液相色谱硬件基础知识2.pdf

1Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited第二部分硬件基础知识2Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedHPLC简易流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器储液瓶输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器储液瓶数据处理系统脱气机数据处理系统脱气机3Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited储液瓶?由机械性能和化学稳定性好的不锈钢、玻璃或聚四氟乙烯材料制成?使用过程中储液瓶应适当密闭?所有溶剂应先过滤，再装入储液瓶4Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited滤膜类型：滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于DMF，THF，CHCl3等溶剂再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂溶剂前处理-过滤过滤：过滤：0.45 m或更小孔径滤膜或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液5Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：气泡对测定的影响：1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形）柱中气泡使流动相绕流，峰变形3）检测器中的气泡产生基线波动）检测器中的气泡产生基线波动溶剂前处理-脱气6Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited常用脱气方法?超声脱气?减压脱气?在线脱气7Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited脱气机-在线真空脱气脱气机主要由脱气管、真空室和真空泵组成。真空室内的脱气管由特殊的透析材料制成，当溶剂流经脱气管时，溶解在溶剂中的气体穿过管壁被脱出。到泵储液瓶脱气管真空室8Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited8输液泵输液泵性能要求 能在高压下连续工作 输出流量范围宽 输出流量稳定、精确度、重复性高9Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited目的单元流速范围特性和应用目的单元流速范围特性和应用LC-20AD 0.0001-10ml/min 极低脉动，适于半微量0.0001-5ml/min 和 LC-MS分析LC-20AT 0.001-10ml/min 非凡的耐用性，适于常量分析LC-20AB0.0001-10ml/min 极低脉动，适于半微量LC 和 LC-MS分析分析分析LC-15CLC-30A岛津输液泵系列10Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedLC-20ATLC-20AT串联式柱塞往复泵串联式柱塞往复泵选配件支架压力传感器泵头主进口单向阀泵头固定座LC-20AT辅助进口单向阀主泵头副泵头主泵头副泵头单向阀11Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedLC20ADLC-20AD并联式微体积柱塞往复泵并联式微体积柱塞往复泵选配件支架进口单向阀出口单向阀进液口泵头固定座泵头泵头泵头泵头泵头单向阀单向阀压力传感器LC-20AD12Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedLC-20ABLC-20AB压力传感器泵头泵头固定座进液口泵A连接块出口单向阀进口单向阀泵BLC-20AB13Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited柱塞往复泵结构示意图14Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited单向阀结构抛光面球座宝石球单向阀工作原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀出口单向阀进口单向阀泵头单向阀工作原理15Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited洗脱系统组成洗脱系统组成等度洗脱系统梯度洗脱系统梯度时间时间B%等度时间时间B%高压梯度洗脱系统低压梯度洗脱系统16Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited分析时间长分析时间长分析时间长分析时间长分离度差分离度差分离度差分离度差MeOH/H2O=6/4MeOH/H2O=8/2(column:ODS)使用梯度洗脱的原因当采用等度洗脱时：当采用等度洗脱时：17Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited95%30%甲醇浓度甲醇浓度在最短时间内获得最佳的分离在最短时间内获得最佳的分离使用梯度洗脱的原因当采用梯度洗脱时：当采用梯度洗脱时：18Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited梯度洗脱：梯度洗脱：梯度洗脱：梯度洗脱：优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：?溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差?梯度混合的溶剂互溶性要好?梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）?查看空白实验的数据?遵守分析周期。（最初的分析数据不采用）梯度洗脱要点19Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器单一或混合溶剂单一或混合溶剂单一或混合溶剂单一或混合溶剂等度洗脱20Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited高压梯度系统数据处理系统数据处理系统泵泵泵泵泵泵ABC进样器分析柱柱温箱检测器进样器分析柱柱温箱检测器混合器混合器?梯度准确率高?需要2-3个泵?可以不配在线脱气机21Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited低压梯度系统?一台泵最多可使用4种流动相?泵前预混合?需带在线脱气机低压梯度比例阀数据处理系统数据处理系统ABDC输液泵进样器分析柱柱温箱检测器输液泵进样器分析柱柱温箱检测器脱气机混合器混合器22Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?采用“HPLC”级溶剂?避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂?对试样有适宜的溶解度?溶剂粘度要小?与检测器相匹配流动相的选择23Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited水的等级水的等级?纯化水?蒸馏水?