喹啉与青蒿素类抗疟药物分析.pptx

抗疟药抗疟药(antimalarial drugs)作用于疟原虫生活史的作用于疟原虫生活史的不同环节，从而抑制或杀灭疟原虫。根据用药的目的，不同环节，从而抑制或杀灭疟原虫。根据用药的目的，将抗疟药分为三类：将抗疟药分为三类：v主要用于控制症状的抗疟药主要用于控制症状的抗疟药(如磷酸氯喹、硫酸奎宁、如磷酸氯喹、硫酸奎宁、磷酸咯萘啶，青蒿素，蒿甲醚，青蒿琥酯，本芴醇等磷酸咯萘啶，青蒿素，蒿甲醚，青蒿琥酯，本芴醇等)；v主要用于控制复发和传播的药物主要用于控制复发和传播的药物(如磷酸伯氨喹等如磷酸伯氨喹等)；v主要用于病因性预防的抗疟药主要用于病因性预防的抗疟药(如乙胺嘧啶、磺胺类如乙胺嘧啶、磺胺类等等)。第1页/共45页一、喹啉类药物的基本结构与主要性质一、喹啉类药物的基本结构与主要性质硫酸奎宁硫酸奎宁Quinine Sulfate 二盐酸奎宁二盐酸奎宁Quinine Dihydrochloride 磷酸哌喹磷酸哌喹Piperaquine Phosphate 磷酸氯喹磷酸氯喹Chloroquine Phosphate 磷酸咯萘啶磷酸咯萘啶Malaridine Phosphate 磷酸伯氨喹磷酸伯氨喹Primaquine Phosphate 喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环喹啉杂环，环上杂原子，环上杂原子的反应性能基本与的反应性能基本与吡啶吡啶相同。相同。第2页/共45页喹啉类药物的物理性质、鉴别、检查及含量测定喹啉类药物的物理性质、鉴别、检查及含量测定 药物名称药物名称物理性质物理性质鉴别鉴别检查检查含量含量硫酸奎宁硫酸奎宁QuinineSulfate白白色色细细微微的的针针状状结结晶晶，轻轻柔柔，易易压压缩缩；无无臭臭，味味极极苦苦；遇遇光光渐变色；水溶液显中性反应。渐变色；水溶液显中性反应。在在三三氯氯甲甲烷烷-无无水水乙乙醇醇(2:1)中中易易溶溶，在在水水、乙乙醇醇、三三氯氯甲甲烷烷或乙醚中微溶。或乙醚中微溶。D(0.1mol/L HCl溶液溶液)-237o-244o。1.荧光反应荧光反应2.绿奎宁反应绿奎宁反应3.氯化钡反应氯化钡反应4.IR1.酸度酸度2.三三氯氯甲甲烷烷-无无水水乙乙醇醇不不溶溶物物.3.其其他他金金鸡鸡纳纳碱碱(TLC).4.干干燥燥失失重重.5.炽灼残渣炽灼残渣非水滴定非水滴定二盐酸奎宁二盐酸奎宁QuinineDihydrochloride白色粉末；无臭，味极苦；遇光渐变色；水溶液显酸性反应。白色粉末；无臭，味极苦；遇光渐变色；水溶液显酸性反应。在在水水中中极极易易溶溶解解，在在乙乙醇醇中中溶溶解解，在在三三氯氯甲甲烷烷中中微微溶溶，在在乙乙醚中极微溶解。醚中极微溶解。D(0.1mol/L HCl溶液溶液)-223o-229o。1.荧光反应荧光反应2.绿奎宁反应绿奎宁反应3.IR 4.氯化物反应氯化物反应1.酸酸度度.2.硫硫酸酸盐盐.3.其其他他金金鸡鸡纳纳碱碱(TLC).4.干干燥燥失失重重.5.炽炽灼灼残残渣渣.6.钡盐钡盐非水滴定非水滴定磷酸哌喹磷酸哌喹PiperaquinePhosphate类白色至浅黄色的结晶性粉末；无臭，味微苦；遇光易变色。类白色至浅黄色的结晶性粉末；无臭，味微苦；遇光易变色。在水中微溶，在无水乙醇或三氯甲烷几乎不溶。在水中微溶，在无水乙醇或三氯甲烷几乎不溶。1.硫氰酸铵反应硫氰酸铵反应2.UV3.IR4.磷酸盐反应磷酸盐反应1.酸度酸度2.有关物质（有关物质（TLC）3.水分水分非水滴定非水滴定(提取后提取后)磷酸氯喹磷酸氯喹ChloroquinePhosphate白白色色结结晶晶性性粉粉末末，无无臭臭，味味苦苦。遇遇光光渐渐变变色色；水水溶溶液液显显酸酸性性反应。反应。在水中易溶，在乙醇、三氯甲烷、乙醚中几乎不溶。在水中易溶，在乙醇、三氯甲烷、乙醚中几乎不溶。1.UV2.IR3.磷酸盐反应磷酸盐反应1.酸酸度度.2.溶溶液液的的澄澄清清度度.3.有有关关物物质质(TLC).4.干干燥燥失失重重.5.重重金金素素.6.砷盐砷盐非水滴定非水滴定磷酸咯萘啶磷酸咯萘啶MalaridinePhosphate黄色至橙黄色结晶性粉末；无臭，味苦；具引湿性。黄色至橙黄色结晶性粉末；无臭，味苦；具引湿性。在水中溶解，在乙醇或乙醚中几乎不溶。在水中溶解，在乙醇或乙醚中几乎不溶。1.三硝基苯酚反应三硝基苯酚反应2.UV3.IR4.磷酸盐反应磷酸盐反应1.酸酸度度.2.水水中中不不溶溶物物.3.氯氯化化物物 4.甲甲醛醛.5.四氢吡咯四氢吡咯.6.