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基因工程复习题
第二章习题
一、 单选题
1. 在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指( B )
A ． I 类限制酶 B. II 类限制酶 C. III 类限制酶 D. 核酸内切酶
E. RNAase
2. 下列关于同裂酶的叙述错误的是 ( B )
A. 是从不同菌种分离到的不同的酶 , 也称异源同工酶。
B. 它们的识别序列完全相同。
C. 它们的切割方式能够相同, 也能够不同。
D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样, 但切割位点间的序列一样。
E. 两种同裂酶的切割产物连接后, 可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。
3. 多数限制酶消化 DNA 的最佳温度是( A )
A. 37 ℃ B.30 ℃ C.25 ℃ D.16 ℃ E.33 ℃
4. 下列关于限制酶的叙述错误的是 ( B )
A. I 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 和 S- 腺苷蛋氨酸。
B. II 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 。
C. III 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP S- 腺苷蛋氨酸能促进反应, 但不是绝对需要。
D. I 、 III 类限制酶对 DNA 有切割和甲基化活性, II 类限制酶对 DNA 只有切割活性而无甲基化活性。
E. II 类限制酶要求严格的识别序列和切割点, 具有高度精确性。
5. 如果一个限制酶识别长度为 6bp , 则其在 DNA 上识别 6bp 的切割概率为 ( D )
A. 1/44 B. 1/66 C. 1/64 D.1/46 E. 1/106
6. 多数 II 类限制酶反应最适 PH 是 ( C )
A. PH:2-4 B. PH:4-6 C. PH:6-8 D. PH:8-10 E. PH:4-10
7. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D )
A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、 腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后, 可能会阻碍限制酶的酶解活性。
B. 许多限制酶对线性 DNA 和超螺旋 DNA 底物的切割活性是有明显差异的。
C. 有些限制酶对同一 DNA 底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液, 是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
E. BSA 对许多限制酶的切割活性都有促进作用, 因此酶切反应中常加入一定量的 BSA 。
8. II 类限制酶反应中必须的阳离子是( C )
A. Na + B. Ca2+ C. Mg2+ D. Zn2+ E. Mn2+
9. RFLP 形成的原因是 ( A )
A. 由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。
B. 使用不同的限制性内切酶进行切割。
C. 杂交时使用不同的探针。
D. 每种染色体存在两条。
E. 提取不同的染色体 DNA 酶切。
10. 下列关于限制酶命名的表示方法, 正确的是( E )
A. Sau.3A I B. B.amH I C. pst I D. Ecor I E. Hind III
11. 需进行 DNA 部分酶切时, 控制下列哪种条件最合适( D )
A. 反应时间 B. 反应体积 C. PH D. 限制酶量 E. 反应温度
12. 下列酶在反应中不需要 ATP 的是 ( D )
A. E coK B. T4DNA 连接酶 C. BamH I D. EcoB E. DNA pol I
13. 限制性内切酶可特异性识别 ( B )
A. 双链 DNA 的特定碱基对 B. 双链 DNA 的特定碱基序列
C. 单链 RNA 的特定碱基序列 D. 单链 DNA 的特定碱基序列
E 双链 RNA 的特定碱基对
14. 下列与 RFLP 相关的一条是 ( D )
A. 不同限制酶在单个染色体 DNA 上的限制性图谱。
B. 两种物种个体间的限制性图谱。
C. 同一个体等位基因的限制性图谱。
D. 同一物种不同个体的限制性图谱。
E. 非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。
15 ． 限制酶的星号活性是指在非正常条件下, 限制酶( A )
A. 识别和切割序列发生变化。 B. 切割活性大大提高。 C. 识别和切割序列与原来完全不同。 D. 能够任意切割 DNA 。 E. 只能部分切割 DNA 。

