高效液相色谱法HPLC实践技术SOS专区样本.doc

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HPLC问题SOS求助规则

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--------求助与应助者必读

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回应: 我想请教一下衍生和不衍生在做高效液相时有什么区别, 因为有些物质不用衍生用高效液相也能做出来, 那为什么还要用衍生这种方法呢? 谢谢!  

紫外衍生化是指将无紫外吸收或吸收很弱的物质与带有紫外吸收集团的衍生化试剂进行反应, 产生可用于紫外检测的化合物。衍生化一般分为柱前衍生化和柱后衍生化, 相对而言, 柱后衍生化应用更广泛。经过衍生化能显著提高检测灵敏度和选择性。柱后可见光衍生化检测经常见于过渡金属离子的分析, 将过渡金属离子柱流出物与显色剂反应, 生成有色配合物后, 在可见光波长下检测。

做高液要不要衍生, 要看具体情况而定, 一般来说如果不需衍生就能测定, 而且灵敏度不是很差, 就不必使用衍生化, 毕竟衍生化是比较烦琐的。当前使用柱前衍生化的都是迫不得已才采用的。

回应: 我正在做头孢噻吩钠的含量测定, 药典规定流动相是醋酸溶液－乙睛( 3: 1) , 可是出的峰型非常难看, 拖尾非常厉害, 开始以为是柱效不行, 可是做别的好得很, 请哪位高手指教应如何改进, 不想参照英国药典! 应为那样将要做大量验证工作! 谢谢, 急盼

我想一个可能的原因是不是你样品中药物的浓度太高了, 信号溢出了, 另外, 如果各个浓度都一样, 又不想换柱子能够试试加点三乙胺什么的, 把你的流动相组分调整一下, 当然要查一下资料。我也遇到过类似情况, 当然柱子的柱效也是一方面的原因了,

Re:请教: 1、 流动相的保存期限一般为多少? 如果是甲醇: 四氢呋喃: 乙腈: 水/30: 10: 30: 30能够保存多少时间? 如果含缓冲盐的能够保存多少天? 保存期限与缓冲盐的浓度有关系吗? 听别人说用缓冲盐只能用3天, 是为了防止长菌还是析出盐呢?
2、 单纯的甲醇冲洗柱子的时候用了1周是否需要重新超声脱气? 超声时间一般应为多少? 我看过一个资料说需要30分钟, 不应该吧?
3、 过滤流动相的时候, 1张滤膜大概能够过滤多少毫升流动相, 还是一直到过滤的特别慢了才弃用呢? 是否过滤过含缓冲液的滤膜就不能再过滤不含缓冲液的流动相了?
虽然液相做了快2年了, 可是这些细微问题始终没有得到真正的解决, 恳请帮忙!

1.流动相的保存期限要具体问题具体分析, 如果是有机相( 或者纯水) 则能够保留4-5天, 当然肯定是保留时间越短越好了, 在做实验时能够估计一下大概需要多少, 不要过滤过多的有机相或纯水。如果是甲醇: 四氢呋喃: 乙腈: 水/30: 10: 30: 30, 因为水相还是占相当大的比例, 一般不宜超过1-2天。如果含缓冲盐的则最好当天用完, 不要留置过夜, 用不完也要倒掉, 这是为了保护好机子起见, 保存期限与缓冲盐的浓度有关系, 越浓越不宜保留, 总之, 我认为缓冲盐溶液都不宜保留超过24小时, HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。如果你的液相有在线Seal-wash功能, 则能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。一般缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时,必须使用该在线冲洗选项.
我认为一次性配制的缓冲盐不能用3天, 无论是从为了防止长菌还是析出盐方面考虑。我觉得做液相也要事前作好各方面的计划, 作到心中有数, 这样即能够保护好机子设备, 又能节省溶剂, 不要为了图一时的方便而因小失大!

