ACQUITY UPLC快速入门指南.pdf

ACQUITY UPLC 系统快速入门指南系统快速入门指南 715030825MD/修订版修订版 C版权所有版权所有 Waters Corporation 2006。保留所有权利。保留所有权利。版权声明版权声明 200406 WATERS CORPORATION。在美国和爱尔兰印刷。保留所有权利。未经出版商的书面允许，不得以任何形式转载本文档或其中的任何部分。本文档中的信息如有更改，恕不另行通知，不应认为是 Waters Corporation 的义务。Waters Corporation 对本文档中可能出现的任何错误不负任何责任。本文档在出版时被认为是完整并且准确的。任何情况下，对与使用本文档有关或因使用本文档而导致的偶发或继发的损害，Waters Corporation 不负任何责任。Waters Corporation34 Maple StreetMilford,MA 01757USA商标商标Millennium 和 Waters 是注册商标，ACQUITY UPLC、eCord、Empower、MassLynx 和 nanoACQUITY UPLC 是 Waters Corporation 的商标。PharMed 是 Saint-Gobain Ceramics&Plastics,Inc.的注册商标。Windows 是 Microsoft Corporation 的注册商标。其它商标或注册商标均为其各自所有者的专有资产。iii客户评价客户评价Waters 的技术交流部门恳请您告诉我们您在该文档中所遇到的任何错误或向我们提出改进建议。请协助我们了解您最希望从文档中获得什么内容，让我们可以不断改进其准确性及可用性。我们会认真对待收到的每条客户意见。您可以通过 tech_ 与我们联系。Waters Corporation34 Maple StreetMilford,MA 01757USAiv安全注意事项安全注意事项用于 Waters 仪器的某些试剂和样品可能会产生化学、生物和放射性危险。务必了解您使用的所有物质的潜在危险。始终遵守美国食品及药物管理局出版的“优良实验室规范”(GLP)指导原则，并咨询所在组织的安全代表。开发方法时，请遵照“American Journal of Medical Technology（美国医疗科技期刊）”(1978)44 卷第 1 期 3037 页上的“Protocol for the Adoption of Analytical Methods in the Clinical Chemistry Laboratory”。此协议包含实现系统性能和方法性能所需的完善操作步骤和方法。安全忠告安全忠告请参阅 Waters ACQUITY UPLC 系统操作员指南的附录 A 以查看警告和注意事项综合列表。操作操作 ACQUITY UPLC 系统系统操作 ACQUITY UPLC 系统时，请遵照标准质量控制程序和本部分介绍的指导原则。符号符号定义符号符号定义欧盟授权代表。CE 符号确认某产品符合所有对其适用的欧盟指令。供体外诊断使用。EC REP IVD v设计用途设计用途Waters ACQUITY UPLC 系统适用于分析混合物并将分离的样品引入质谱仪。开发方法时，请遵照“American Journal of Medical Technology（美国医疗科技期刊）”(1978)44 卷第 1 期 3037 页上的“Protocol for the Adoption of Analytical Methods in the Clinical Chemistry Laboratory”。此协议包含实现系统性能和方法性能所需的完善操作步骤和方法。校正校正要校正 UPLC 系统，请遵照可接受的使用至少五个标准样生成标准曲线的校正方法。标准样的浓度范围应覆盖质量控制样本、典型标本和非典型标本的全部范围。要校正质谱仪，请参阅正在校正的仪器的操作员指南的校正部分。质量控制质量控制定期运行三个质量控制样本，分别代表正常水平以下、正常水平和正常水平以上的化合物。确保质量控制样本的结果在允许范围内，并在每天、每次测试时都评估其精确度。质量控制样本的结果超出范围时搜集的数据可能无效。在您确定仪器的运行状态令人满意之前，请勿报告这些数据。分析来自复杂基质（如土壤、组织、血清/血浆、全血等）的样品时，请注意基质组分可能对 LC/MS 结果产生不良影响、增强或抑制离子化。