去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物波长(nm)纯化水去离子水吸光率24Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedHPLC用水可以通过以下几个方法得到：?专门的纯水机或超纯水机:理想的HPLC用水应为18.2 M的超纯水，并通过0.22 m的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。?去离子水重蒸；?二次或三次重蒸水；不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水水的等级25Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited未注入样品时空白梯度的色谱图水中不纯物的出峰水中不纯物的出峰水中的不纯物保留在柱中，随之被乙腈洗脱水中的不纯物保留在柱中，随之被乙腈洗脱水的等级26Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited有机溶剂的等级?HPLC级?优级纯?分析纯都经过蒸馏和0.45 m的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒）优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过02 m的过滤,且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱有机溶剂的等级27Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited甲醇乙腈正己烷甲醇乙腈正己烷分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图有机溶剂的等级28Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited1.确定最佳分离状态时的流动相pH2.选择具有与流动相的pH相近的pKa的缓冲液（即使浓度稀也具有较强的缓冲能力）3.确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋 酸和柠檬酸的缓冲液）选择缓冲液的步骤29Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited12.327.212.16磷酸6.404.763.13柠檬酸4.87醋酸pK3pK2pK1常用代表性的弱酸的pKa值30Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?使用前必须过滤?使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞：用纯水冲洗30-60 min（1 ml/min），再用甲醇冲洗30 min?易受到细菌和霉菌的影响不能直接用有机溶剂冲洗缓冲盐溶液缓冲液的使用31Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited进样器?手动进样器?自动进样器要求：?无残留?扩散小?进样体积可变?可承受高压32Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited手动进样器的原理图进样状态进样状态装填状态装填状态泵柱子泵柱子2316542316544165416533Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited进样体积检测器响应值进样体积检测器响应值定量环体积的一半3倍定量环体积全量注入部分注入进样量和检测器响应的关系示意图进样量和检测器响应的关系示意图34Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?部分注入：部分注入：一般要求进样量最多为定量环体积的一半，如20l的定量环最多进样10l的样品，并且要求每次进样体积准确、相同?全量注入：全量注入：进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20l的定量环最少进样60至100l的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。部分注入和全量注入35Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited交叉污染产生的原因红色表示残留样品36Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited手动进样方法一般的方法1.在进样状态下清洗针口2.在装填状态下插入微量注射器3.注入样品4.切到进样状态37Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited便捷的方法（不需清洗）1.进样状态下插入微量注射器2.切到装填状态3.注入样品4.切回到进样状态手动进样方法38Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited自动进样器由计算机自动控制定量阀，按预先编制注射样品的操作程序工作39Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited自动进样器清洗（Rinse）：进样针移动到清洗口，针的外壁被清洗液清洗的过程排气（Purge）：排除管路中的气泡和更换旧流动相的过程40Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited色谱柱41Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited常用色谱柱?反相C18(ODS)、C8、C4、苯基、TMS、氰基?正相硅胶、氰基、氨基、二醇基?离子交换色谱阳离子交换剂 强阳离子交换剂(SCX)R-SO3-弱阳离子交换剂(WCX)R-COO-阴离子交换剂 强阴离子交换剂(SAX)NR4+弱阴离子交换剂(WAX)DEAE?体积排阻色谱苯乙烯二乙烯基苯共聚物、葡聚糖，琼脂糖，聚丙烯酰胺42Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited分离模式的选择?反相色谱：第一选择?反相离子对色谱/正相色谱：第二选择?特殊：?高分子量化合物：聚合物、蛋白或糖类?无机离子?光学异构体43Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited103非极性高极性中等极性非极性高极性中等极性分子量分子量104105非水相非水相水相正相水相正相反相反相离子交换离子交换离子对反相离子对反相体积排阻体积排阻色谱柱的选择44Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited色谱柱的连接死体积可能会引起分离度变差和重现性变差等问题管线公螺母死体积死体积好的连接差的连接色谱柱45Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited色谱柱的使用新色谱柱使用前：?最好用强溶剂在低流量下(0.2-0.3 mL/min)冲洗 30 min，长时间未用的分析柱也要同样处理?新色谱柱先测柱效，并保留色谱图和实验条件。定期检测柱效46Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited色谱柱的使用1.流动相：高纯度，过滤pH范围有机溶剂与色谱柱匹配互溶、并能溶解样品2.