干燥失重干燥失重非水滴定非水滴定(电位法电位法)磷酸伯氨喹磷酸伯氨喹PrimaquinePhosphate橙红色结晶性粉未，无臭，味苦。橙红色结晶性粉未，无臭，味苦。在水中溶解，在三氯甲烷或乙醚中不溶。在水中溶解，在三氯甲烷或乙醚中不溶。1.硫酸铈铵反应硫酸铈铵反应2.UV3.IR4.磷酸盐反应磷酸盐反应1.酸酸度度.2.有有关关物物质质（TLC）.3.残残留留溶溶剂剂.4.干燥失重干燥失重非水滴定非水滴定(电位法电位法)(一一)典型药物的结构与物理性质典型药物的结构与物理性质第3页/共45页(二二)主要化学性质主要化学性质 奎奎宁宁为为二二元元生生物物碱碱，其其中中奎奎宁宁环环上上的的氮氮原原子子的的碱碱性性较较强强(pKa 8.8)，与强酸形成稳定的盐，与强酸形成稳定的盐，奎宁和奎尼丁均与二元酸成盐，如与硫酸成盐；奎宁和奎尼丁均与二元酸成盐，如与硫酸成盐；喹啉环上的氮原子碱性较弱喹啉环上的氮原子碱性较弱(pKa 4.2)，不能与硫酸成盐。，不能与硫酸成盐。磷磷酸酸氯氯喹喹和和磷磷酸酸伯伯氨氨喹喹为为三三元元生生物物碱碱；磷磷酸酸咯咯萘萘啶啶为为五五元生物碱；磷酸哌喹为六元生物碱。元生物碱；磷酸哌喹为六元生物碱。1.碱性碱性第4页/共45页(二二)主要化学性质主要化学性质 喹喹啉啉类类抗抗疟疟药药基基本本都都具具有有手手性性，硫硫酸酸奎奎宁宁为为左左旋旋体体，其比旋度为其比旋度为-237o至至-224o；二盐酸奎尼也为左旋体，其比旋度为二盐酸奎尼也为左旋体，其比旋度为-223o至至-229o。磷酸哌喹和磷酸咯萘啶磷酸哌喹和磷酸咯萘啶不不具有手性。具有手性。2.旋光性旋光性第5页/共45页(二二)主要化学性质主要化学性质3.荧光特性荧光特性 硫酸奎宁和二盐酸奎尼在稀硫酸溶液中均显硫酸奎宁和二盐酸奎尼在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光蓝色荧光。4.紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征 由由于于喹喹啉啉类类药药物物分分子子结结构构中中含含有有吡吡啶啶与与苯苯稠稠合合而而成成的的喹喹啉啉杂杂环环，具具有有共共轭轭体体系系，可可用用紫紫外外吸吸收收光光谱谱的的特特征征鉴鉴别该类药物。别该类药物。第6页/共45页二、鉴别试验二、鉴别试验(一一)绿奎宁反应绿奎宁反应(二二)光谱特征光谱特征(三三)无机酸盐无机酸盐第7页/共45页(一一)绿奎宁反应绿奎宁反应 奎奎宁宁为为6-位位含含氧氧喹喹啉啉衍衍生生物物，可可以以发发生生绿绿奎奎宁宁反反应应(Thalleioquin reaction)。反反应应基基本本机机制制是是6-位位含含氧氧喹喹啉啉，经经氯氯水水(或或溴溴水水)氧氧化化氯氯化化，再再以以氨氨水水处处理理缩缩合合，生生成成绿绿色的色的二醌基亚胺二醌基亚胺的铵盐。的铵盐。第8页/共45页(一一)绿奎宁反应绿奎宁反应 硫硫酸酸奎奎宁宁和和二二盐盐酸酸奎奎尼尼的的绿绿奎奎宁宁反反应应机机制制同同上上。取取其其水水溶溶液液，加加溴溴试试液液0.2ml和和氨氨试试液液1ml，即即显显翠翠绿绿色色，加加酸酸成成中中性性变变成成蓝蓝色色，成成酸酸性性时时则则为为紫紫红红色色。翠翠绿绿色色可可转转溶溶于于醇醇、三三氯氯甲甲烷烷中中而而不不溶溶于于醚醚。因因此此ChP2010采采用用此此反应鉴别硫酸奎宁和二盐酸奎尼。反应鉴别硫酸奎宁和二盐酸奎尼。ChP2010硫硫酸酸奎奎宁宁的的绿绿奎奎宁宁反反应应鉴鉴别别：取取本本品品约约5mg，加加水水5ml溶溶解解后后，加加溴溴试试液液3滴滴与与氨氨试试液液1ml，即即显显翠翠绿色。绿色。第9页/共45页(二二)光谱特征光谱特征1.紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征 由由于于喹喹啉啉类类药药物物分分子子结结构构中中含含有有吡吡啶啶与与苯苯稠稠合合而而成成的的喹喹啉啉杂杂环环，具具有有共共轭轭体体系系，可可用用紫紫外外吸吸收收光光谱谱的的特特征征鉴鉴别该类药物。别该类药物。ChP2010采采用用本本法法鉴鉴别别磷磷酸酸氯氯喹喹、磷磷酸酸哌哌喹喹、磷磷酸酸咯咯萘啶和磷酸伯氨喹。萘啶和磷酸伯氨喹。第10页/共45页(二二)光谱特征光谱特征 2.荧光光谱特征荧光光谱特征 利利用用硫硫酸酸奎奎宁宁和和二二盐盐酸酸奎奎宁宁在在稀稀硫硫酸酸溶溶液液中中均均显显蓝蓝色荧光。色荧光。ChP2010硫硫酸酸奎奎宁宁的的荧荧光光鉴鉴别别：取取本本品品约约20mg，加加水水20ml溶溶解解后后，分分取取溶溶液液10ml，加加稀稀硫硫酸酸使使成成酸酸性性，即显蓝色荧光。即显蓝色荧光。第11页/共45页(二二)光谱特征光谱特征 3.