为将此类基质效应降至最低，Waters 建议采用以下措施：进行仪器分析之前，通过适当的样品预处理（例如蛋白质沉淀、液/液萃取(LLE)或固相萃取）消除基质干扰。尽可能使用与基质一致的校正液和质量控制样品校验方法的准确性和精确度。使用一种或多种内标化合物，最好是同位素标记的分析物。根据欧盟体外诊断设备指令 98/79/EC，ACQUITY UPLC 系统获得了 CE认证。警告：警告：ACQUITY UPLC 系统仅供经过培训、有资格的实验室人员用于体外诊断。viIVD 授权代表信息授权代表信息IVD 授权代表授权代表Waters Corporation(Micromass UK Limited)已在 Market Towers,1 Nine Elms Lane,London,SW8 5NQ 的英国药物及保健产品管理局(MHRA)注册。参考号为 IVD000167。Waters Corporation(Micromass UK Ltd.)Floats RoadWythenshaweManchester M23 9LZUnited Kingdom电话：电话：[phone]传真：传真：[phone]联系人：联系人：质量经理目录vii安全注意事项安全注意事项.iv 安全忠告.iv操作操作 ACQUITY UPLC 系统系统.iv 符号.iv 设计用途.v 校正.v 质量控制.vIVD 授权代表信息授权代表信息.vi IVD 授权代表.vi1 系统概述系统概述.1-1仪器、组件和数据系统仪器、组件和数据系统.1-2二元溶剂管理器二元溶剂管理器.1-4 二元溶剂管理器工作原理.1-5样品管理器样品管理器.1-6 样品流动方式.1-6色谱柱加热器色谱柱加热器.1-7可选样品组织器可选样品组织器.1-8光学检测器光学检测器.1-9 TUV 检测器.1-9 PDA 检测器.1-9 ELS 检测器.1-9 中值基线过滤器.1-9数据系统数据系统.1-10 Empower 软件.1-10 MassLynx 软件.1-10色谱柱色谱柱.1-11 eCord 色谱柱芯片.1-11目录目录viii目录FlexCart.1-12有关详细信息有关详细信息.1-122 准备系统硬件准备系统硬件.2-1启动系统启动系统.2-2监视启动测试监视启动测试.2-2监测系统仪器监测系统仪器 LED.2-3 电源 LED.2-3 状态 LED.2-3准备二元溶剂管理器准备二元溶剂管理器.2-5 执行密封清洗灌注.2-5 灌注二元溶剂管理器.2-7 灌注干燥的二元溶剂管理器.2-7 灌注湿二元溶剂管理器.2-9准备样品管理器准备样品管理器.2-12 选择弱清洗和强清洗溶剂.2-12 灌注样品管理器.2-14 清洗样品管理器针头.2-15 定性针头密封.2-17 定性针头和样品定量环体积.2-18 在样品管理器中加载样品板.2-19 选择最佳样品进样模式.2-20 安装样品管理器遮光板.2-22准备样品组织器准备样品组织器.2-24 启动通信.2-24 加载样品板.2-25 显示样品板信息.2-28准备检测器准备检测器.2-29 准备 TUV 检测器.2-29调整色谱柱调整色谱柱.2-32关闭系统关闭系统.2-33 分析之间.2-33 关闭不到 72 小时的时间.2-34 关闭 72 小时以上的时间.2-34目录ix3 配置系统软件配置系统软件.3-1配置配置 Empower.3-2 启动 Empower 并登录.3-2 选择系统仪器.3-2 关于二元溶剂管理器控制面板.3-4 关于样品管理器控制面板.3-6 关于 TUV 检测器控制面板.3-7从从 Empower 启动启动 ACQUITY UPLC 控制台控制台.3-9配置配置 MassLynx 软件软件.3-10从从 MassLynx 软件启动软件启动 ACQUITY UPLC 控制台控制台.3-114 检验系统操作检验系统操作.4-1准备系统准备系统.4-2创建测试方法创建测试方法.4-4 创建仪器方法.4-4 创建样品组方法.4-8执行梯度性能测试执行梯度性能测试.4-9x目录1-11系统概述系统概述本节介绍 ACQUITY UPLC 系统的组件和功能。