二、 多选题
1. 下列因素中影响限制酶切割的有 ( A,B,C,D,E)
A. EDTA 浓度 B. 甘油浓度 C. DNA 纯度 D. 酶的自身活性 E. 盐浓度
2. 限制酶反应中出现星活性的可能原因是( A B D E )
A ．酶浓度太高 B 低盐 C 盐浓度过高 D 高 PH E 甘油浓度 >5% ( V/V )
3 ． 限制酶切割后的 DNA 电泳得到的电泳条带有些扩散, 可能原因是( B , C , D , E )
A ．酶失活 B 有蛋白质与 DNA 结合 C 酶切条件不合适
D 有外切核酸酶污染 E 星号活性
4 ． 下列有关回文序列的描述正确的是( A , B , C )
A ． 是 II 类限制酶的识别序列 B 是某些蛋白的识别序列 C 是基因的旁侧序列 D 是高度重复序列 E 是卫星序列
5 ． 下列有关回文序列的一般特征正确的是( B , C , D , E )
A ． 可增强基因表示 B 有对称轴 C 是自我互补的序列
D ． 两条链从 5 ‘ 3 ‘方向的序列一致 E 是 II 类限制酶的识别序列
6 ． 关于 II 类限制酶说法正确的是( B , D )
A ． 具内切核酸酶和甲基化酶活性
B ． 仅有内切核酸酶活性

C ． 只识别非甲基化的 DNA 序列
D ． II 类限制酶反应条件只需要 Mg2+
E ． II 类限制酶反应需要 Mg2+,ATP
7 ．经过限制性片段分析, 可对等位基因进行精确比较是因为( B , C )
A ． 限制酶只切割两个变异等位基因中的一个
B ． 限制酶位点可作为遗传标记
C ． 它不依赖变异的等位基因的产物的功能
D ． 不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异
E ． 同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同
8. 下列关于 II 类限制酶的叙述正确的是( B , C , D , E )
A ． 它既有内切酶的活性, 也有外切酶活性
B ． 在特异位点对 DNA 进行切割
C ． 同一限制酶切割双链 DNA 时产生相同的末端序列
D ． 有些限制酶切割双链 DNA 产生粘末端
E ． 有些限制酶切割双链 DNA 产生平末端
9 ． 限制酶反应结果若显示没有切割, 可能原因是( A , B , C , D , E )
A ． 限制酶无活性 B 存在抑制剂如 SDS , EDTA C DNA 不纯
D ． 缓冲液组成不合适 E DNA 甲基化
10 ．下列关于限制酶的叙述正确的是( B , C , D )
A ． 在限制与修饰系统中, 修饰主要是甲基化作用, 一旦位点被甲基化了, 其它限制酶就不能切割了。
B ． 限制酶在 DNA 中的识别 / 切割位点的二、 三级结构影响酶切效率。
C ． 如果限制酶的识别位点位于 DNA 分子末端, 那么接近末端的程度也影响切割。
D ． 已知某限制酶在一环状 DNA 上有 3 个切点, 因此该酶切割这一环状 DNA , 可得到 3 个片段。
E ． 能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌, 其自身的基因组中没有该酶识别的序列。
11 ．酶在储存过程中迅速失活, 可能原因是( A , B , C , E )
A ． 储存温度不合适 B 稀释后储存 C 储存缓冲液不合适
D ． 分装后储存 E 储存缓冲液中蛋白浓度低
12 ．限制酶切反应结果显示为部分切割, 可能原因是( A , B , C , D , E )
A ． 限制酶失活 B 有抑制剂如 SDS , EDTA 等存在 C 反应条件不合适
D DNA 不纯 E DNA 结构( 线形或超螺旋) 的影响
13 ．如果用限制酶切割 DNA 后得到的片段比预期的多, 可能原因是( B , C , E )
A ． 限制酶失活 B 限制酶的星号活性 C 有其它限制酶污染
D 有抑制剂存在 E 测试 DNA 中有其它 DNA 污染
14 ．限制酶切割后的产物连接反应效果差, 可能原因是( A , B , C , E )
A ．限制酶去除不完全 B 平端连接 C 核酸外切酶污染
D ．连接反应温度低于 16 ℃
E ．从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其它盐类
15 ．下列限制酶属同裂酶的是( A , B , D , E )
A ． BamHI G ↓ GATCC Sau3AI ↓ GATC
CCTAG ↑ G CTAG ↑
B ． Sal I G ↓ TCGAC Xho I C ↓ TCGAG
CAGCT ↓ G GAGCT ↓ C
C ． BamH I G ↓ GATCC EcoR I G ↓ AATTC
CCTAG ↓ G CTTAA ↓ G
D. Hpa II G ↓ CGC Msp I C ↓ CGG
CGC ↓ G GGC ↓ C
E. Xba I T ↓ CTAGA Nhe I G ↓ CTAGC
AGATC ↓ T CGATC ↓ G