净化样品3.使用保护柱：与色谱柱填料、内径一致避免色谱柱污染47Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited色谱柱的使用4.分离条件流速、柱温、梯度的变化幅度5.定期使用强溶剂冲洗柱子。6.使用缓冲盐后，要先用含10%甲醇的水溶液冲洗，再用有机溶剂冲洗。7.流动相正相反相转换时用异丙醇过渡48Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited色谱柱的存放?存放前充分冲洗?合适的存放溶剂?接好堵头，避免固定相干涸?存放环境49Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?分析结果重现性好?提高柱效?降低柱压?保证检测稳定性柱温箱50Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited柱温箱CTO-20A/AC 空气强制循环式CTO-15C模块加热式CTO-30ACTO-10AS51Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited液相色谱检测器的选择?样品的性质?分离目的不同，对检测的要求不同?定量：高选择性、高灵敏度?定性或制备：通用性52Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited常用检测器?紫外可见光检测器(UV)?二极管阵列检测器(PDA)?荧光检测器(RF)?示差折光检测器(RID)?电导检测器(CDD)?蒸发光散射检测器(ELSD)?质谱检测器(LCMS)53Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedEinEoutA=Cl=-log(Eout/Ein)lC:浓度朗伯-比耳定律(A:吸光度)(A:吸光度)样品池紫外可见光检测器54Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited样品池样品池参比池参比池光电二极管光电二极管EinEinEin光栅光栅D2/W 光源光源 Eout紫外可见光检测器光电二极管光电二极管55Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited紫外可见光检测器56Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收?定量基础：朗伯-比耳定律，A CL?优点：1）灵敏度高2）对温度和流速不敏感3）可用于梯度洗脱?缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质紫外检测器57Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited双波长检测双波长检测饮用水中4种农药残留双波长分析分析条件：?色谱柱：Shim-pack VP-ODS(150 mmL.4.6 mmI.D.)?流动相：Acetonitrile/50 mM KH2PO4(pH3.0)=55/45(v/v%)?流速：1.0 mL/min?柱温:40C?检测:230 nm,270 nm?进样:10 L 日本饮用水标准（2004年4月起实施）1.磺草灵（asulam）2.甲基硫菌灵（thiophanate-methyl）3.环草隆1（siduron）4.环草隆2（siduron）5.依普同（iprodione）58Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited波长切换波长切换59Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited波长扫描波长扫描60Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?启动仪器或开灯后，需要一定的时间使基线稳定?检查流通池与管路有无漏液?检测时，请关闭前面板?清洗流通池，防止堵塞?标准流通池：12 L，耐压12 MPa（半微量流通池：2.5 L）?氘灯：2000小时，不要频繁的开关（3小时）紫外检测器61Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited二极管阵列检测器62Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited样品池二极管阵列光栅样品池二极管阵列光栅D2/W 灯灯每一组分可在每一波长处得到一吸光度值每一组分可在每一波长处得到一吸光度值二极管阵列检测器63Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited时间时间波长波长吸光度吸光度色谱色谱光谱光谱二极管阵列检测器64Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited二极管阵列检测器65Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?采集三维谱图，可以发现单波长检测时未检测到的峰?光谱定性，谱库搜索?峰纯度检验二极管阵列检测器66Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?启动仪器或开灯后，需要一定的时间使基线稳定?检查流通池与管路有无漏液?检测时，请关闭前面板?清洗流通池，防止堵塞?标准流通池：10 L，耐压12 MPa（半微量流通池：2.5 L）?氘灯：2000小时，不要频繁的开关（3小时）二极管阵列检测器67Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited+h 1h 2+*AA*h 1h 2激发波长激发波长发射波长发射波长荧光荧光荧光荧光*荧光检测器68Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited荧光检测器氙灯氙灯样品池样品池光电倍增管光电倍增管光栅光栅69Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited荧光检测器70Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测?优点：1）灵敏度高，是最灵敏的检测器之一2）选择性好3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱?缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质或能经过衍生化反应产生荧光的物质?可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）或氨基酸、脂肪酸等需衍生后检测样品荧光检测器71Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?启动仪器或开灯后，需要一定的时间使基线稳定?检查流通池与管路有无漏液?检测时，请关闭前面板?清洗流通池，防止堵塞?温度上升，荧光强度下降（常温附近温度变化超过1oC时，有些化合物强度变化达到5%）?标准流通池：12 L，耐压2 MPa?