目录：主题页码目录：主题页码仪器、组件和数据系统1-2二元溶剂管理器1-4样品管理器1-6色谱柱加热器1-7可选样品组织器1-8光学检测器1-9数据系统1-10色谱柱1-11 FlexCart1-12有关详细信息1-121-2系统概述仪器、组件和数据系统仪器、组件和数据系统ACQUITY UPLC 系统包括二元溶剂管理器、样品管理器、色谱柱加热器、检测器（可调紫外线、光电二极管阵列或蒸发光散射）及专用 ACQUITY UPLC 色谱柱。将小颗粒化学物质用于 UPLC 系统色谱会产生较窄的峰。为保持这些窄峰，必须用较小的检测池体积、尽可能小的管路体积和专用的接头来控制额外的频带扩展。窄峰宽度有时可能需要更高的数据速率。TUV、PDA 和 ELS 检测器每秒最多可采集 80 个数据点。二元溶剂管理器和进样器产生的压力最高可达 103421 千帕（1034 巴，15000 psi），并能生成具有最小梯度延迟的高压梯度。流量范围的上限为 2 毫升/分钟。样品管理器可容纳两个微孔板形式的样品板或全高样品板形式的 2 mL 样品瓶。可选的样品组织器将系统容量增加到了 22 个微孔板（样品组织器中 21 个，样品管理器中一个）或八个样品瓶架（样品组织器中七个，样品管理器中一个）。系统由 Waters Empower 色谱软件或 MassLynx 质谱软件控制。仪器、组件和数据系统1-3Waters ACQUITY UPLC 系统系统溶剂盘检测器（可选）色谱柱加热器样品管理器二元溶剂管理器样品组织器（可选）1-4系统概述二元溶剂管理器二元溶剂管理器二元溶剂管理器是一个在整个系统中移动溶剂的高压泵。它以分析流量提供稳定（无脉冲）的溶剂流。二元溶剂管理器在 103421 千帕（1034 巴，15000 psi）的压力下以 1 毫升/分的流量输送溶剂，在 62053 千帕（621 巴，9000 psi）的低压力下最高可以 2 毫升/分的流量输送溶剂。溶剂管理器可同时抽取两种溶剂。二元溶剂管理器1-5二元溶剂管理器工作原理二元溶剂管理器工作原理溶剂管理器的两个独立泵系统，A（左）和 B（右）都包含两个线性驱动传动装置（左和右）。每个左右传动装置对都包含一个单独的往复式“串行”泵，可输送精确流量的单溶剂流。两个泵系统在过滤器/T 形混合器中混合它们的两种溶剂。溶剂混合物从这里流入样品管理器。色谱软件通过改变泵 A 对泵 B 的相对流量来控制两种溶剂的混合比率。每个泵头的压力传感器将压力数据传输到溶剂管理器，管理器固件在泵循环期间测量泵头压力。这样，溶剂管理器就可独立地预压缩 A 和 B 部分的溶剂，从而确保一致的溶剂输送，并将泵引起的检测器基线干扰降至最低。1-6系统概述样品管理器样品管理器ACQUITY UPLC 样品管理器将其从微孔板或样品瓶中吸入的样品注入色谱液流。定位装置使用探针访问样品位置并从这些位置吸入样品。在针头溢出预加载模式下，样品管理器可在大约 15 秒内执行进样。第一个进样需要附加的额外时间。样品管理器可容纳符合 ANSI 标准（最大高度=2.2 英寸，包括上盖）的标准底面的样品板，即 5.03 0.02 英寸 3.365 0.02 英寸。您可以设定这些样品板和样品瓶架的任意组合，以自动进行样品处理。样品通过前门或可选的样品组织器装入样品管理器，后者在两台仪器间往复传输样品。在 25 C(77 F)或更低的环境温度下，样品管理器可将样品温度保持在 4 到 40 C（39.2 到 104 F）之间的任何温度。样品流动方式样品流动方式在缺省模式下，需要带针头溢出的不充满定量环，样品管理器针头滑架移动到特定的孔位置并从气隙中吸取。不锈钢刺针穿透孔盖并降至孔中。样品针头从刺针中露出并伸入样品，吸入的样品体积等于指定的进样体积加 3.0 微升（2.0 微升的预采样体积和 1.0 微升的后采样体积）。样品注射器通过样品针头和进样阀继续抽取样品等分，直至预采样和样品进样体积通过进样阀。启动阀，将样品定量环切换到装入位置。样品被推回针头，进样体积被推进样品定量环。样品定量环移动到进样位置，样品被泵输送到色谱柱。色谱柱加热器1-7色谱柱加热器色谱柱加热器色谱柱加热器为模块化设计，其底面积与样品管理器的底面积相同。因此，它可以附在样品管理器顶部并起到该仪器的顶盖的作用。色谱柱加热器的前室可容纳 4.6 毫米内径 150 毫米长以内的 Waters 色谱柱。色谱柱置于 U 型塔盘中，该塔盘可从任一侧向外旋转以放入色谱柱。为减少与死体积相关的扩散并尽量缩短系统仪器间的管路，塔盘可向外旋转到 0 和 180 间的任意位置。在 0（原位）位置处，塔盘位于样品管理器正上方并与光学检测器（位于色谱柱加热器上方）相连接。