2、 单纯的甲醇冲洗柱子的时候用了1周有必要需要重新超声脱气( 如果你的机子有在线脱气功能的话则不必重新脱气, 现在出的大多数机子有这功能) , 超声时间一般为10-15MIN

3、 过滤流动相的时候, 1张滤膜大概能够过滤多少毫升流动相并没有明确的规定, 看情况而定, 国外都是一次性的用, 但在国内, 由于国情的原因, 大多数单位还是重复使用, 我觉得只要自己认为脏了就能够换了, 过滤过含缓冲液的滤膜就不宜再过滤不含缓冲液的流动相, 当然如果经济不允许的话, 就另当别论了。顺便给你点建小提示:
A: 请严格执行溶剂过滤。

B: 请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液

C: 如果应用许可, 可在溶剂中加入0.0001---0.001M的叠氮化钠.

D: 避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下, 尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。

RE: 请问: 我的柱压为什么一直很高? 每天做完后我用于5%的甲醇0.2ml/min冲过夜, 第二天用甲醇冲30min后再进行工作。

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面, 而且常常并不是柱子本身的问题, 我建议你可按下面步骤检查问题的起因。
1、 拆去保护柱, 看柱压是否还高, 否则是保护柱的问题, 若柱压仍高, 再检查;
2、 把色谱柱从仪器上取下, 看压力是否下降, 否则是管路堵塞, 需清洗, 若压力下降, 再检查。
3、 将柱子的进出口反过来接在仪器上, 用10倍柱体积的流动相冲洗柱子, (此时不要连接检测器, 以防固体颗粒进入流动性)。这时, 如果柱压仍不下降, 再检查;
4、 更换柱子入口筛板, 若柱压下降, 说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质, 正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高, 请与柱子厂商联系。一般情况下, 在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。
我看到你用5%的甲醇0.2ml/min冲过夜, 虽然流速很低, 但你的水相占比例大, 对柱子的寿命不好, 不知道你的是长柱还是短柱, 柱压有多高? 请告知!

SS5210 wrote:
再次感谢toyosa老师的指导, 这次我使用我们的水就放心了。
请教: 再问一个问题, 就是我们的液相泵, 打开以后显示的压力不是0而是36psi 而且隔一段时间就要增长一些, 我问别别人, 她们说她们的机器也是这样, 这是正常情况吗? 是不是哪里堵了或者是泵头有问题, 还是柱子用的时间长呢?

不知道你们用的是哪家的液相, 我们使用的安捷伦1100, 也出现类似情况, 你试一试我们常见的方法看是否有效 :
1. 使流动相处于purge 的状态, 看压力是否降下来, 如果是表明泵前的滤芯慢慢被堵塞了因此压力逐渐升高, 不必担心, 高到一定程度换滤芯就能够了;
2. 如果经常出现类似情况, 一要确保流动相用前过滤, 另外要检查液体中的小滤头是不是有漏的地方( 过滤效果差了) ;
3. 检查压力传感器是否正常, 我们的一台液相就曾经因为压力传感器不正常工作而出现上述情况, 更换了就好了。
4. 再有如果频繁出现压力持续升高, 滤芯要很快就更换的话, 请检查一下泵里边的密封圈是否有磨损, 有时候会因为密封圈磨损掉屑而使滤芯堵塞, 这时需要换新的密封圈( 安捷伦的需要两个同时更换) ;
5. 如果怀疑哪个地方堵了或者有问题, 只要用分段排除法就能够一点点检查出来。

努力做吧!

一般,如色谱柱是用甲醇保存的(乙腈也一样),流动相中有缓冲盐(如你所用的磷酸盐缓冲液)都应先用水冲一子,至少应使色谱柱中充满水后再冲流动相,特别是在盐的浓度比较大时一定要这么做.用后再用水把盐冲干净,再用甲醇封柱.这么做是为防止盐在甲醇中析出.要知道,在色谱柱里析出盐会在色谱柱中形成一个个的空穴,你的柱了就完了.

re:1.前几天换柱子的时候把螺丝拧断了, 螺丝头断在柱子里面, 这根柱子平常见的满好的, 好心痛, 我不知道有没有办法处理? VP-ODS150L*4.6她们说上面联着断螺丝的那个东西换一下也可能能够用, 这个可行吗, 又哪里有废柱子呢?
2.前面 老师提到有缓冲液的流动相最好不要过夜, 那我1000ml甲醇和水的流动相里加了六滴磷酸, 好象不是很多? 放三五天能够吗
3.老师说流动相过滤后要超声脱气, 我现在在用的一直是0.45μm滤膜, 隔膜真空泵过滤后直接拿来用, 是否可行?  