氙灯：2000小时（RF-20AxL），不要频繁的开关荧光检测器72Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited荧光检测器应用氨基酸检测氨基酸检测氨基酸检测氨基酸检测OPAOPA衍生衍生衍生衍生CHOCHOo-phthalaldhyde(OPA)+R-NH2N-RAA脂肪酸检测脂肪酸检测脂肪酸检测脂肪酸检测ADAMADAM衍生衍生衍生衍生CHN29-anthryldiazomethane(ADAM)+R-COOHCH2OCOR73Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited0.05.010.015.020.025.030.035.040.045.050.055.060.0min0100200300400500600700mV检测器 A:Ex:350nm,Em:450nm TaurineAspThrSerGluProGlyAlaCysValMetisoLeuLeuTyrPheHisLysAmmoniaArg各组分浓度：0.02 mol/mL，进样10 L氨基酸检测OPA柱后衍生74Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited光学系统示差折光检测器钨灯准直镜狭缝物镜狭缝反射镜样品池硅光电池调零透镜75Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited示差折光检测器76Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited示差折光检测器77Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。?优点：通用型检测器，?缺点：1）对温度变化敏感2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测3）属于中等灵敏度的检测器示差折光检测器78Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?检测时，请关闭前面板?清洗流通池，防止堵塞?流通池：9 L，耐压2 MPa进口：63.5 L出口：280.2 L?钨灯：20000小时示差折光检测器79Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited糖分析例分析条件?色谱柱:Shim-pack CLC-NH2?流动相:乙腈/水=7/3?流速:1.0 mL/min?温度:室温峰1.甘油2.木糖3.果糖4.葡萄糖5.蔗糖6.甘露糖7.乳糖80Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedI V LAAK(电导电导)=I A/E V=A cm2/L cm x k(k:电导率电导率)k=(I/E)x(L/A)k=(I/E)x(L/A)电极电极电导检测器电极81Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导率的变化来测定电离物质含量，广泛应用于离子色谱法?优点：对流动相流速和压力的改变不敏感?缺点：对温度变化敏感（温度每升高1，电导率增加2%-2.5%)?用途：主要用于离子色谱，检测无机和有机离子电导检测器82Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?清洗流通池，防止堵塞?流通池：0.25 L，耐压2.9 MPa电导检测器83Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited分析条件?色谱柱:Shim-pack IC-A3?流动相:8.0 mM p-hydroxybenzoic acid 3.2 mM Bis-Tris?流速:1.5 mL/min?温度:40?进样体积:100 L峰1.F-(1.4 ppm)2.Cl-(10200 ppm)3.NO2-(10 ppm)4.Br-(43 ppm)5.NO3-(44 ppm)6.SO42-(431 ppm)海水中阴离子分析例84Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited阳离子分析例分析条件?色谱柱:Shim-pack IC-C1?流动相:5 nM 硝酸溶液?流速:1.5 mL/min?温度:40oC?进样：50 L+2+2+85Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited蒸发光散射检测器雾化蒸发检测流动相载气光源光电倍增管雾化器检测池光电倍增管LED漂移管86Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited?原理:流出物在检测器中被高速氮气喷成雾状液滴，溶剂挥发后，溶质形成微小颗粒，被载气带到检测系统，进入散射室中，检验散射光的强度。?优点:消除了溶剂干扰以及温度变化带来的基线漂移，可梯度洗脱，灵敏度高，是HPLC的通用型检测器?缺点：不能使用非挥发性缓冲盐做流动相，如磷酸盐蒸发光散射检测器87Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited蒸发光散射检测器?废气不能直接排放在室内?如果流动相中含有机溶剂，使用惰性气体做雾化气?避免使用在工作温度下能引起爆炸的溶剂和雾化气?流动相中不使用非挥发性盐?雾化气压力不要超过450 kPa?先开气，后开泵?保证雾化器虹吸出口充满液体?不要打开前门?LED灯：5000小时88Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.LimitedPEG-1000分析例89Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited质谱检测器?强大的定性和选择性能力?多组份样品的准确定性?未充分分离组份峰的鉴别?消除杂质干扰?可作为便捷的定性分析?用于合成和衍生反应的研究?作NMR预分析的质谱鉴定90Shimadzu International Trading(Shanghai)Co.Limited人造色素质谱图色谱柱:色谱柱:Shim-pack XR-ODS(50 mmL x 2.0 mmI.D.Particle size:2.2 m)流动相:流动相:A;20mmol/L NH4Ac(pH 4.7)B;20mmol/L NH4Ac(pH 4.7)/A CN=1/1时间程序:时间程序:10%B(0 min)-100%B(5.0 min)流速:流速:0.5 mL/min进样体积:进样体积:5 L柱温:柱温:40 C色谱柱:色谱柱:Shim-pack XR-ODS(50 mmL x 2.0 mmI.D.Particle size:2.2 m)流动相:流动相:A;20mmol/L NH4Ac(pH 4.7)B;20mmol/L NH4Ac(pH 4.7)/A CN=1/1时间程序:时间程序:10%B(0 min)-100%B(5.0 min)流速:流速:0.5 mL/min进样体积:进样体积:5 L柱温:柱温:40 C扫描范围 m/z 200-12001:tartrazine2:amaranth3:indigo carmine,4:new coccine5:sunset yellow FCF 6:allura red AC7:fast green FCF8:brilliant blue FCF 9:acid red10:phloxine B 11:erythrosine 12:rose bengal0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0min0.01.02.03.04.05.06.07.08.0(x1,000,000)123456789101112m/z 467m/z 537m/z 421m/z 407m/z 451m/z 763m/z 747m/z 557m/z 784.5m/z 834.5m/z 972.5TIC