在 180（离开）位置处，色谱柱加热器可垂入质谱仪（位于系统右侧）。色谱柱加热器可将柱室加热至高于环境温度 5 C(9 F)和 65 C(149 F)之间的任何温度。塔盘上附有一个绝缘的薄膜元件，它可以减少功耗和提高热稳定性并产生热量。塔盘内装有无源色谱柱稳定器，可减小对环境温度波动的灵敏度并将频带扩展降至最小程度。色谱柱加热器右侧的插孔可容纳色谱柱的 eCord 芯片。eCord 色谱柱芯片存储色谱柱信息，这些信息可通过 ACQUITY UPLC 控制台访问。色谱柱加热器滴盘可捕获任何渗漏，通过液滴管路将漏液送至样品管理器。1-8系统概述可选样品组织器可选样品组织器可选的样品组织器可存放并向样品管理器往返传送微量滴定器或样品瓶板，对其进行自动处理并可增加处理量。样品组织器的存储架室可容纳选择的 ANSI 样品板。样品板通过一个大的、旋开式前门装入组织器。样品架室由样品组织器加热器/冷却器进行热调节，配以样品管理器加热器/冷却器可在 25 C(77 F)或更低的环境温度下，将温度控制在 4 和 40C（39.2 和 104 F）之间。样品组织器中有三个配件可以移动样品板：Z 驱动器、样品组织器传输滑块（Y 轴）和样品管理器传输滑块（X 轴）。Z 驱动器将 Y 轴移至目标样品架，Y 轴再从该处取出样品板。然后 Z 驱动器将 Y 轴移至与 X 轴等高度处。Y 轴将样品板送至 X 轴，然后 X 轴再将样品板送至样品管理器进行处理。样品管理器完成样品板的处理时，Y 轴将其拉回样品组织器。将样品返回其所在样品架的过程与此相反。光学检测器1-9光学检测器光学检测器系统可配置 TUV、PDA 或 ELS 光学检测器，或三者的任意组合。TUV 检测器检测器TUV（可调紫外线）光学检测器是为 ACQUITY UPLC 系统设计的双通道、紫外线/可见光(UV/Vis)检测器。该检测器是系统的主要部分之一，由 Empower 软件（对于 LC 应用程序）或 MassLynx 软件（对于 LC/MS 应用程序）控制。检测器提供两个流动池选项。500 纳升体积、10毫米光程长的分析流动池和 2.4 微升、25 毫米光程长的高灵敏度流动池，它们都采用 Waters 专利的光导流动池技术。TUV 检测器的波长操作范围为 190 到 700 纳米。PDA 检测器检测器PDA（光电二极管阵列）光学检测器为紫外线/可见光(UV/Vis)分光光度计，操作范围在 190 和 500 纳米之间。检测器提供两个流动池选项。500 纳升体积、10 毫米光程长的分析流动池和 2.4 微升、25 毫米光程长的高灵敏度流动池，它们都采用 Waters 专利的光导流动池技术。ELS 检测器检测器ACQUITY UPLC ELS 检测器是为 ACQUITY UPLC 系统设计的蒸发光散射检测器。此检测器可以用 Empower 或 MassLynx 软件控制。检测器包括一个流式喷雾器，可用于优化 ACQUITY UPLC 系统性能。中值基线过滤器中值基线过滤器中值基线过滤器用于降低梯度分离对色谱基线的影响。尽管该过滤器可用于 TUV、PDA 和 ELS 检测器，但它更适合于在吸光度检测器中使用。中值基线过滤器通过降低其曲率使积分方法的开发更加容易，从而提高吸光度检测器的稳定性。另请参阅另请参阅：ACQUITY UPLC 控制台在线帮助。1-10系统概述数据系统数据系统该系统可在 Empower 或 MassLynx 软件控制下运行。Empower 软件软件Empower 具有基于图标和图形的用户界面，可用于采集、处理、管理、报告和存储色谱数据。它支持 Windows 2000 和 Windows XP 及其多任务操作，允许同时打开多个窗口。使用 Windows 多任务处理，可在 Empower 生成先前采集数据的汇总结果或微调先前进样的积分参数时查看实时数据采集。Empower 的基本版本支持 TUV、PDA 和 ELS 检测器及单四极杆质谱仪的数据。ACQUITY UPLC 系统用户的常用软件选项包括“系统适应性”、“化学结构”和“方法验证管理器”。另请参阅另请参阅：Empower 软件入门指南。MassLynx 软件软件MassLynx 为高性能质谱应用程序，用于采集、分析、管理和分布 UV 及质谱数据。它提供了智能仪器控制，可以采集额定质谱、完全质谱、MS/MS 和完全质谱 MS/MS 数据。另请参阅另请参阅：MassLynx 入门指南。