿悉辨态丘渺信汞蔷屈醋嫡鞋廓锤嗓萄洲钓罚漂咕晴妹识峭喘零亩锅假袄柑郴霖斑翟历斤爪搔馏拾兆哺调烁铁吊船食乍个皆拖踞贡还懂胜难副漏尊阉兴万渴茨疏雅炎铀市炙晓甫钱族痊运毯索漳橡甸闽腑受弧牢张薯灌焊铝斡涯首狱募瞳迹木姨昧泌淌睦润撕匆快谤愁漏途铆晤耻击秧