高效液相色谱法测定甲硝唑中甲硝唑含量的不确定度报告.doc

高效液相色谱法测定甲硝唑中甲硝唑含量的不确定度报告
1. 依据的技术标准
《中国药典》2015年版二部。
2. 测量原理
高效液相色谱法的基本原理是在高压下，利用不同组分与固定相和液体流动相作用力不同，实现分离的的色谱方法。高压输液泵将流动相泵入装有固定相的色谱柱，对由进样器注入色谱柱的待分离组分进行分离，分离后的各组分依次进入检测器，检测信号通过积分仪或数据处理系统记录与处理，实验各组分定性与定量分析。
3. 使用的仪器和试剂
3.1 岛津公司LC-20AT型高效液相色谱仪，经检定合格。
3.2 甲硝唑对照品，由中国食品药品检定研究院提供，含量100%。
3.3 经检验合格容量瓶100mL，A类，在20℃时，允差±0.1mL；容量瓶50mL，A类，在20℃时，允差±0.05mL；移液管5ml，A类，允差±0.015mL。
3.4电子天平最大允许误差为: ±0.5mg，电子天平最小鉴别力为0.00001g。
4. 测量程序
4.1 对照品溶液的制备：
精密称取甲硝唑对照品①0.02602g ②0.02552g，分别置100mL容量瓶中，用流动相甲醇：水（20:80）稀释至刻度，摇匀。
4.2 供试品溶液的制备
取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于甲硝唑0.25g），置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使甲硝唑溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
4.3 测定法：精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
5. 数学模型和不确定度传播率
甲硝唑片中甲硝唑的含量测定的数学模型
(1)
式中，C样——被测样品的浓度，mg/mL；
C对——甲硝唑对照品浓度，mg/mL；
A样——被测样品中甲硝唑的峰面积；
A对——甲硝唑对照品的峰面积；
将输入量C对、A样、A对和C样的重复性因素组合在一起，归入输出量含量（%）的重复性因素，因此不需分别评定各输入量重复性引入的不确定度分量，而是直接评定测量结果含量（%）的重复性引入的不确定度分量。为此将式(1)改写如下
(2)
式中，fr是测量重复性，其数值为1。
6. 不确定度来源
样品中甲硝唑含量（%）的不确定度来源有4个方面：
6.1电子天平引入的相对标准不确定度ux：用电子天平多次称量1g标准砝码测量结果进行统计分析引入的测量不确定度μ1，即A类测量不确定；电子天平制造误差引入的测量不确定度μ2；电子天平最小鉴别力引入的测量不确定度μ3。
6.2对照品溶液制备引入的相对标准不确定度ur(CS)，包括包括3个来源：对照品的含量按100%计算，说明书未标明不确定度，未引入相对标准不确定度；稀释中容量瓶引入的相对标准不确定度ur(V1)，其包含定容、温度影响和重复性。重复性归入到输出量含量（%）的重复性fr中。因此只需要评定100mL容量瓶体积定容和温度引入的标准不确定度分量。实验室温度可控制在(20±5)℃，引起的体积相对变化约为±0.1％，可忽略不计。因此只需要评定体积定容引入的标准不确定度分量。
6.3供试品溶液制备引入的相对标准不确定度ur(Cx)，包括2个方面，配制过程中100mL、50mL容量瓶引入的相对标准不确定度分别为ur(V1)、ur(V2)，其包含定容、温度影响和重复性。重复性归入到输出量含量（%）的重复性fr中。因此只需要评定100mL、50mL容量瓶体积定容和温度引入的标准不确定度分量；稀释中5mL移液管引入的相对标准不确定度ur(V3)；其包含定容、温度影响和重复性。重复性归入到输出量含量（%）的重复性fr中，实验室温度可控制在(20±5)℃，引起的体积相对变化约为±0.1％，可忽略不计。因此只需要评定体积定容引入的标准不确定度分量。
6.4测量重复性fr引入的相对标准不确定度ur(fr)。
7. 标准不确定度评定
7.1 称量过程引入的测量不确定度Ux评定
1）电子天平多次称量1g标准砝码，对统计数据进行分析引入的测量不确定度，即A类评定μ1
用电子天平测1g标准砝码数据如下：
0.99998(g)、0.99983g)、1.00006(g)、1.00003(g)、0.99996(g)、1.00000(g)、1.00002(g)
0.99998(g)、1.00005(g)、1.00001(g)
根据公式获得电子天平单次测量引入的不确定度为：
（n=10）
μ1=0.07（mg）
2）电子天平最大允许误差引入的的测量不确定度μ2（取均匀分布）
电子天平最大允许误差为: ±0.5mg
则测量不确定度为：