色谱柱1-11色谱柱色谱柱ACQUITY UPLC 色谱柱由 1.7-m 桥接乙烯基硅氧烷混合颗粒装填，可在机械高压环境下工作。色谱柱硬件和配备的输出管路能承受的最大压力为 103421 千帕（1034 巴，15000 psi）。色谱柱尺寸可提供适于 MS 的最佳流量，配备的输出管路可将柱外体积的影响降至最低。尽管系统可使用任何分析性 HPLC 色谱柱，但专门设计的 ACQUITY UPLC 色谱柱可充分发挥其高压性能。与传统 HPLC 色谱柱相比，ACQUITY UPLC 色谱柱能在相同运行时间内达到最优的分离度和灵敏度，或实现同等分离度、更高的灵敏度和更快的运行时间。eCord 色谱柱芯片色谱柱芯片ACQUITY UPLC 色谱柱包括一个 eCord 色谱柱芯片，它可跟踪色谱柱的使用历史。eCord 色谱柱芯片与系统软件交互，最多可记录色谱柱上运行的 50 个样品队列。在受法规约束的环境中，eCord 色谱柱芯片可提供检验方法中使用的色谱柱的文档记录。除了变化的色谱柱使用数据外，eCord 色谱柱芯片还存储固定的色谱柱生产数据，包括以下内容：色谱柱唯一标识 分析证书 质检测试数据eCord 色谱柱芯片与色谱柱加热器上的插孔连接后，系统会自动记录信息。不需要用户操作。此信息存储在 Empower 数据库以外。1-12系统概述FlexCart可选的 FlexCart 为 ACQUITY UPLC 系统提供了一个移动平台。它承载系统仪器及 PC 和监视器，并为系统仪器和集成废液管理装置提供电源插座。由质谱仪一起使用时，车的可调高度可以将色谱柱出口置于接近入口探针的位置，从而将系统死体积降至最小。有关详细信息另请参阅：有关详细信息另请参阅：Waters ACQUITY UPLC 系统操作员指南（部件号 715020825MD）ACQUITY UPLC 系统书架（部件号 715210825MD）ACQUITY UPLC Photodiode Array Detector Getting Started Guide（部件号 71500108703）ACQUITY UPLC Evaporative Light Scattering Detector Getting Started Guide（部件号 71500109303）ACQUITY UPLC 控制台在线帮助 ACQUITY UPLC 系统发行说明 ACQUITY UPLC 系统书架 CD 上的 Controlling Contamination in LC/MS Systems（部件号 715001307）2-12准备系统硬件目录：主题页码准备系统硬件目录：主题页码启动系统2-2监视启动测试2-2监测系统仪器 LED 2-3准备二元溶剂管理器2-5准备样品管理器2-12准备样品组织器2-24准备检测器2-29调整色谱柱2-32关闭系统2-332-2准备系统硬件启动系统启动系统启动系统需要单独启动每个系统仪器，以及 ACQUITY UPLC 系统工作站和 Empower 或 MassLynx 操作软件。1.按下位于每个仪器门左上部的电源开关。每个系统仪器都会嘟嘟响三声，并运行一系列的启动测试。电源和状态 LED 将进行如下变化：每个系统仪器的电源 LED 显示平稳绿色。二元溶剂管理器的流量 LED、样品管理器的运行 LED 和检测器的灯 LED 都会在几秒钟内显示红色。初始化期间，每个系统仪器的电源 LED 显示平稳绿色。二元溶剂管理器的流量 LED、样品管理器的运行 LED 和检测器的灯 LED 显示闪烁绿色。系统完全初始化通常需要大约 7 分钟。在仪器成功启动后，每个仪器的电源 LED 会显示平稳绿色。二元溶剂管理器的流量 LED 和样品管理器的运行 LED 熄灭。检测器的灯 LED 显示平稳绿色，指示灯已点亮。2.启动 ACQUITY UPLC 系统工作站。3.启动 Empower 或 MassLynx 操作软件。可以监视 ACQUITY UPLC 控制台中是否有信息和 LED 指示。监视启动测试监视启动测试打开 ACQUITY UPLC 系统工作站电源时，会运行以下启动测试：CPU 板 内存（RAM 和 ROM）外部通信系统（以太网）时钟如果启动测试指示故障，请参阅Waters ACQUITY UPLC 系统操作员指南的第7 章。.监测系统仪器 LED2-3监测系统仪器监测系统仪器 LED每个仪器上的发光二极管指示仪器的运行状态。