三．填空题

1 ．限制酶是一类专门切割 DNA 的酶, 它能特异性识别切割 双 链( 单、 双) DNA 。
2 ． II 型限制酶识别位点一般长度为 4~6 个核苷酸对。
3 ．个体之间 DNA 限制酶片段长度存在差异称 限制性片段长度多态性( RFLP ) 。
4 ．限制酶命名采用 Smith 和 A thens 提议的方案, 第一个字母大写取自来源细菌的 属名 ; 第二、 三个字母取自来源细菌的 种名; 第四个字母( 如果有) 取自来源菌的 株系。
5 ．需要部分酶切时可采取的方法有( 1 ) 减少酶的用量 ( 2 ) 缩短反应时间 ( 3 ) 增大反应体积。
6 ．限制酶识别序列为 n 个碱基, 则其切割频率的理论值应是 4n 。
7 ．限制性内切酶一般保存在 50% 浓度的甘油溶液中。
8 ．甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一, 在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在 5% 以下。
9 ．限制与修饰是宿主的一种保护体系, 它是经过对外源 DNA 的 限制 和对自身 DNA 的 修饰 来实现的。
10 ． II 型限制酶既具有 识别位点 的专一性, 也具有 切割位点 的专一性。它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。
四．简答题
1 ．在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白( BSA ) 的目的与机理是什么?
答: 目的是保护酶的活性; 机理是经过提高反应体系中蛋白质的浓度, 防止内切酶失活。
2 ．如果用 EcoR I 酶切 DNA 时出现星活性, 试分析原因?
答: 主要原因有: 酶浓度太高; 高 PH ; 低盐; 含 Mn2+ 、 Cu2+ 等非 Mg2+ 金属离子; 甘油浓度高于 5% ; 存在某些有机溶剂。
3 ．下列序列中哪些可能是 II 类限制酶的识别序列?
ATATCG CCCGGG GATATC AGCCGA GAGTC
答: CCCGGG GATATC GAGTC
4 ．用 Klenow 酶可将 5 ‘粘末端填补成平末端, 而导致某些限制位点消失, 下列酶切后用 klenow 处理再连接不会丢失识别位点的是哪些?
XmaI C ↓ CCGGG BssH II G ↓ CGCGC PstI CTGCA ↓ G
HhaI GCG ↓ C HpaII G ↓ CGC
答: BssH II, HpaII
5 ．当两种限制酶反应条件不同时, 若要用双酶切, 应采取什么措施? 为什么?
答: 要避免星活性及部分酶切。( 1 ) 先用低盐缓冲液中活性最高的酶切, 再补盐和第二种酶; ( 2 ) 用一种酶消化后, 以酚: 氯仿: 异戊醇抽提, 再经乙醇沉淀, 将 DNA 重新溶解与适合第二种酶的缓冲液, 加第二种酶消化; ( 3 ) 先低温酶, 后高温酶; ( 4 ) 使用通用缓冲液。
6 ．试计算下列三种限制酶各自在某染色体 DNA 序列上的切割概率
Sau3A I GATC Pst I CTGCAG Hinf I GANTC
Acy I GPuCGPyC
答: 1/44 ; 1/46 ; 1/44 ; ( 1/44 ) x(1/22)
7 ．一长为 4.2kb 的 DNA 片段, 分别用 EcoRI 、 PstI 及 EcoRI+PstI 消化, 电泳结果如下图所示, 请根据结果绘出该片段限制性图谱
0.7kb
0.7kb 0.8kb
1.5kb 1.4kb 2.0kb
2.0kb 2.8kb