本人不才,希望以下几句能够给你启发!
1.螺丝头断在柱子里面,只要你想办法把螺丝头拧出来,柱子当然就能够用了,其实柱子并没有受到损害呀!你能够用小镊子或者其它工具把短头慢慢的从柱子旋出,然后再找个新的螺丝头换上就行了.
2.你在1000ml甲醇和水的流动相里加了六滴磷酸,虽然不是很多,但从保护柱子及机器设备角度出发,我建议你最好保存也不要超过三天.
3.你的机子有在线脱气功能吗?如果有的话你能够不用超声脱气,但没有的话,就要过滤后超声脱气15-20分钟.

lzq123_77 wrote:
我近来做一个皂苷酸水解后用HPLC-ELSD测定菝葜皂苷元的实验。但当前重复性实验结果不是很好, 我以前做过重复性还能够, 但现在不好重现了。
还有最关键一个问题: 样品处理好后, 如果连续进样超过5针, 目标成分峰形就能够趋向于比较差, 我比较过了, 峰形变差肯定是柱子引起的。各位朋友帮忙分析下是什么什么原因导致如此快就峰形变这么差? 我的流动相是纯甲醇, 菝葜皂苷元的极性很小, 不容易洗脱。峰形变差的一个特点是在目标成分峰的两个边缘出现小的倒峰, 相对基线凹了下去这到底是因为什么原因引起的呢? 我有点分析不清楚。敬请各位不吝赐教。谢谢!

还有个问题, 就是每几次进样后, 蒸发光检测器基线就整体就有点漂移, 但对一个进样过程来说还算比较稳定, 但几次进样后整体基线相比以前就有明显漂移, 我进对照品就不会 有这种情况, 惟独进样品时就会这样。这是什么原因呢?
请大家讨论下
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会不会是你的样品中有些极性比较大的物质没有被冲出来造成的? 你的流动相极性相对小。建议
1 水解后用有机溶剂提取一下, 再定容后进样, 可能能好些;
2 每个( 或几个) 样品测定结束后以一个梯度短时间冲洗一下, 再回到原流动相。
3 换用正相柱试试, 我们以前做薯蓣皂苷元用的就是正相柱。 
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1、 几次进样后, 蒸发光检测器基线整体有点漂移, 主要是样品成分比较复杂, 而且极性小, 前面几针的一些杂质峰到后面才出来, 造成漂移。一般现象是: 一直向上漂移, 或向上漂移很久后向下漂移。
2、 连续进样超过5针, 目标成分峰形就能够趋向于比较差, 同样可能是上述原因造成, 前面5针的一些杂质峰到后面才出来, 造成漂移并使峰形变差。
解决办法: 改变流动相或换色谱柱。
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谢谢各位朋友, 谢谢!

1、 能用甲醇就不考虑用乙腈, 因为乙腈成本要高很多。
2、 考虑用C8柱是实在没办法重现以前结果了, 就只好试下。
3、 按ELSD的原理, 基线有漂移就是有微小颗粒经过, 但基线是一直在往上飘, 而不是有较大噪音, 在一个进样过程中ELSD的输出信号是很稳定的。如果是杂质的话不应该基线噪音这么稳定啊。再说即使是杂质在后来冲出来了, 但也不能每次都跟目标成分同时出来而导致目标成分峰形差啊, 而应该是出现一些不规则不定时出现的鬼峰才对啊, 而且正常情况下目标成分峰前后一分钟是没有任何东西的, 10.5分钟出峰, 我每针都是走20分钟, 应该能把杂质洗出来了啊。
4、 样品成分复杂是应该的, 因为本身中药里面皂苷类成分就多, 水解就会把所有的皂苷都不同程度地水解为皂苷元, 但如何能把复杂成分简化呢? 有没有朋友做过这方面工作? 都是皂苷元还真是很难纯化。
5、 在反相色谱中, 甲醇比任何甲醇-水系统的洗脱能力都强, 我测的是皂苷元, 因此水解后肯定要用有机溶剂萃取的。
梯度没办法再梯度了, 呵呵, 原因我上面说了。
是在没办法了, 正相色谱倒是能够考虑, 但因为极性太小, 预期效果也不会
6、 我分析也可能是因为酸水解没有中和酸性, 因此在最终样品里残留有少量酸( 处理好的样品酸味比较明显) , 随着进样次数的增多, 在柱子里有残留, 甲醇是很难把酸洗出来的, 因此酸影响柱效导致峰形变差。各位觉得有没有可能呢?
我试着用水洗了下挥干前的氯仿液后, 再挥干定容, 但效果不是很理想, 是我没有把酸完全洗好? ( 还有酸味) 还是怎么回事? 唉。。只有试着再用弱碱水洗了。

请各位朋友讨论赐教, 谢谢!