红外吸收光谱特征红外吸收光谱特征 硫硫酸酸奎奎宁宁、二二盐盐酸酸奎奎宁宁、磷磷酸酸氯氯喹喹、磷磷酸酸哌哌喹喹、磷磷酸酸咯咯萘萘啶啶和和磷磷酸酸伯伯氨氨喹喹在在ChP2010中中均均采采用用红红外外光光谱谱的的方方法法进行鉴别。进行鉴别。ChP2010磷磷酸酸氯氯喹喹的的IR鉴鉴别别：取取本本品品约约0.5g，置置分分液液漏漏斗斗中中，加加水水25ml溶溶解解后后，加加氢氢氧氧化化钠钠试试液液5ml、乙乙醚醚50ml振振摇摇提提取取，醚醚层层用用水水洗洗涤涤后后通通过过置置有有无无水水硫硫酸酸钠钠的的漏漏斗斗滤滤过过，滤滤液液置置水水浴浴上上蒸蒸干干，残残渣渣用用五五氧氧化化二二磷磷为为干干燥燥剂剂减减压压干干燥燥至至析析出出结结晶晶，其其红红外外光光吸吸收收图图谱谱应应与与氯氯喹喹的的对对照图谱一致。照图谱一致。第12页/共45页(三三)无机酸盐无机酸盐1.硫酸盐的鉴别反应硫酸盐的鉴别反应利用利用硫酸奎宁的硫酸根，显硫酸盐的鉴别反应进行鉴别。硫酸奎宁的硫酸根，显硫酸盐的鉴别反应进行鉴别。v 取取供供试试品品溶溶液液，滴滴加加氯氯化化钡钡试试液液，即即生生成成白白色色沉沉淀淀；分分离离，沉沉淀淀在盐酸或硝酸中均不溶解。在盐酸或硝酸中均不溶解。v取取供供试试品品溶溶液液，加加醋醋酸酸铅铅试试液液，即即生生成成白白色色沉沉淀淀；分分离离，沉沉淀淀在在醋醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。v取供试品溶液，加盐酸，取供试品溶液，加盐酸，不不生成白色沉淀生成白色沉淀(与硫代硫酸盐区别与硫代硫酸盐区别)。第13页/共45页(三三)无机酸盐无机酸盐 2.氯化物的鉴别反应氯化物的鉴别反应 二二盐盐酸酸奎奎宁宁中中具具有有盐盐酸酸根根，即即显显氯氯化化物物的的鉴鉴别别反反应应进进行鉴别。行鉴别。v取取供供试试品品溶溶液液，加加稀稀硝硝酸酸使使成成酸酸性性后后,滴滴加加硝硝酸酸银银试试液液，即即生生成成白白色色凝凝乳乳状状沉沉淀淀；分分离离，沉沉淀淀加加氨氨试试液液即即溶溶解解，再再加加稀稀硝硝酸酸酸酸化化后后，沉沉淀淀复复生生成成。如如供供试试品品为为生生物物碱碱或或其其他他有有机机碱碱的的盐盐酸酸盐盐，须须先先加加氨氨试试液液使使成成碱碱性性，将将析析出出的的沉沉淀淀滤滤过过除除去去，取滤液进行试验。取滤液进行试验。v取取供供试试品品少少量量，置置试试管管中中，加加等等量量的的二二氧氧化化锰锰，混混匀匀，加加硫硫酸酸湿湿润润，缓缓缓缓加加热热，即即发发生生氯氯气气，能能使使用用水水湿湿润润的的碘碘化化钾钾淀粉试纸显蓝色。淀粉试纸显蓝色。第14页/共45页(三三)无机酸盐无机酸盐3.磷酸盐的鉴别反应磷酸盐的鉴别反应 磷磷酸酸氯氯喹喹、磷磷酸酸哌哌喹喹、磷磷酸酸咯咯萘萘啶啶和和磷磷酸酸伯伯氨氨喹喹都都具具有磷酸根，显磷酸盐反应进行鉴别。有磷酸根，显磷酸盐反应进行鉴别。v取取供供试试品品的的中中性性溶溶液液，加加硝硝酸酸银银试试液液，即即生生成成浅浅黄黄色色沉沉淀淀；分分离离，沉淀在氨试液或稀硝酸中均易溶解。沉淀在氨试液或稀硝酸中均易溶解。v取供试品溶液，加氯化铵镁试液，即生成白色结晶性沉淀。取供试品溶液，加氯化铵镁试液，即生成白色结晶性沉淀。v取取供供试试品品溶溶液液，加加钼钼酸酸铵铵试试液液与与硝硝酸酸后后，加加热热即即生生成成黄黄色色沉沉淀淀；分离，沉淀能在氨试液中溶解。分离，沉淀能在氨试液中溶解。第15页/共45页三、纯度检查三、纯度检查v理化特性：理化特性：硫硫酸酸奎奎宁宁为为白白色色细细微微的的针针状状结结晶晶，轻轻柔柔，易易压压缩缩；无无臭臭，味味极极苦苦；遇遇光光渐渐变变色色；水水溶溶液液显显中中性性反反应应。在在氯氯仿仿-无无水水乙乙醇醇(2:1)的的混混合合液液中中易易溶溶，在在水水、乙乙醇醇、氯氯仿仿或或乙乙醚醚中微溶。中微溶。v有关物质有关物质 根根据据硫硫酸酸奎奎宁宁的的制制备备工工艺艺，产产品品中中有有关关物物质质主主要要是是生生产产过过程程中中产产生生的的中中间间体体以以及及副副反反应应产产物物。通通过过检检查查以以下下项项加加以控制：以控制：酸度酸度三氯甲烷三氯甲烷-乙醇中不溶物质乙醇中不溶物质其他金鸡纳碱等其他金鸡纳碱等(一一)硫酸奎宁的检查硫酸奎宁的检查 第16页/共45页(一一)硫酸奎宁的检查硫酸奎宁的检查1.酸度酸度 主要是在主要是在成盐过程成盐过程中引入。中引入。检检查查法法：取取本本品品0.20g，加加水水20ml溶溶解解后后，用用酸酸度度计进行测定，计进行测定，pH值应为值应为5.76.6。2.