EcoRI Pst I EcoRI + Pst I
答: EcoRI PstI EcoRI
0.7kb 0.7kb 0.8kb 2.0kb

回收与连接
一．单选题
1 ．用 DEAE 膜片法回收电泳分离的 DNA 片段时, 在紧靠目的 DNA 片段前方的凝胶切一裂缝, 以插入 DEAE 纤维素膜, 该裂缝长度与 DNA 条带相比应( C )
A ． 略短 B. 等长 C. 略长 D. A 或 B 都可 E . A 、 B 、 C 都可
2 ．用透析膜插片凝胶电泳法回收 DNA 片段时, 再区带前挖一小槽, 将透析膜置于槽中, 这时应注意( B )
A ．透析膜要接触 DNA 区带一侧的胶缘 。
B ．透析膜不能接触 DNA 区带一侧的胶缘 。
C ．透析膜要接触 DNA 区带相对一侧的胶缘 。
D ．透析膜不能接触 DNA 区带相对一侧的胶缘 。
E ．随意插入槽中即可。
3 ．在回收 DNA 片段时, 观察电泳结果为尽量减少对 DNA 的照射损伤应使用( A )
A ．长波长紫外 B. 短波长紫外 C . 长波长红外 D. 短波长红外 E. ABCD 都不可
4 ． DNA 回收时, 如要除去 EB ( 溴化乙锭) 可用下列那种试剂( A )
A ．正丁醇 B. 苯酚 C. 氯仿 D. 异戊醇 E. 乙醇
5 ．在 DNA 分子克隆时, 常见到部分填补法, 填补时应注意( E )
A ．控制反应温度 B. 控制酶的反应时间 C. 控制 DNA 聚合酶的用量
D. 控制反应 PH E. 限制 dNTP 的种类
6 ．下列关于平末端连接的说法正确的是( B )
A ． 同等条件下连接效率高于粘末端连接的连接效率。
B ． 加入凝聚剂 PEG8000 可促进平末端连接。
C ． 平末端连接时反应温度要比粘末端连接温度高。
D ． 平末端连接方法的使用仅限于酶切后产生的两个平末端之间的连接。
E ． 平末端连接比粘末端连接更易产生自身环化。
7 ．用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接, 连接产物会含大量自身环化载体, 采用下列哪种酶处理, 可防止自身环化( E )
A ．核酸内切酶 B. 核苷酸激酶 C. 核酸外切酶 D. 末端转移酶 E. 碱性磷酸酶
8 ．分子克隆中用 T 载体主要是与下列哪种产物连接( D )
A ．单酶切产物 B. 双酶切产物 C. 同裂酶产物 D. PCR 产物 E. 酶切后形成的平末端产物
9 ．采用 BamH I 单切载体和目的基因后, 进行重组连接前要( D )
A ． 65 ℃处理 10 分钟使 BamH I 灭活。
B ． 用碱性磷酸酶处理载体防止其自身环化。
C ． 电泳检测酶切结果。
D ． A 、 B 、 C 都正确。
E ． 只有 A 、 C 正确。
10 ．粘末端连接的优点是操作简便且( C )
A ．可产生新的酶切位点 B. 载体易自身环化 C. 易于回收片段
D ．具有方向性 E. 选时更简便

二．多选题
1 ．重组连接时, 反应体系必须的组分有( A 、 C )
A ． Mg2+ B. BSA C. ATP D. PO43- E . EDTA
2 ． DNA 片段重组连接可用下列哪些方法( A 、 B 、 C 、 D 、 E )
A ．平末端连接 B. 粘末端连接 C. 加接头连接 D. 同聚尾连接
E . T 载体连接
3 ．酚抽提法回收 DNA 片段后残余的哪些物质可能会影响连接反应( A C )
A ．酚 B. 微量的 EB C. 琼脂糖 D. 少量的乙酸钠 E . 少量的乙醇
4 ．产生平末端的方法主要有( A 、 B 、 E )
A ．用产生平末端的限制酶切 。
B ．用 klenow 片段补齐 5 ‘粘末端。
C ．用末端转移酶补齐粘末端。
D ．用 Taq 聚合酶补齐粘末端。
E ．用 S1 核酸酶降解粘末端。
5 ．在 DNA 重组连接时, 常采用连接头连接( linker ligation ) , 其作用是( A 、 B 、 C 、 E )
A ．引入某些限制酶切位点。 B. 人工构建载体。
C ．增加调控元件。 D. 调整阅读框。
E ．经过接头引入与目的基因相同的限制酶位点, 并对目的基因相应酶切点进行甲基化修饰保护, 可保护目的基因不受限制酶破坏。
6 ．构建载体时, 使用双酶切相对于单酶切的优点在于( A 、 B 、 C 、 D )
A ．避免载体自身环化 B. 提高连接效率 C. 控制外源基因的插入方向
D. 便于转化后的筛选 E . 便于修改阅读框
7 ．下列关于同聚物加尾法的说法正确的是( A 、 B 、 C 、 D 、 E )
A ．其核心是利用末端转移酶的功能, 将载体和外源 DNA 的 3 ‘端再加上一端寡核苷酸。
B ．不易自身环化。 C. 连接效率高 D. 适用于 CDNA 克隆
E ．可能会产生某种限制酶切位点。
8 ．下列与 DNA 重组连接相关的说法正确的是 ( A 、 D 、 E )
A ．不匹配的粘末端可经过部分填补后连接。
B ． 同聚尾法连接不但连接效率高, 也易回收插入的片段。
C ．限制酶切割 DNA 后加入 EDTA-SDS 终止液抑制限制酶活性, 将有利于重组连接。
D ． Mg2+-ATP 是 T4DNA 连接酶反应时的必须因素。
E ．平末端连接时, 在反应体系中加入适量凝聚剂可提高连接效率。
9 ．下列哪些因素对保证较高连接效率是有利的( A 、 C 、 D )
A ．高纯度 DNA 。
B ．载体与目的基因摩尔数之比为 1 : 1 。
C ．载体与目的基因摩尔数之比为 1 : 3~5 。
D ．连接反应体系中 DNA 浓度较高。
E ．连接反应体系中 DNA 浓度较低。
10 ．如果 DNA 分子重组时, 需要用平端连接, 下列哪些方法可形成平末端( B 、 C 、 D 、 E ) 。
A ． 3 ‘突出的粘末端用 DNA 聚合酶加 dNTPs 填平。
B ． 3 ‘突出的粘末端用核酸酶切平。
C ． 5 ‘突出的粘末端用 DNA 聚合酶 加 dNTPs 填平。
D ． 5 ‘突出的粘末端用核酸酶切平。
E ．利用切口为平末端的限制酶。