TO tianmeizhan 

您好! 当前植物多糖的含测方法很多, 但总得来说还是化学法或者光谱法较为普遍, 应用最多的是比色法, 有蒽酮-硫酸法、 间接碘量法、 酚-硫酸法、 蒽酮-硫酸法、 酚-硫酸法等, 用色谱的还很少, 象用HPLC、 GC等来测定多糖的并不多见, 就其原因是因为多糖的特殊结构和性质决定的, UV常需要柱前衍生化( 不需衍生化则使用RID、 ELSD等检测器) 。请到园子里的连接查看:

正是因为当前较少研究, 相应的资料也就很有限, 但总比没有要好, 我推荐你看这本书《功能食品生理特性与检测技术 》( 化学工业出版社) , 书里面有一部分内容是关于多糖的测定。在这顺便也给你一篇文章参考一下, 希望能对你有所帮助, 另外还请您不要叫我老师, 因为无论从哪方面讲, 本人与一名合格老师的差距还是很明显地! 只是想在这谈谈自己的一些粗浅认识而已, 望体谅!  

RE: 我的柱压为什么一直很高? 每天做完后我用于5%的甲醇0.2ml/min冲过夜, 第二天用甲醇冲30min后再进行工作。 

我看TOYOSA老师的回答已经比较详细了, 我也受益非浅, 正如她所说你冲柱子时, 水相比例太大。我的操作是5%的甲醇先冲柱子, 再用纯甲醇冲, 流速1ml/min, 冲到柱压稍微反弹时即可。第二天再用流动相平衡30min。以前我用的柱子是国产大连依利特的, 用了一年多, 用这个方法冲洗柱子, 现在柱效还很好。

学做HPLC, 刚入门, 就实践中的几点疑惑请教各位
1、 缓冲液在流动相中的作用?
缓冲液除了提供充分的缓冲容量以保持流动相稳定的PH值以外, 还有其它作用吗? 是否同时起到盐效应的作用, 减轻拖尾? 磷酸盐也是一种阴离子对试剂吗? ( 《高效液相色谱方法及应用》化工出版社 书中的离子对试剂分类中提到磷酸盐) 。缓冲盐选择上醋酸盐和磷酸盐的区别
本人实践中的事例: 分析一生物碱含量 0.1M磷酸二氢铵( 磷酸调PH4) : 乙腈=90: 10。平时出峰正常, 今日出现拖尾, 求教原因。我这个色谱条件怎么和其它人的不同, 不是离子抑制法、 也没加扫尾剂。PH很低。个中原理是否真的利用生物碱在低PH条件下的完全解离, 和磷酸根阴离子形成离子对呢? 原来的条件是硫酸铵-硫酸调PH3.0, 加SDS-NA作阴离子试剂。据闻用此流动相做坏了一根柱子, 求教此流动相对柱子的影响。
2、 离子对色谱法的一些问题
离子对试剂对C18柱的影响有哪些? ( 特别是中长链)
用离子对色谱法分析一生物碱, 长期用A( Hypesil ODS C18柱, 后发现生物碱峰拖尾严重, 不能回到基线, 用甲醇、 乙腈、 异丙醇再生后仍拖尾, 改用同型号的B柱, 色谱峰良好。是否说明A柱性能明显下降或再生方法不够完好?
3、 近日在版中见此转贴内容, 求教所述分析正确否?
”问: 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?
答: 1、 筛板堵塞或柱失效, 解决办法是反向冲洗柱子, 替换筛板或更换柱子。
2、 存在干扰峰, 解决办法为使用较长的柱子, 改换流动相或更换选择性好的柱子 ”
”
七)峰拖尾
1.柱超载 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相
2.峰干扰 清洁样品,调整流动相
3.硅羟基作用 加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品
4.同前(四)4 同前(四)4
5.同前(四)3 5.同前(四)3
6.死体积或柱外体积过大 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管
7.柱效下降 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱”
”
(四) 出现肩峰或分叉
1.样品体积过大 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%
2.样品溶剂过强 采用较弱的样品溶剂
3.柱塌陷或形成短路通道 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
4.柱内烧结不锈钢失效 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品
5.进样器损坏 更换进样器转子”