三氯甲烷三氯甲烷-乙醇中不溶物质乙醇中不溶物质 本本项项检检查查主主要要控控制制药药物物在在制制备备过过程程中中引引入入的的醇醇中中不不溶溶性性杂杂质或无机盐质或无机盐类等。类等。检检查查法法：取取本本品品2.0g，加加三三氯氯甲甲烷烷-无无水水乙乙醇醇(2:1)混混合合溶溶液液15ml，在在50加加热热10分分钟钟后后，用用称称定定重重量量的的垂垂熔熔坩坩埚埚滤滤过过，滤滤渣渣用用上上述述混混合合溶溶液液分分5次次洗洗涤涤，每每次次10ml，在在105干干燥燥至至恒重，遗留残渣不得过恒重，遗留残渣不得过2mg。第17页/共45页(一一)硫酸奎宁的检查硫酸奎宁的检查TLC检检查查法法：取取本本品品，加加稀稀乙乙醇醇制制成成每每1ml中中约约含含10mg的的溶溶液液，作作为为供供试试品品溶溶液液；精精密密量量取取适适量量，加加稀稀乙乙醇醇稀稀释释制制成成每每1ml中中约约含含50 g的的溶溶液液，作作为为对对照照溶溶液液。吸吸取取上上述述两两种种溶溶液液各各5 l，分分别别点点于于同同一一硅硅胶胶G薄薄层层板板上上，以以三三氯氯甲甲烷烷-丙丙酮酮-二二乙乙胺胺(5:4:1.25)为为展展开开剂剂，展展开开后后，微微热热使使展展开开剂剂挥挥散散，喷喷以以碘碘铂铂酸酸钾钾试试液液使使显显色色。供供试试品品溶溶液液如如显显杂杂质质斑斑点点，与与对对照照溶溶液液的的主主斑斑点比较，不得更深。点比较，不得更深。3.3.其他金鸡纳碱其他金鸡纳碱 本项检查主要控制硫酸奎宁中的其他生物碱，采用本项检查主要控制硫酸奎宁中的其他生物碱，采用HPLCHPLC或或TLCTLC中中的主成分的主成分自身对照法或杂质对照品对照法自身对照法或杂质对照品对照法进行检进行检查。查。第18页/共45页3.3.其他金鸡纳碱其他金鸡纳碱BP7 HPLC检查法检查法：金鸡纳生物碱的金鸡纳生物碱的HPLC分析系统适分析系统适用性试验示意图用性试验示意图1-cinchonine;2-cinchonidine;3-dihydrocinchonine;4-dihydrocinchonidine;5-quinidine;6-quinine;7-diydroquinidine;8-dihydroquinine;9-epiquinidine;10-epiquinine第19页/共45页(二二)磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查v磷磷酸酸咯咯萘萘啶啶(疟疟乃乃停停)对对疟疟原原虫虫红红细细胞胞内内期期裂裂殖殖体体有有杀杀灭灭作作用用。与与氯氯喹喹无无交交叉叉抗抗药药性性，临临床床上上用用于于治治疗疗抗抗氯氯喹喹株株恶恶性性疟疟和抢救脑型疟等凶险型疟疾。和抢救脑型疟等凶险型疟疾。v磷磷酸酸咯咯萘萘啶啶在在生生产产和和贮贮藏藏过过程程中中引引入入的的有有关关物物质质，通通过过溶溶液的澄清度与颜色、有关物质等项目的检查进行控制。液的澄清度与颜色、有关物质等项目的检查进行控制。v磷磷酸酸咯咯萘萘啶啶为为黄黄色色至至橙橙黄黄色色结结晶晶性性粉粉末末；无无臭臭，味味苦苦；具具引湿性。在水中溶解，在乙醇或乙醚中几乎不溶。引湿性。在水中溶解，在乙醇或乙醚中几乎不溶。vChP2010磷磷酸酸咯咯萘萘啶啶进进行行酸酸度度、水水中中不不溶溶物物、氯氯化化物物、甲醛、四氢吡咯、甲醛、四氢吡咯、干燥失重的检查干燥失重的检查。第20页/共45页(二二)磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查1.酸度酸度 v主主要要是是在在成成盐盐过过程程中中引引入入。本本品品水水溶溶液液的的pH值值如如小小于于2.4，刺激性较大。，刺激性较大。v检检查查法法：取取本本品品1.0g，加加水水25ml溶溶解解后后，用用酸酸度度计计进进行测定，行测定，pH值应大于值应大于2.4。2.水中不溶物水中不溶物 v本本品品加加水水溶溶解解后后，稍稍放放置置即即有有黄黄色色不不溶溶物物产产生生，影影响响质质量量。故质量标准按给药途径不同，规定其不同限量以控制质量。故质量标准按给药途径不同，规定其不同限量以控制质量。v 检检查查法法：取取本本品品2.0g，加加水水25ml振振摇摇使使溶溶解解，放放置置30分分钟钟，用用置置105恒恒重重的的4号号垂垂熔熔玻玻璃璃坩坩埚埚滤滤过过，沉沉淀淀用用水水15ml分分次次洗洗涤涤，在在105干干燥燥4小小时时，遗遗留留残残渣渣不不得得过过4mg(供供注注射射用用)或或7mg(供口服用供口服用)。第21页/共45页(二二)磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查3.氯化物氯化物 v系系生生产产工工艺艺中中带带入入。