LED 特定于相应的仪器，因此其各种颜色和模式的重要性在不同仪器中可能会有所不同。电源电源 LED位于仪器前面板左侧的电源 LED 指示仪器的电源是处于打开还是关闭状态。打开电源时，此 LED 为绿色，关闭电源时则为熄灭状态。提示：提示：为保证通风充足，样品管理器和样品组织器的风扇将始终处于运行状态，即使电源关闭时也是如此。只有从仪器后部拔下电源线后，这些风扇才会停止。状态状态 LED流量流量 LED（溶剂管理器）（溶剂管理器）流量 LED 位于溶剂管理器前面板上电源 LED 的右侧，用于指示流量状态。平稳绿色的流量 LED 指示正有液流通过溶剂管理器。运行运行 LED（样品管理器和样品组织器）（样品管理器和样品组织器）运行 LED 位于样品管理器前面板和样品组织器前面板上电源 LED 的右侧，用于指示运行状态。平稳绿色的运行 LED 指示正在运行进样。灯灯 LED（检测器）（检测器）灯 LED 位于检测器前面板上电源 LED 的右侧，用于指示灯状态。平稳绿色的灯 LED 指示灯已开启。状态状态 LED 指示指示LED 模式和颜色说明模式和颜色说明熄灭溶剂管理器、样品管理器和样品组织器 指示仪器当前处于空闲状态。检测器 指示检测器灯已熄灭。2-4准备系统硬件稳定绿色溶剂管理器 指示二元溶剂管理器内的液体处于流动状态。样品管理器 指示样品管理器在正常运行，试图完成任何未完成的样品或诊断请求。当样品和诊断请求完成后，LED 会恢复熄灭模式。检测器 指示检测器灯已点亮。样品组织器 指示样品组织器在正常运行，试图完成任何未完成的样品或诊断请求。当样品和诊断请求完成后，LED 会恢复熄灭模式。闪烁绿色样品管理器 指示系统正在等待至少一个仪器转为可运行状态。检测器灯预热和色谱柱温度平衡所需时间通常会造成此类延迟。检测器 指示检测器正在初始化或校正。闪烁红色指示错误使仪器停止。与导致失败的错误有关的信息可以在 ACQUITY UPLC 控制台中找到。稳定红色指示阻止进一步操作的仪器故障。关闭仪器电源，然后再打开电源。如果 LED 仍为稳定红色，请联系 Waters 服务代表。状态状态 LED 指示（续）指示（续）LED 模式和颜色说明模式和颜色说明准备二元溶剂管理器2-5准备二元溶剂管理器准备二元溶剂管理器要获得 ACQUITY UPLC 系统的最佳性能，则必须要做好溶剂管理器的操作准备。要进行溶剂管理器的操作准备，必须执行密封清洗灌注，然后灌注溶剂管理器。要求：要求：要维持二元溶剂管理器的效率，并获取准确、可再现的色谱，请仅使用MS 级溶剂、水和添加剂。有关详细信息，请参阅Waters ACQUITY UPLC 系统操作员指南。执行密封清洗灌注执行密封清洗灌注在二元溶剂管理器中灌注密封清洗以润滑柱塞，用溶剂填充管路路径，并冲去溶剂和/或从活塞室高压侧通过柱塞密封装置剩下的任何沉淀盐。在以下条件下，灌注柱塞密封清洗：使用缓冲流动相后 二元溶剂管理器已经停用几个小时或更长时间 二元溶剂管理器已干燥提示：提示：密封清洗将自行灌注，但您可以使用注射器来加速此过程。规则：规则：为防止污染，请勿循环使用密封清洗。建议：建议：密封清洗应包含 10 的有机溶剂。这可防止微生物生长，并确保密封清洗能溶解流动相。灌注柱塞密封前，请确保密封清洗的量足够进行充分灌注。另请参阅另请参阅：ACQUITY UPLC 系统书架CD 上的Controlling Contamination in LC/MS Systems（部件号715001307）。警告：警告：处理溶剂时，请遵守实验室安全操作规范。要了解您所使用溶剂的信息，参阅“材料安全数据表”。小心：小心：请勿使用三氯甲烷和二氯甲烷。小心：小心：为避免损坏溶剂路径中的电磁阀座和密封，请勿使用不挥发性缓冲剂作为密封清洗溶剂。2-6准备系统硬件必备材料必备材料 管路配接器（启动套件）30 毫升注射器（启动套件）密封清洗溶液要执行密封清洗灌注：要执行密封清洗灌注：1.确保密封清洗入口管在溶剂容器中。2.从滴盘右侧移除密封清洗出口管。二元溶剂管理器密封清洗出口管二元溶剂管理器密封清洗出口管3.将注射器柱塞完全推入注射器筒。4.将管路配接器与注射器连接，然后从密封清洗系统将注射器装置与出口管路相连接。5.在 ACQUITY UPLC 控制台中，从系统树选择“二元溶剂管理器”。6.单击“控制”“密封清洗灌注”，然后单击“是”以开始密封清洗灌注过程。7.