三、 填空题
1 ．形成平末端的方法有 用产生平末端的限制酶切, 用 S1 核酸酶切除粘末端 , 用 DNA 聚合酶填平粘末端。
2 ．载体与 CDNA 连接重组可用的方法有 同聚尾连接酶, 加人工接头连接法。
3 ． DNA 片段重组连接时, 如要克隆 PCR 产物, PCR 产物可直接用 T 载体连接, 而无须用限制酶处理。
4 ．回收 DNA 片段时, 在确定 DNA 条带位置时, 应使用 长 波长紫外灯, 以最大限度减少对 DNA 的照射损伤。
5 ．回收 DNA 片段时, 常见 正丁醇 处理以除去 EB 。
6 ．在用单一限制酶切载体和目的基因并进行连接时, 为防止载体自身环化, 常见 碱性磷酸酶 处理载体, 或用 α - 互补 进行筛选。
7 ． DNA 片段重组连接的方法主要有 平端连接、 粘端连接、 同聚尾连接、 加接头连接 。

四．简答题
1 ．如何将一平末端的 DNA 片段与 BamH I 形成的粘末端连接?
答: 使用加接头连接法。人工合成一段含 BamH I 酶切位点的 DNA 短片段, 然后与该平末端片段两端连起来, 用 BamH I 切割连接片段, 即可形成 BamH I 的粘末端。
2 ．什么是同聚尾连接法? 具有哪些优缺点?
答: 同聚尾连接法是利用末端转移酶在载体和外源 DNA 的 3 ‘端各加上一段互补的寡聚核苷酸, 形成人工粘性末端, 然后在 DNA 连接酶的作用下, 连接成重组 DNA 。
其优点在于( 1 ) 由于同一 DNA 两端粘尾相同, 不会自身环化; ( 2 ) 连接效率高; ( 3 ) 用任何一种方法制备的 DNA 都可用这种方法连接。
其缺点在于 1 ) 方法复杂; ( 2 ) 外源片段较难回收; ( 3 ) 由于添加了同聚尾, 可能会影响外源基因表示。
3 ．什么是接头连接法?
答: 人工合成或来源于某一质粒的小段含某限制酶位点的 DNA 与载体或外源 DNA 分子相连, 这样便在载体或外源 DNA 上制造出新的酶切位点, 即接头连接。
4 ．为什么用同裂酶进行体外重组效率最高?
答: 同裂酶是指来源不同的限制酶切割 DNA 后, 产生相同的末端。多数同裂酶产生的粘性末端并非完全一致而是有四个碱基相同, 这样用同裂酶切割载体和目的基因后的连接产物常会失去原有的限制酶位点, 这样用同裂酶进行重组时, 限制酶切割反应后不用将该酶失活, 即可直接进行重组连接, 由于连接体系中原有限制酶存在, 载体自连不会发生, 从而保证了载体只同外源 DNA 的连接。
转化