检检查查时时为为了了避避免免溶溶液液颜颜色色的的干干扰扰，先加碱使咯萘啶沉淀析出，然后再对滤液进行检查。先加碱使咯萘啶沉淀析出，然后再对滤液进行检查。v检检查查法法 取取本本品品0.10g，加加水水4ml使使溶溶解解，加加20碳碳酸酸钠钠溶溶液液5ml，摇摇匀匀，使使沉沉淀淀完完全全，用用5号号垂垂熔熔玻玻璃璃漏漏斗斗滤滤过过，容容器器用用水水15ml分分次次洗洗涤涤、滤滤过过，合合并并滤滤液液，加加水水使使成成25ml，依依氯氯化化物物法法检检查查，与与标标准准氯氯化化钠钠溶溶液液3.0ml制成的对照液比较，不得更浓制成的对照液比较，不得更浓(0.03)。第22页/共45页(二二)磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查4.甲醛甲醛 v在在合合成成磷磷酸酸咯咯萘萘啶啶的的反反应应中中使使用用了了甲甲醛醛进进行行缩缩合合，甲甲醛醛具具有有毒毒性性，应对产品中可能剩余的甲醛进行检查。应对产品中可能剩余的甲醛进行检查。v检检查查法法：取取本本品品50.0mg，加加水水2ml使使溶溶解解，加加5%碳碳酸酸钠钠溶溶液液4ml，搅搅匀匀，滤滤过过，滤滤液液加加硫硫酸酸溶溶液液(12)3ml，冷冷却却后后加加品品红红亚亚硫硫酸酸试试液液5ml，在在2030保保温温30分分钟钟，如如显显色色，与与新新制制的的甲甲醛醛溶溶液液(每每1ml含含甲甲醛醛0.10mg的的水水溶溶液液)1.0ml用用同同一一方方法法制制成成的的对对照照液液比比较较，不得更深不得更深(0.2%)。5.四氢吡咯四氢吡咯 v在在合合成成磷磷酸酸咯咯萘萘啶啶的的反反应应中中使使用用了了四四氢氢吡吡咯咯进进行行缩缩合合，四四氢氢吡吡咯具有毒性，应对产品中可能剩余的四氢吡咯进行检查。咯具有毒性，应对产品中可能剩余的四氢吡咯进行检查。v检检查查法法：取取本本品品10mg，加加水水2ml溶溶解解后后，加加5碳碳酸酸钠钠溶溶液液2ml，搅搅拌拌，滤滤过过，滤滤液液加加新新制制的的亚亚硝硝基基铁铁氰氰化化钠钠乙乙醛醛试试液液1ml，摇摇匀匀，5分钟内不得显蓝紫色。分钟内不得显蓝紫色。第23页/共45页四、含量测定四、含量测定 硫硫酸酸奎奎宁宁具具有有生生物物碱碱的的性性质质，很很难难在在水水溶溶液液中中用用酸酸直直接接滴滴定定。而而在在非非水水酸酸性性介介质质中中，碱碱性性显显著著增增强强，即即可可以以在在冰冰醋醋酸酸或或醋醋酐酐等等酸酸性性溶溶液液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示剂或电位法确定终点。中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示剂或电位法确定终点。由由于于硫硫酸酸为为二二元元酸酸，在在水水溶溶液液中中能能进进行行二二级级解解离离，但但在在冰冰醋醋酸酸介介质质中中，只只能能解解离离为为HSO4，所所以以生生物物碱碱的的硫硫酸酸盐盐在在冰冰醋醋酸酸中中只只能能滴滴定定至至硫酸氢盐。硫酸氢盐。(BH+)2SO42-+HClO4 BH+ClO4-+BH+HSO4 测测定定时时还还应应注注意意生生物物碱碱分分子子结结构构中中氮氮原原子子碱碱性性的的强强弱弱，正正确确判判断断反反应的摩尔比，以准确计算结果。应的摩尔比，以准确计算结果。(一一)硫酸奎宁的含量测定硫酸奎宁的含量测定第24页/共45页(一一)硫酸奎宁的含量测定硫酸奎宁的含量测定取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml与结晶紫指示液12滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于24.90mg的(C20H24N2O2)2H2SO4。ChP2010硫酸奎宁的含量测定法：硫酸奎宁的含量测定法：奎奎宁宁为为二二元元碱碱，喹喹核核氮氮可可与与硫硫酸酸成成盐盐，喹喹啉啉环环氮氮不不与与硫硫酸酸成成盐盐，但但在在冰醋酸介质中用高氯酸滴定时，却能与高氯酸成盐。即：冰醋酸介质中用高氯酸滴定时，却能与高氯酸成盐。即：因因此此，1 mol硫硫酸酸奎奎宁宁消消耗耗3 mol高高氯氯酸酸滴滴定定液液。即即1 mol奎奎宁宁可可以以结结合合4 mol质质子子，其其中中1 mol质质子子是是硫硫酸酸提提供供的的，其其它它3 mol质质子子是是由由高高氯氯酸酸提提供供的。的。USP与本法相同。与本法相同。第25页/共45页(一一)硫酸奎宁的含量测定硫酸奎宁的含量测定 取本品20片，除去包衣后，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于硫酸奎宁0.3g)，置分液漏斗中。