HPLC是个好东西, 作为它的主人, 你要好好使用它, 它才会听话啊! 下面是相关资料
HPLC的正确使用和科学保养
1、 保持贮液瓶清洁, 对专用贮液瓶应定期清洗; 用试剂瓶作贮液瓶时, 要经常更换。
2、 定期( 如半个月) 在稀硝酸溶液中超声、 清洗过滤器, 保持过滤器畅通无阻。
3、 使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相, 所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长, 对不是HPLC级的试剂要进行过滤( HPLC试剂出厂前已用0.02μm滤膜过滤) 。对流动相一定要脱气。
4、 每天开始使用仪器, 注意放空排气, 确保泵头、 流动池以及其它流路系统中无气泡存在。
5、 珍惜保护色谱柱, 避免柱头突然产生大的波动, 扰动损伤柱床。如避免泵启动过速、 升压过快、 样品阀搬动过慢所造成的柱压大的波动。
6、 采用保护( 警戒) 柱, 延长柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头, 造成柱压升高, 柱效下降, 峰形变差时, 卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。
7、 避免超负荷进样, 对250×4.6mm的柱子,绝对进样量应不超过100μg。在灵敏度允许的前提下, 应尽量将试样浓度降低, 减少绝对进样量( 进样体积可保持不变) , 这是保持HPLC柱性能持久良好的重要举措之一。
8、 经常见强溶剂冲洗柱子, 将柱内强保留组分及时洗脱出。反相柱用异丙醇--二氯甲烷( 1: 1) 冲洗, 正相( 硅胶柱) 用纯甲醇或异丙醇冲洗, 时间均不少于1h。
9、 做完试验, 及时用适当溶剂冲洗柱子和进样阀, 特别是对过夜的柱子和进样阀, 一定要用足量的水彻底洗净其中的盐类、 缓冲液, 再用甲醇或乙腈冲洗, 并保存在乙腈中。正相柱保存在非极性有机溶剂( 如己烷) 中。
10、 以硅胶为基质的柱子, 如C-18、 C-8等, 要控制好流动相的pH值, 一般不要低于2.5, 不高于7.0。
11、 尽量用流动相溶解样品, 一是避免出现拖尾峰、 怪峰, 二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。
12、 对于阻塞或受伤严重的柱子, 必要时, 可卸下不锈钢滤板, 超声洗去滤板阻塞物, 对塌陷污染的柱床进行清除、 填充、 修补工作, 此举可使柱效恢复到一定程度( 80%) , 有继续使用的价值。
13、 色谱仪检测器输出与积分仪( 处理机) 要匹配, 要合理设置参数如斜率、 半峰宽、 阈值、 AUFS值、 衰减等。将适宜的进样量和合适的参数结合起来, 使主峰峰高达到记录仪满量程的80%左右。
14、 用HPLC分析酸碱性物质, 由于吸附作用( 次级保留) 使峰开拖尾。加入改良剂能够大大改进峰形, 提高积分的准确度。一般规则是: ( 1) 分析酸性物质, 可加入1%有醋酸。( 2) 分析碱性物质, 可加入10-20mmol/L三乙胺。( 3) 酸碱物质混为一体, 可同时加入1%的醋酸和10-20mmol/L三乙胺。

我正在作一个品种的片剂, 可是单独作片剂的辅料时, 总是发现辅料要出峰, 按理说辅料是应该不出峰的。单独作原料时是不出峰的, 罪头疼的是辅料出的峰影响成分检测, 特别是作有关物质的时候, 请问各位老师, 这是什么原因? 急盼回复! 十分感谢!  