一．单选题
1 ．下列哪种 DNA 结构在转化时能获得最高转化效率( )
A ．线形双链 DNA B. 单链线形 DNA C. 完整的环状双链 DNA
D ．开口环状双链 DNA E. A 和 C
2 ．下列表型中, 哪种是基因工程上的理想的受体菌表型( B )
A. r+m+rec+ B. r-m-rec- C. r- m+rec+ D. r+m+rec-
E. r-m-rec+
3 ．大肠杆菌出现感受态的生理期是 ( B )
A ．潜伏期 B. 对数期 C. 对数后期 D. 平衡期 E. 衰亡期
4 ． CaCl2 法制备 E.coli 感受态细胞时, 摄入ＤＮＡ温度是( E )
A ． 0 ℃ B. 16 ℃ C. 37 ℃ D. 25 ℃ E. 42 ℃
5 ．关于感受态细胞的下列说法不正确的是( C )
A ．有人工感受态细胞和自然感受态细胞。
B ．具有可诱导性。
C ．有可转移性。
D ．不同种细菌出现感受态的生理时期不同。
E ．不同种细菌出现感受态的比例不同。
二．多选题
1 ． C aCl2 诱导 E.coli 感受态细胞时, 下列哪些因素会影响转化效率( A 、 B 、 C 、 D 、 E )
A ． Ca2+ 浓度 B. DNA 纯度与构象 C. DMSO D. 温度 E. PH
2 ．人工诱导感受态细胞, 下列方法哪些正确( A 、 B 、 C 、 D )
A ． CaCl2 处理 B. 核酸酶抑制法 C. 饥饿法 D. PEG 处理 E. DMSO
3 ．下列有关利用粘尾质粒将外源 DNA 导入 E.coli 中的说法正确的是( B 、 C 、 D 、 E )
A ．空 cosmid 质粒可直接体外包装导入 E.coli , 也可用 CaCl2 法导入 E.coli 。
B ． Cosmid/DNA 与头部蛋白、 尾部蛋白混合, 体外包装后可进入 E.coli 。
C ． Cosmid 虽然只有 4~6kb , 但可容纳约 40~50kb 的外源 DNA 。
D ． Cos 序列是 DNA 包装到λ噬菌体颗粒中所需的 DNA 序列。
E ． Cosmid/DNA 重组体包装后以双链线性分子形式导入 E.coli 。
4 ．下列有关λ DNA 重组体导入 E.coli 说法正确的是( A 、 B 、 C )
A ．λ DNA 重组体必须有效包装后才能有感染 E.coli 的活性。
B ．λ DNA 重组体包装要有头部蛋白、 尾部蛋白的参与。
C ．λ DNA 重组体包装长度为野生型λ DNA 的 75~105% 。
D ．λ DNA 重组体是以双链环状形式导入 E.coli 。
E ．λ DNA 重组体用 CaCl2 法导入 E.coli 也能取得高转化率。
5 ．下列关于 CaCl2 处理获得感受态方法的说法正确的是( A 、 B 、 C 、 D )
A ． DNA 与 Ca2+ 结合后吸附在细胞表面, 该复合物可抵抗细胞表面的 DNAase 作用。
B ． DNA — Ca2+ 在 0 ℃时吸附于细胞表面, 温度高或温度波动会大大降低转化效率。
C ．有可能将两种质粒转入同一细胞但最终选择板上的菌落只含一种质粒。
D ． 42 ℃热休克是为了让 DNA 进入感受态细胞。
E ．热休克后要 37 ℃温育 1 小时, 目的是使含有外源 DNA 的细胞分裂 1~2 代, 更易筛到重组子。
三．填空题
1 ．感受态细胞是指 具有摄取外源 DNA 分子能力 的细胞。
2 ．λ噬菌体蛋白对重组 DNA 体外包装时, 包装长度为野生型λ DNA 的 75~105% 。
3 ．感受态大肠杆菌细胞在温度为 0 ℃ 时吸附 DNA , 42 ℃ 时摄入 DNA 。
4 ． CaCl2 法制备感受态细胞转化 DNA 时, DNA 以 DNA-Ca2+ 复合物形式吸附于细胞表面。
5 ．基因工程受体菌的基因型常为 r-m-rec-, r- 表示 限制缺陷型, m- 表示 修饰缺陷型 , rec- 表示 重组缺陷型。
6 ． CaCl2 法制备感受态细胞转化 DNA 时, 热休克的温度是 42 ℃。
7 ． E.coli 感受态出现的生理时期是 对数期。
四．简答题
1 ．简述在 CaCl2 法制备感受态细胞转化 DNA 时, 影响转化效率的各种因素。
答: 影响因素有: Ca2+ 浓度、 PH 值、 感受态细胞活力、 DNA 浓度、 DNA 纯度和构象、 温度、 DMSO 处理、 还原剂处理、 氯化六氨合高钴处理。
2 ． CaCl2 法制备感受态细胞转化 DNA 时, 低温的主要目的是什么? 热休克温度和目的是什么?
答: 低温目的: ( 1 ) 抑制细胞的旺盛生理代谢; ( 2 ) 有助于 DNA — Ca2+ 吸附于细胞表面; ( 3 ) 防止 DNAase 降解 DNA 。
热休克温度是 42 ℃; 目的是使细胞摄入吸附于其表面的 DNA 。
3 ．简述利用 Cosmid 将外源 DNA 导入 E.coli 的特点是什么?
答: ( 1 ) Cosmid 大小为 4~6 kb , 可用常规 CaCl2 法直接导入 E.coli 扩增。
( 2 ) Cosmid 含 cos 位点, 是 DNA 包装到λ噬菌体蛋白颗粒中所需的 DNA 序列, cosmid/DNA 重组体需与λ噬菌体头、 尾部蛋白混合体外包装后, 才能导入 E.coli 。
( 3 ) 其包装长度为野生型λ噬菌体 DNA 的 75~105% , 可容纳较大片段( 30~50kb ) DNA , 可用于建立真核细胞文库。
( 4 ) 只有重组体可包装, 未重组 cosmid 不能包装, 因而不能进入 E.coli 有利于克隆的筛选。
第三章习题
选择题
1. 关于 PCR 扩增停滞的原因有很多种, 但下列各项中( B ) 项不是主要原因。
A. 底物( 模板) 过剩 B.dNTP 的大量消耗 C. 产物的聚集 D. 非特异性产物的竞争性抑制
2.Clark 作了一个有趣的实验, 发现 TaqDNA 聚合酶能够不需要模板, 在双链 DNA 的末端加一个碱基, 主要是加( B )
A. dGTP B.dATP C.dCTP D.dTTP