加氯化钠0.5g与0.1mol/L氢氧化钠溶液10ml，混匀，精密加三氯甲烷50ml，振摇10分钟，静置，分取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液25ml，加醋酐5mL与二甲基黄指示液2滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显玫瑰红色，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于19.75mg的(C20H24N2O2)2H2SO4 2H2O。ChP2010 硫酸奎宁片的含量测定法：硫酸奎宁片的含量测定法：测测定定中中1mol硫硫酸酸奎奎宁宁可可转转化化为为2mol奎奎宁宁，每每1mol奎奎宁宁消消耗耗2mol高氯酸，高氯酸，故故1mol硫酸奎宁消耗硫酸奎宁消耗4mol高氯酸高氯酸。反应式为：。反应式为：第26页/共45页(一一)硫酸奎宁的含量测定硫酸奎宁的含量测定 显显然然其其片片剂剂分分析析与与原原料料药药有有所所不不同同。另另外外还还应应注注意意考考察察共共存存物物的的干干扰扰，片片剂剂中中如如有有较较多多辅辅料料，如如硬硬脂脂酸酸盐盐、苯苯甲甲酸酸盐盐等等，也也消消耗耗高高氯氯酸酸滴滴定定液液，故故应应先先用用强强碱碱溶溶液液碱碱化化，使使之之游离，经三氯甲烷提取分离后，再用高氯酸滴定液滴定。游离，经三氯甲烷提取分离后，再用高氯酸滴定液滴定。USP34 USP34 硫酸奎宁片含量的硫酸奎宁片含量的HPLCHPLC测定法测定法 第27页/共45页(二二)磷酸氯喹制剂的含量测定磷酸氯喹制剂的含量测定 取取本本品品10片片，精精密密称称定定，研研细细，精精密密称称取取适适量量(约约相相当当于于磷磷酸酸氯氯喹喹0.13g)，置置200ml量量瓶瓶中中，加加0.lmol/L盐盐酸酸溶溶液液适适量量，充充分分振振摇摇使使磷磷酸酸氯氯喹喹溶溶解解并并稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，滤滤过过，精精密密量量取取续续滤滤液液2ml，置置100ml量量瓶瓶中中，用用0.lmol/L盐盐酸酸溶溶液液稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，在在343nm的的波波长长处处测测定定吸吸光光度度；另另取取磷磷酸酸氯氯喹喹对对照照品品适适量量，精精密密称称定定，加加0.lmol/L盐盐酸酸溶溶液液溶溶解解并并定定是是稀稀释释制制成成每每lml中约含中约含13g的溶液，同法测定，计算，即得。的溶液，同法测定，计算，即得。本本品品含含磷磷酸酸氯氯喹喹(C18H26ClN32H3PO4)应应为为标标示示量量的的93.0%107.0%。ChP2010中磷酸氯喹片的中磷酸氯喹片的紫外紫外-可见分光光度可见分光光度含量测定法：含量测定法：第28页/共45页(二二)磷酸氯喹制剂的含量测定磷酸氯喹制剂的含量测定 ChP2010中中磷磷酸酸氯氯喹喹注注射射液液(本本品品含含磷磷酸酸氯氯喹喹的的灭灭菌菌水水溶溶液液。含含磷磷酸酸氯氯喹喹(C18H26ClN32H3PO4)应应为为标标示示量量的的95.0%105.0%。)的含量的的含量的提取酸量测定法提取酸量测定法：精密量取本品适量(约相当于磷酸氯喹0.3g)，用水稀释至30ml，加20%氢氧化钠溶液3ml，摇匀，用乙醚提取4次，每次20ml，合并乙醚液，用10ml水洗涤，水洗涤液再用15ml乙醚提取1次，合并前后两次的乙醚液，蒸发至近23ml时，精密加盐酸滴定液(0.lmol/L)25ml，温热蒸去乙醚并使残渣溶解，冷却，加溴甲酚绿指示液数滴，用氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)滴定。每lml盐酸滴定液(0.lmol/L)相当于25.79mg C18H26ClN32H3PO4。USP 采用提取后采用提取后HPLC测定磷酸氯喹注射液的含量。测定磷酸氯喹注射液的含量。第29页/共45页第二节第二节 青蒿素类药物的分析青蒿素类药物的分析(3R,5aS,6R,8aS,9R,12S,12aR)-八氢八氢-3,6,9-三甲基三甲基-3,12-氧桥氧桥-12H-吡喃吡喃并并4,3-j-1,2-苯并二塞平苯并二塞平-10(3H)-酮酮 第30页/共45页v青青蒿蒿素素(artemisinin)又又名名黄黄蒿蒿素素，是是我我国国学学者者从从从从菊菊科科植植物物黄黄花花蒿蒿(artemisia annua L.)