你这样的问题我也遇到过, 不是所有的辅料都不出峰的, 有一些辅料就是会出峰。其实解决的方法很简单。首先, 你应该查到该药的标示量, 然后按照标示量中辅料和主成分的比例配置样品, 一般样品中辅料的量所产生的峰是很小的, 根本不足以产生干扰。之因此我们单独进辅料的时候会产生峰, 是因为辅料浓度太大, 不符合实际情况。

1. 用水系膜,过滤含有有机系的流动相,肯定是不能够的.会烧毁水系滤膜.过滤完你能够看一下水系的滤膜.应该已经粘上不能取下来了.有机系非常少的话,也不提倡,因为多少会有烧损.对流动相不好.现在一般滤水和流动相都用有机系.
2.能够,我们有时候也用.但要注意浓度和时间.
3.说的非常对,换含有盐类的流动相以前应该用水替换一下系统.不然时间长了很容易堵

专家好! !
我在分析版上找到一篇这种文章, 关于基线的, 不知是否合适, 但我不明白, 看不太懂．请解释．
M、 基线噪音( 规则的)
原 因 解决方法
1、 在流动相、 检测器 1、 流动相脱气。冲洗系统以除去
或泵中有空气 检测器或泵中的空气。
2、 漏液 图 2、 见第三部分。检查管路接头
是否松动, 泵是否漏液, 是否有盐
析出和不正常的噪音。如有必要, 更换泵密封。
3、 流动相混合不完全 3、 用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
4、 温度影响( 柱温过高, 检测器未加热) 4、 减少差异或加上热交换器
5、 在同一条线上有其它电子设备 5、 断开LC、 检测器和记录仪,
检查干扰是否来自于外部, 加以更正。
6、 泵振动 6、 在系统中加入脉冲阻尼器

N、 基线噪音( 不规则的)
原 因 解决方法
1、 漏液 图 1、 见第三部分。检查接头是否
松动, 泵是否漏液, 是否有盐析出和
不正常的噪音。如有必要, 更换密封。
检查流通池是否漏液。
2、 流动相污染 变质或由低质溶剂配成 2、 检查流动相的组成。
3、 流动相各溶剂不相溶 3、 选择互溶的流动相
4、 检测器/记录仪电子元件的问题 4、 断开检测器和记录仪的
电源, 检查并更正。
5、 系统内有气泡 5、 用强极性溶液清洗系统
6、 检测器内有气泡 6、 清洗检测器, 在检测器后
面安装背景压力调节器
7、 流通池污染( 即使是极少的污 7、 用1N的硝酸( 不能用磷酸) 染物也会产生噪音。) 清洗流通池
8、 检测器灯能量不足 8、 更换灯
9、 色谱柱填料流失或阻塞 9、 更换色谱柱
10、 流动相混合不均匀或混合器工作不正常 10、 维修或更换混合器,

在流动相不走梯度时, 建议不使用泵的混合装置

木子zhen wrote:
在进样的过程中, 主峰的保留时间会提前, 每一针都会提前一点, 这是为什么呢?
想请教各位, 谢谢~
系统还稳定? 比如: 未平衡、 流速不准、 有漏液、 气泡, 如果用到气流的话, 气流还准确, 有无波动, 是否受温度影响, 还有就是色谱柱还稳定了?
环境: 是否受环境影响, 特别是环境温度, 早上与中午下午暴力时间会变化, 往往变提前了
样品: 不同浓度下, 保留时间是有差异的
流动相: 有无气泡? 有机相是否易挥发? 是否含水量过高而色谱柱不耐受?
人品: .....
himalayarange wrote:
请教各位老师: 我用的流动相是0.067M的磷酸二氢铵: 乙腈( 65: 35) , 基线走平稳后, 以流动相进样, 出来的谱图上, 密密麻麻有很多小峰, 是什么原因, 我尝试过两根C18的短柱了, 情况相似。

有这样几个可能:
1) , 可能是进样针或者环污染; 2) , 流路或者检测池污染; 3) , 所用的盐或者乙腈不纯
4) , 系统中未知部分污染; 5) 机器压力不稳等原因
建议: 1) , 更换成色谱纯的试剂或者水进行实验; 2) 将整个系统进行冲洗, 进行实验
3) , 更换机器进行实验
根据实验结果再进行相关分析。