缓慢抽回注射器柱塞，从系统中抽取密封清洗溶剂。8.当密封清洗溶液开始流入注射器且无大气泡时，断开此管路，并将其重新安装到滴盘上的接头。9.单击（停止液流）以停止灌注过程。滴盘密封清洗出口管准备二元溶剂管理器2-7灌注二元溶剂管理器灌注二元溶剂管理器灌注用于准备要使用的新系统或二元溶剂管理器、更改容器或溶剂，以及在系统处于空闲状态超过四小时后运行系统。在灌注期间，排放阀移向“排放”位置以同时确保最小背压以及将液流引入废液。对于每个正在灌注的泵，灌注期间的流量为 4 毫升/分。提示提示：如果要灌注干燥的二元溶剂管理器，使用注射器可以缩短完成灌注所需的时间。建议：建议：确保溶剂容器中有足够的溶剂来进行充分灌注，并且废液容器具有足够的容量容纳使用过的溶剂。每个泵的灌注流量是 4 毫升/分钟，或总计 8 毫升/分钟。例如，同时灌注两种溶剂达 5 分钟需要两种溶剂大约各 20 毫升。灌注干燥的二元溶剂管理器灌注干燥的二元溶剂管理器：灌注干燥的二元溶剂管理器灌注干燥的二元溶剂管理器：1.打开仪器的前门。2.找到相应的溶剂排放管。3.在 ACQUITY UPLC 控制台中，从系统树选择“二元溶剂管理器”。4.在二元溶剂管理器信息窗口中，单击“控制”“灌注 A/B 溶剂”。出现“灌注 A/B 溶剂”对话框。5.在“灌注 A/B 溶剂”对话框中，选择溶剂 A 和/或 B。6.在“时间”框中，指定从 0.1 到 60.0 范围内的分钟数。缺省值缺省值：1.0 分钟建议建议：灌注二元溶剂管理器，直到稳定液流从排放管排出（通常 7 到 10 分钟）。7.单击“开始”。当溶剂流出排放管而无气泡时，表明此路径已灌注完毕。8.重复步骤 3 到 7 以灌注其它溶剂。要求要求：要使脱气器正常工作，A1、A2、B1 和 B2 容器中必须要有溶剂。小心：小心：在从缓冲剂改为高有机物含量的溶剂时，为防止盐在系统中沉淀，请引入中间溶剂（如水）。一定要参考 Waters ACQUITY UPLC 系统操作员指南的溶剂混溶性表。警告：警告：为避免溢出，请定期清空废液容器。2-8准备系统硬件使用注射器灌注干燥的二元溶剂管理器：使用注射器灌注干燥的二元溶剂管理器：1.打开仪器的前门。2.找到相应的溶剂排放管。如果要灌注溶剂 A，从排放阀上的端口 4 开始顺着标记为“A-VENT”的不锈钢排放管前行，并将其提到滴盘外。如果要灌注溶剂 B，从排放阀上的端口 1 开始顺着标记为“B-VENT”的不锈钢排放管前行，并将其提到滴盘外。二元溶剂管理器排放管二元溶剂管理器排放管3.将注射器柱塞完全推入注射器筒。4.将管路配接器连接到注射器。5.将注射器装置与 PharMed 管路长度较短的一端连接，然后将 PharMed 管路长度较短的一端与步骤 2 中所定位的溶剂排放管相连接。6.在 ACQUITY UPLC 控制台中，从系统树选择“二元溶剂管理器”。7.在二元溶剂管理器信息窗口中，单击“控制”“灌注 A/B 溶剂”。出现“灌注 A/B 溶剂”对话框。8.在“灌注 A/B 溶剂”对话框中，选择溶剂 A1。9.在“时间”框中，指定从 0.1 到 60.0 范围内的分钟数。缺省值缺省值：1.0 分钟建议建议：灌注二元溶剂管理器，直到稳定液流从排放管排出（通常为 3 分钟）。10.单击“开始”。11.缓慢抽回注射器柱塞，从溶剂路径中抽取溶剂。当溶剂流出排放管而无气泡时，表明此路径已灌注完毕。滴盘排放阀溶剂排放管准备二元溶剂管理器2-912.从排放管中移去注射器，并将排放管重新连接到滴盘。13.对溶剂 A2、B1 和 B2 重复步骤 6 到 12。要求要求：溶剂 A1、A2、B1 和 B2 的容器中必须要有溶剂。否则，脱气器将不会正常工作。灌注湿二元溶剂管理器灌注湿二元溶剂管理器以下两个功能有助于执行系统操作准备。系统处于空闲状态的时间长度将确定哪一个功能更好。刷新系统（系统准备）启动刷新系统刷新系统系统处于空闲状态一段较短的时间几个小时到通宵）后，如果打算使用先前所用的相同溶剂，则使用“刷新（系统准备）”功能。可从控制面板或通过在样品组中将其添加为管路来调用“系统准备”功能。建议：建议：如果系统已处于空闲状态 4 个小时或更长时间，并且您打算使用系统中已有的溶剂，则灌注二元溶剂管理器 1 分钟。如果您打算使用与系统中已有溶剂具有相同成分的新溶剂，则灌注二元溶剂管理器4 分钟。刷新系统：刷新系统：1.在 ACQUITY UPLC 控制台中，单击“控制”“刷新系统（系统准备）”。