高效液相色谱仪基本原理、应用及常见故障.pdf

69医疗设备信息19卷8期 2004.8收稿日期 2004-02-16高效液相色谱仪基本原理、应用及常见故障鞠毅1,夏桂荣1,车燕妮2,都爱香1(1.威海市立医院,山东威海264200;2.威海市疾病控制中心,山东威海264200)摘要本文介了高效液相色谱仪的系统组成、工作原理、应用及岛津L C-10A T高效液相色谱仪常见故障维修。关键词高效液相色谱;色谱柱;故障维修中图分类号 TH833文献标识码B文章编号1007-7510(2004)08-0069-02Principle,application and maintenace of high performance liquid chromatographyJ U Yi1,XIA Gui-rong1,CHE Yan-ni2,DU Ai-xiang1(1.Weihai Municipal Hospital,Weihai Shandong 264200,China;2.Center for Disease Control of Weihai,Weihai Shandong264200,China)Abstract:This paper introduces the system configaration,principle and application of high performance liquid chro2matography and maintenace of L C-10A T.Key words:high performance liquid chromatography;chromatography column;maintenace1高效液相色谱仪的系统组成、工作原理高效液相色谱仪的系统流程图如图1所示。由流程图可以看出系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。2高效液相色谱仪的应用高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合,HPL C所达到的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。HPL C成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPL C具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱-质谱连用技术受到普遍重视,如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等;液相色谱-红外光谱连用也发展很快,如在环境污染分析测定水中的烃类,海水中的不挥发烃类,使环境污染分析得到新的发展。3高效液相色谱仪常见故障处理L C-10A T高效液相色谱仪是日本岛津公司1996年的产品,检测器为可变波长紫外检测器,色谱柱为岛津公司的ODS-C18,大连依利特的ODS-C18。八年的日常工作中遇到了几种故障,如故障1经咨询岛津公司的工程师后,得以解决;故障2、故障5是频繁碰到的问题等,特作总结如下:故障1流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purge键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中1236小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键,清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡图1高效液相色谱仪的系统流程图设备维修70医疗设备信息19卷8期 2004.8于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.03.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。故障2柱压高原因(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;(2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用4050 的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。故障3既无压力指示,又无液体流过1。原因(1)泵密封垫圈磨损;(2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。故障4压力波动大,流量不稳定1。原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气2。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗1。故障5出峰不佳,峰分叉。原因(1)色谱柱被污染;(2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平2。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。故障6峰面积重复性不佳。原因(1)进样阀漏液;(2)加样针不到位。处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJ ECT状态,以保证进样量的准确。日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要,如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。参考文献1朱彭龄,云自厚,谢光华.现代液相色谱M.兰州:兰州大学出版社,1989,1263-264.2杨进,冯念伦.高效液相色谱夜原理、临床应用及常见故障处理J.医疗设备信息.2001,16(1):18-19.(上接第74页)理:壁滤波器A16首先对心脏壁的低频回波信号进行滤波,频谱估算模块A15接受A16的信号并对其进行频谱估算后送CPU和图像总线;显示组(D ISPLA Y GROU P)中A7从图像总线上获取相关信息建立彩色M型的图送往视频总线(V IDEO BU S);而彩色接口板A13从图像总线上获取有关信息,经双缓冲存储器A12、彩色输出地址发生器A14等模块的处理后产生的2D彩色多普勒信号通过视频总线再送到视频处理PCB A8上。本故障现象是2D多普勒的血流信号被彩色的干扰信号所取代,由于彩色M型信号是正常的,这时应主要考虑A12、A13和A14的可能。通过仔细检查,发现A12与A13、A14接头P4接触不好,处理好该接触点,故障清除。结束语现代医疗设备尤其是高档进口医疗设备,功能繁多、电路复杂,通常没有详细的电路图,确实给维修工作带来很大的不便。但是,只要我们工程技术人员动脑筋、想办法,是能够以较少的花费甚至是零维修费用而解决问题;另外,同一个故障现象,产生的原因会有所不同,解决的方法也不相同,本文意在抛砖引玉。设备维修