中中提提取取分分离离得到的一个含得到的一个含过氧基团的新型倍半萜内酯过氧基团的新型倍半萜内酯。青蒿素简介青蒿素简介v1986年年中中医医研研究究院院研研制制的的青青蒿蒿素素抗抗疟疟药药获获得得我我国国实实施施新新药药审审批批办办法法以以来来的的第第1个个新新药药证证书书。但但是是，由由于于当当时时中中国国还还没没有有专专利利法法，所以，我国所以，我国没有申请发明专利没有申请发明专利。v青青蒿蒿素素是是一一种种高高效效、速速效效、低低毒毒的的新新型型抗抗疟疟药药。本本品品为为脂脂溶溶性性，易易透透过过血血脑脑屏屏障障。在在体体内内代代谢谢很很快快，排排泄泄快快，有有效效血血药药浓浓度度维维持持时时间间短短。主主要要用用于于耐耐氯氯喹喹的的恶恶性性疟疟，包包括括脑型疟的抢救。脑型疟的抢救。v因因有有效效血血药药浓浓度度维维持持时时间间短短，杀杀灭灭疟疟疾疾原原虫虫不不彻彻底底，复复燃燃率率高达高达30%，与伯氨喹合用与伯氨喹合用，可使复燃率降至，可使复燃率降至10%。第31页/共45页v青青蒿蒿素素的的多多种种衍衍生生物物均均是是治治疗疗疟疟疾疾的的有有效效单单体体，国国内外内外公认的首创新药公认的首创新药。v随随着着对对青青蒿蒿素素类类药药物物药药理理作作用用研研究究的的不不断断深深入入，证证实实其其具具有有抗抗疟疟、抗抗孕孕、抗抗纤纤维维化化、抗抗血血吸吸虫虫、抗抗弓弓形形虫虫、抗抗心心律律失失常常和和肿瘤细胞毒性等作用。肿瘤细胞毒性等作用。青蒿素发展史青蒿素发展史v将将青青蒿蒿素素结结构构中中C-10位位羰羰基基还还原原成成羟羟基基得得到到双双氢氢青青蒿蒿素素，进一步烷氧基化得到进一步烷氧基化得到蒿甲醚蒿甲醚，而进行酯化可得到，而进行酯化可得到青蒿琥酯青蒿琥酯。v 1990年年，为为了了控控制制疟疟疾疾对对青青蒿蒿素素的的耐耐药药性性，世世界界卫卫生生组组织织建建议议在治疗中必须将青蒿素同别的抗疟药在治疗中必须将青蒿素同别的抗疟药联合使用联合使用。v2007年年5月月，在在瑞瑞士士日日内内瓦瓦举举行行的的第第60届届世世界界卫卫生生大大会会上上，世世界界卫卫生生组组织织声声明明，单单方方青青蒿蒿素素会会引引发发耐耐药药性性，建建议议在在全全球球范范围围内内推广推广复方类抗疟药复方类抗疟药。第32页/共45页一、青蒿素类药物的基本结构与主要性质一、青蒿素类药物的基本结构与主要性质青蒿素青蒿素Artemisine 双氢青蒿素双氢青蒿素Dihydroartemisinin 青蒿琥酯青蒿琥酯Artesunate 蒿甲醚蒿甲醚Artemether 将青蒿素结构中将青蒿素结构中C-10位羰基位羰基还原成还原成羟基羟基得到得到双氢青蒿素双氢青蒿素(dihydroartemisinin)，进一步，进一步烷烷氧基化氧基化得到得到蒿甲醚蒿甲醚(artemether)，而进行，而进行酯酯化化可得到可得到青蒿琥酯青蒿琥酯(artesunate)。第33页/共45页药物名称药物名称物理性质物理性质鉴别鉴别检查检查含量含量青蒿素青蒿素Artemisine无色针状结晶，味苦。无色针状结晶，味苦。在在丙丙酮酮、乙乙酸酸乙乙酯酯、三三氯氯甲甲烷烷中中易易溶溶，在在甲甲醇醇、乙乙醇醇、稀稀乙乙醇醇、乙乙醚醚及及石石油油醚醚中中溶溶解解，在在水水中中几几乎乎不不溶溶；在在冰冰醋醋酸酸中中易易溶。熔点为溶。熔点为150153 D(无水乙醇无水乙醇)+75o+78o。1.碘化钾试液碘化钾试液-淀粉淀粉2.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应3.HPLC4.IR1.有关物质有关物质(TLC)2.干燥失重干燥失重HPLC法法双氢青蒿素双氢青蒿素Dihydroartemisinin白色针状结晶；无臭，味苦。白色针状结晶；无臭，味苦。在在三三氯氯甲甲烷烷中中易易溶溶，在在丙丙酮酮中中溶溶解解，在在甲甲醇醇或或乙乙醇醇中中略略溶溶，在水中几乎不溶。在水中几乎不溶。熔点为熔点为145150，熔融时同时分解。，熔融时同时分解。1.碘化钾试液碘化钾试液-淀粉淀粉2.香草醛硫酸反应香草醛硫酸反应3.旋光旋光4.IR 1.有关物质有关物质(TLC)2.干燥失重干燥失重3.水分水分4.炽灼残渣炽灼残渣5.重金素重金素HPLC法法青蒿琥酯青蒿琥酯Artesunate白色结晶性粉末；无臭，几乎无味。白色结晶性粉末；无臭，几乎无味。在乙醇、丙酮或三氯甲烷中易溶，在水中极微溶解。在乙醇、丙酮或三氯甲烷中易溶，在水中极微溶解。熔点为熔点为131136(口服用口服用)或或132137(注射用注射用)D(二氯甲烷二氯甲烷)+4.5o+6.5o。