3）电子天平最小鉴别力引入的测量不确定度μ3（取均匀分布）
电子天平最小鉴别力为0.01mg
则测量不确定度为：

上面各分量互不相关，灵敏系数为1，则相对测量不确定度为：

7.2 对照品溶液制备引入的相对标准不确定度ur(CS)
7.2.1 对照品的含量按100%计算，说明书未标明不确定度，未引入相对标准不确定度。
7.2.2容量瓶引入的相对标准不确定度ur(V1)
1) 稀释使用容量瓶100mL，A类，在20℃ 时。允差±0.1mL，半宽a=0.1mL，服从三角分布，包含因子k=，体积校准引入的标准不确定度
mL
2) 温度影响。容量瓶已经在20℃校准，而实验室的温度在20±5℃之间变化。水的体积膨胀系数为2.1×10-4℃-1，由温度效应产生的体积变化为±(100×5×2.1×10-4)=±0.105mL。假设服从均匀分布，区间半宽度为aV1)=0.105mL，包含因子为k(V1)=。由此 引起的标准不确定度u2(V1)为
mL
3)容量瓶体积引入的标准不确定度容量瓶体积定容和温度影响2个不确定度分量互不相关，其合成标准不确定度u(V1)采用方和根方法合成得到
mL
V1=100mL容量瓶定容的相对合成标准不确定度μr(V1)为

7.2.3 对照品溶液的制备引入的相对不确定度为ur(CS)，对照品浓度C0、容量瓶体积V1、2个分量互不相关，其合成相对标准不确定度ur(CS)采用方和根方法合成得到

7.3 供试品溶液制备引入的相对标准不确定度ur(Vx)
7.3.1容量瓶引入的相对标准不确定度ur(V1)、ur(V2)
（1）稀释使用容量瓶100mL，其合成标准不确定度合成u(V1)为0.0726 mL。V1=100mL容量瓶定容的相对合成标准不确定度ur(V1)为

（2）稀释使用容量瓶50mL，A类，在20℃ 时。允差±0.05mL，半宽a=0.05mL，服从三角分布，包含因子k=，体积校准引入的标准不确定度u1(V2)

(3)温度影响。容量瓶已经在20℃校准，而实验室的温度在20±5℃之间变化。水的体积膨胀系数为2.1×10-4℃-1，由温度效应产生的体积变化为±(100×5×2.1×10-4)=±0.105mL。假设服从均匀分布，区间半宽度为a(V2)=0.105mL，包含因子为k(V2)=。由此 引起的标准不确定度u3(V2)为

(4) 50mL容量瓶体积引入的标准不确定度容量瓶体积定容和温度影响2个不确定度分量互不相关，其合成标准不确定度u(V2)采用方和根方法合成得到

V2=50mL容量瓶定容的相对合成标准不确定度ur(V2)为

7.3.2 稀释用移液管引起的相对标准不确定度ur(V3)，稀释样品溶液采用5mL移液管，其相对允差±0.015mL，半宽 a=0.015mL，服从三角分布，包含因子k=，引入的相对标准不确定度

7.3.3 供试品溶液的制备引入的相对不确定度为ur(Cx)，容量瓶体积V1、V2，稀释用移液管V3，3个分量互不相关，其合成相对标准不确定度ur(Cx)采用方和根方法合成得到

7.4 测量重复性引入的相对标准不确定度ur(fr)预评定时进行6次独立测量，测量重复性导致的标准不确定度评定如表1：
测量结果的算术平均值：Cx=98.19%
表2 甲硝唑含量测量结果一览表(单位%)
序号
1
2
3
4
5
6
取样量（g）
0.3365
0.3374
0.3382
0.3364
0.3362
0.3366
测量结果Cxi
98.26
99.26
98.22
97.81
97.41
98.20
应用贝塞尔公式计算单次测量的实验标准差
0.617%

测量结果由2次平行测量的算术平均值给出，故其重复性引入的标准不确定度为

测量重复性引入的相对标准不确定度

8. 合成标准不确定度评定
样品中甲硝唑含量测定的合成相对标准不确定度

本次试验Cx=98.19%，样品中甲硝唑含量测定的合成标准不确定度
Uc(Cx)=98.19%×0.824%=0.809%
9. 扩展不确定度评定
取包含因子k=2，则扩展不确定度如下：
U=KUc(Cx)=2×0.809%=1.618% 修约为1.62%
10. 报告测量结果和扩展不确定度
用高效液相色谱法测定甲硝唑片中甲硝唑含量测定结果为Cx=98.19%，扩展不确定度U=1.62%；k=2。
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