出现“刷新系统（系统准备）”对话框。2.查看设置，如有必要可选择另一选项。系统将用当前的溶剂选择（A1 或 A2、B1 或 B2）进行灌注。仅溶剂管 A（缺省）仅溶剂管 B A 和 B3.单击“确定”。结果结果：系统灌注所选的溶剂、使用一种弱清洗灌注（清洗和样品注射器）灌注样品管理器并点亮检测器中的灯。2-10准备系统硬件启动系统启动系统更改流动相后、更改样品针头和/或样品定量环后，或者系统已长时间（通宵或整个周末）处于空闲状态后，使用“启动”功能灌注二元溶剂管理器。开始执行此步骤前，请确保已正确配置系统，以便于使用。建议建议：如果要改用其成分与系统中已有溶剂的成分不同的溶剂，请灌注二元溶剂管理器 5 分钟。启动系统：启动系统：1.在 ACQUITY UPLC 控制台中，单击“控制”“启动”。出现“系统启动”对话框。2.在“系统启动对话框的“灌注溶剂”选项卡中，查看“A/B 溶剂”的设置。在“A/B 溶剂”区域中，可选择或清除任意或所有溶剂：A1、A2、B1 或 B2。通过在“灌注持续时间”中输入另一数字，可更改灌注溶剂 A 和 B 的时间长度。所有所选溶剂的灌注持续时间均相同。允许值允许值：0.1 到 60.0 分钟提示提示：如果要将设置返回其原始值，在任意选项卡上单击“设置缺省值”。缺省值缺省值：溶剂 A1、A2、B1 和 B2 各灌注 1.0 分钟。3.可以选择或清除密封清洗灌注、强清洗灌注、弱清洗灌注和/或样品注射器灌注。缺省值缺省值：密封清洗的灌注时间为 1.0 分钟，弱清洗灌注一次，样品注射器灌注一次。4.通过在“循环”字段中输入完全不同的数字，可更改灌注强清洗的循环次数。缺省值缺省值：105.选择“方法平衡”选项卡，查看最终流量、流动相、成分、温度和灯状态的设置。根据需要更改这些值，使其在平衡时满足您的要求。6.如果更改了样品针头，请单击“可选：定性体积”选项卡，然后选择“定性密封”和“定性针头和定量环体积”。“方法平衡”选项卡的值系统启动参数缺省状态允许值“方法平衡”选项卡的值系统启动参数缺省状态允许值方法初始流量1 毫升/分0.1 到 2.0 毫升/分A 和 B 的成分（总和必须为 100%）A1，100B1，0%A1、A2；0 到 100%B1、B2；0 到 100%柱温关关或环境温度以上 5.0 C(9 F)到 65.0 C(149 F)样品温度关关或 25 C(77 F)环境温度下为 4.0 到 40.0 C（39.2 到 104 F）灯开开或关准备二元溶剂管理器2-117.如果更改了样品定量环，在“可选：定性体积”选项卡中，选择“定性针头和定量环体积”。8.如果针头或定量环的大小不同，在“配置”区域中单击“更改”。在“体积配置”对话框中，选择定量环和/或针头的新大小，然后单击“确定”。9.单击“开始”。结果：结果：光学检测器中的灯点亮，ACQUITY UPLC 系统设置色谱柱样品温度，并且开始所有灌注。灌注完成后，如果选择了该功能，样品管理器将定性针头密封，然后将定性结果记录到数据库中。最后，系统将建立方法流量、溶剂选择和成分。方法初始流量的缺省设置是 100%溶剂 A1 为 1.000 毫升/分和 0%B1、柱温和样品温度为“关”且检测器灯已点亮。2-12准备系统硬件准备样品管理器准备样品管理器在准备好二元溶剂管理器后，应进行样品管理器的运行准备。准备样品管理器包含以下步骤：灌注 定性密封 定性针头和样品定量环体积 加载样品板选择弱清洗和强清洗溶剂选择弱清洗和强清洗溶剂为获得最佳性能，在选择清洗溶剂时，请遵照以下指导原则。否则，性能可能会降低，特别是“面积/高度 RSD”和“线性”。但这些原则并不禁止其它所有的溶剂组合。其它组合可在用户对预期性能要求较低时运行，或者通过处理缺省进样参数运行。使用基于应用程序的样品和流动相化学物质的弱清洗溶剂，确保所有溶液/缓冲剂都是易混合和可溶解的。建议建议：对于缓冲溶液、反相色谱条件和 MS 应用，请使用 100%水或 0 到 25%甲醇或乙腈的弱清洗溶剂和 50 到 100%甲醇或乙腈的强清洗溶剂。较高的样品浓度可能需要其它弱清洗溶剂。如果分离允许，Waters 建议添加少量有机溶剂(10%)以防止微生物生长。警告：警告：为避免溶剂溢出并保持正常的泄漏排放，在操作系统前一定要关闭样品管理器流路托盘。小心：小心：要避免损坏溶剂路径中的电磁阀座和密封，请勿使用不挥发性缓冲剂作为弱或强清洗溶剂。准备样品管理器2-