1.香草醛硫酸反应香草醛硫酸反应2.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应3.HPLC4.IR 1.酸度酸度2.溶液的澄清度溶液的澄清度3.氯化物氯化物4.有关物质有关物质(HPLC)5.水分水分 6.炽灼残渣炽灼残渣7.重金素重金素HPLC法法蒿甲醚蒿甲醚Artemether白色结晶或结晶性粉末；无臭；味微苦。白色结晶或结晶性粉末；无臭；味微苦。在在丙丙酮酮或或三三氯氯甲甲烷烷中中极极易易溶溶解解，在在乙乙醇醇或或乙乙酸酸乙乙酯酯中中易易溶溶，在在水水中中几乎不溶。几乎不溶。熔点为熔点为8690。D(无水乙醇无水乙醇)+168o+173o。1.碘化钾试液碘化钾试液-淀粉淀粉2.香草醛硫酸反应香草醛硫酸反应3.HPLC4.IR1.氯化物氯化物2.有关物质有关物质(TLC)3.残留溶剂残留溶剂(GC)4.干燥失重干燥失重5.炽灼残渣炽灼残渣HPLC法法青蒿素类药物的物理性质、鉴别、检查及含量测定青蒿素类药物的物理性质、鉴别、检查及含量测定(一一)典型药物的结构与物理性质典型药物的结构与物理性质 第34页/共45页UV吸收特性吸收特性 由于青蒿素类药物分子结构中母核，由于青蒿素类药物分子结构中母核，不具有不具有共轭体系，其紫共轭体系，其紫 外吸收光谱的主要是外吸收光谱的主要是末端吸收末端吸收。但。但C-10由于取代基的不同由于取代基的不同具具 有一定有一定吸收特征吸收特征。(二二)主要化学性质主要化学性质氧化性氧化性 由由于于青青蒿蒿素素类类是是具具有有过过氧氧桥桥的的倍倍半半萜萜内内酯酯类类化化合合物物，这类化合物具有氧化性。这类化合物具有氧化性。旋光性旋光性 青青蒿蒿素素类类药药物物都都均均有有旋旋光光性性，均均为为右右旋旋体体药药物物。青青蒿蒿素素其其比旋度为比旋度为+75o+78o。蒿甲醚其比旋度为。蒿甲醚其比旋度为+168o+173o。水解反应水解反应 青青蒿蒿素素结结构构中中由由于于有有内内酯酯，在在碱碱性性条条件件下下，发发生生水水解解，但但其其 他药物由于母核中没有内酯，没法发生水解。他药物由于母核中没有内酯，没法发生水解。第35页/共45页二、鉴别试验二、鉴别试验(一一)、呈色反应、呈色反应(二二)、吸收光谱特征、吸收光谱特征(三三)、色谱法、色谱法第36页/共45页(一一)呈色反应呈色反应 ChP2010青青蒿蒿素素的的鉴鉴别别：取取本本品品约约5mg，加加无无水水乙乙醇醇0.5ml溶溶解解后后，加加碘碘化钾试液化钾试液0.4ml，稀硫酸，稀硫酸2.5ml与淀粉指示液与淀粉指示液4滴，立即呈紫色。滴，立即呈紫色。ChP2010双双氢氢青青蒿蒿素素片片的的鉴鉴别别：取取本本品品的的细细粉粉适适量量(约约相相当当于于双双氢氢青青蒿蒿素素20mg)，加加无无水水乙乙醇醇2ml使使双双氢氢青青蒿蒿素素溶溶解解，滤滤过过，滤滤液液中中加加碘碘化化钾钾试试液液2ml与稀硫酸与稀硫酸4ml，摇匀，加淀粉指示液数滴，溶液即显蓝紫色。，摇匀，加淀粉指示液数滴，溶液即显蓝紫色。由由于于青青蒿蒿素素类类是是具具有有过过氧氧桥桥的的倍倍半半萜萜内内酯酯类类化化合合物物，这这类类化化合合物物具具有有氧化性氧化性。在酸性条件能将。在酸性条件能将I I-氧化成氧化成I I2 2与淀粉指示液，生成与淀粉指示液，生成蓝紫色蓝紫色。1.1.碘化钾试液碘化钾试液-淀粉反应淀粉反应(过氧桥的氧化反应过氧桥的氧化反应)第37页/共45页(一一)呈色反应呈色反应 含含有有内内酯酯的的化化合合物物、羧羧酸酸衍衍生生物物和和一一些些酯酯类类化化合合物物在在碱碱性性条条件件与与羟羟胺胺作作用用，生生成成羟羟肟肟酸酸；在在稀稀酸酸中中与与高高铁铁离离子子呈呈色色。ChP2010收收载了青蒿素和青蒿琥酯的羟肟酸铁鉴别反应。载了青蒿素和青蒿琥酯的羟肟酸铁鉴别反应。2.2.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 ChP2010青青蒿蒿素素的的鉴鉴别别：取取本本品品约约5mg，加加无无水水乙乙醇醇0.5ml溶溶解解后后，加加盐盐酸酸羟羟胺胺试试液液0.5ml与与氢氢氧氧化化钠钠试试液液0.25ml，置置水水浴浴中中微微沸沸，放放冷冷后后，加加盐盐酸酸2滴和三氯化铁试液滴和三氯化铁试液1滴，立即显深紫红色。滴，立即显深紫红色。ChP2010青青蒿蒿琥琥酯酯的的鉴鉴别别：取取本本品品约约50mg，加加含含7盐盐酸酸羟羟胺胺的的乙乙醇醇溶溶液液(80100)1ml，再再加加乙乙醇醇制制氢氢氧氧化化钾钾试试液液3ml，置置水水浴浴中中加加热热至至沸沸，放放冷冷，