3. 有简并引物的 3’ 端尽量使用具有简并密码的氨基酸, 这是因为( A )
A. TaqDNA 聚合酶具有一定的不精确性 B. 便于排除错误碱基的掺入 C. 易于退火 D. 易于重组连接
4.PCR 实验的特异性主要取决于( C )
A.DNA 聚合酶的种类 B. 反应体系中模板 DNA 的量
C. 引物序列的结构和长度 D. 四种 dNTP 的浓度
E. 循环周期的次数
5. 有关 PCR 的描述下列哪项不正确: ( D )
A. 是一种酶促反应 B. 引物决定了扩增的特异性
C. 扩增的产量按 Y=m(1+X)n D. 扩增的对象是氨基酸序列
E. 扩增的对象是 DNA 序列

6. 有关 PCR 的描述下列哪项正确: (ABC)
A.polymerase chain reaction 的字首缩写
B.1993 年获诺贝尔化学奖
C. 已广泛的应用于医学各学科
D. 能够准确对扩增模板定量
E. 以上都对

7.PCR 反应产物的特异性取决于 (E)
A 镁离子浓度 B 退火温度 C 引物碱基组成和长度
D 循环次数 E.A+B+C
填空
1.Clark 发现用 TaqDNA 聚合酶得到的 PCR 反应产物不是平末端, 而是有一个突出碱基末端的双链 DNA 分子。根据这一发现设计了克隆 PCR 产物的 。
2. 在简并引物的设计中, 常常要用到 dI ( 次黄嘌呤) , 原因是 。
3. 简并引物 PCR 主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计 引物来合成相应的基因。
4.SSC 是由 NaCl 和柠檬酸钠组成的试剂, 其中 NaCl 的作用是使