第四篇药物的含量测定方法及验证.pptx

第四章第四章 药物的含量测定方法与验证药物的含量测定方法与验证分析方法分析方法方法优点方法优点方法缺点方法缺点适用对象适用对象容量分析法容量分析法简便、准确度简便、准确度好、精密度高好、精密度高专属性差专属性差化学原料药含化学原料药含量测定量测定光谱分析法光谱分析法简便、快速、简便、快速、灵敏度高灵敏度高专属性差专属性差制剂中溶出度、制剂中溶出度、释放度测定释放度测定色谱法色谱法灵敏度高、灵敏度高、专属性好专属性好操作相对复杂操作相对复杂（低）制剂的（低）制剂的含量测定含量测定定量方法特点：第一节 定量分析方法的分类与特点 一、容量分析法一、容量分析法 （一）容量分析法的特点（一）容量分析法的特点 操作简单、快速；操作简单、快速；比较准确（比较准确（RSDRSD0.2%0.2%）；）；仪器普通易得。仪器普通易得。1.1.滴定度（滴定度（T T）的概念）的概念 每每1ml1ml滴定液相当于被测物质的量滴定液相当于被测物质的量(mg)(mg)2.2.滴定度的计算滴定度的计算 aA aA+bB cC bB cC+dD dD T T=M Ma/ba/bB B3.3.百分含量的计算（原料药）百分含量的计算（原料药）（1 1）直接滴定法）直接滴定法 D%=D%=V V F F T/WT/W 100%100%F F=实际浓度实际浓度/规定浓度规定浓度 （二）容量分析法的有关计算（二）容量分析法的有关计算（2）剩余滴定法 T滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数 V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml）V0滴定时，空白消耗滴定液的体积（ml）F浓度校正因子 ms供试品的质量 n n双相滴定法测定苯甲酸钠含量。取本品双相滴定法测定苯甲酸钠含量。取本品0.3220g,0.3220g,加水加水15ml15ml，乙醚，乙醚30ml30ml与甲基橙与甲基橙3 3滴，用滴，用0.1062mol/L0.1062mol/L盐酸滴定，至水层显橙红色，分取盐酸滴定，至水层显橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，加乙醚水层，置具塞锥形瓶中，加乙醚20ml20ml，振摇，振摇，继续滴定至持续橙红色，消耗盐酸体积继续滴定至持续橙红色，消耗盐酸体积21.05ml21.05ml。计算样品中苯甲酸钠含量。苯甲酸钠分子量计算样品中苯甲酸钠含量。苯甲酸钠分子量144.1144.1。n n司可巴比妥的含量测定：取供试品司可巴比妥的含量测定：取供试品0.1301g0.1301g，置碘量瓶中，加水，置碘量瓶中，加水10ml10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L)25ml0.1mol/L)25ml，再加盐，再加盐酸酸5ml5ml，立即密塞并振摇，立即密塞并振摇1min1min，暗处静置，暗处静置15min15min后，加碘化钾试后，加碘化钾试液液10ml10ml，立即密塞摇匀，用，立即密塞摇匀，用0.0999mol/L0.0999mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液果用空白试验校正。已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液15.05ml15.05ml，空白消耗，空白消耗25.05ml25.05ml，每，每mlml溴滴定液（溴滴定液（0.1mol/L)0.1mol/L)相当于相当于13.01mg13.01mg的的司可巴比妥。计算含量司可巴比妥。计算含量片剂含量测定结果的计算 烟酸片含量测定烟酸片含量测定 取本品10片片精密称定为3.5840g，研细，精密称取0.3729g，置100 mL锥形瓶中水浴加热溶解后，放冷。加酚酞指示剂3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1005mol/L)滴定至粉红色消耗25.02 mL。每1mL氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当12.31mg的烟酸。求供试品中烟酸的标示百分含量（标示量0.3g/片）。标示量标示量%=V T F 平均片重平均片重W 标示量标示量100%=25.02 12.31/1000 0.1005/0.10.35840.3729 0.3=99.17%100%二、光谱分析法二、光谱分析法 （一）紫外（一）紫外-可见分光光度法（可见分光光度法（200nm200nm760nm)760nm)灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-7g/ml 10-4g/ml 1.特点特点 准确度高，准确度高，RSD（%）1.5c内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质校正因子（f）=AS/CSAR/CR含量（CX）=fAS/CSAX内标法优点：内标法优点：内标法优点：内标法优点：进样量不超量时，重复性及操作条件对结果无影响进样量不超量时，重复性及操作条件对结果无影响只只需需待待测测组组分分和和内内标标物物出出峰峰，与与其其他他组组分分是是否否出出峰峰无关无关 。内标法缺点：内标法缺点：内标法缺点：内标法缺点：制样要求高；须寻找合适内标物制样要求高；须寻找合适内标物n n外标法特点：外标法特点：1 1）不需要校正因子，不需要所有组分出峰）不需要校正因子，不需要所有组分出峰 2 2）结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大）结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大 每次进样量应一致，否则产生误差每次进样量应一致，否则产生误差n n例：醋酸氢化可的松的含量采用例：醋酸氢化可的松的含量采用HPLCHPLC法测定：取法测定：取本品对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每本品对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每mlml约含约含0.35mg0.35mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（0.30mg/ml0.30mg/ml炔诺酮甲醇溶液）各炔诺酮甲醇溶液）各5ml5ml，置，置25ml25ml量瓶量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10ul10ul注入液相色注入液相色谱仪，记录色谱图。另取本品适量，同法测定，按谱仪，记录色谱图。另取本品适量，同法测定，按内标法计算含量。已知：对照品取样为内标法计算含量。已知：对照品取样为36.2mg36.2mg，样，样品取样为品取样为35.5mg35.5mg，测得对照液中醋酸氢化可的松和，测得对照液中醋酸氢化可的松和内标的峰面积分别为内标的峰面积分别为54678245467824和和61258436125843，样品液中，样品液中药物和内标的峰面积分别为药物和内标的峰面积分别为52213455221345和和61228456122845，计，计算本品的含量算本品的含量 n n概述概述概述概述 含金属与卤素药物须处理后进行测定。处理方法视结合牢固含金属与卤素药物须处理后进行测定。处理方法视结合牢固含金属与卤素药物须处理后进行测定。处理方法视结合牢固含金属与卤素药物须处理后进行测定。处理方法视结合牢固程度而异。卤素与芳环相连牢固；与脂肪族碳相连，结合不程度而异。卤素与芳环相连牢固；与脂肪族碳相连，结合不程度而异。卤素与芳环相连牢固；与脂肪族碳相连，结合不程度而异。卤素与芳环相连牢固；与脂肪族碳相连，结合不牢固。牢固。牢固。牢固。含金属药物：金属不直接与碳相连为含金属的有机药物，不含金属药物：金属不直接与碳相连为含金属的有机药物，不含金属药物：金属不直接与碳相连为含金属的有机药物，不含金属药物：金属不直接与碳相连为含金属的有机药物，不牢固，一般直接测定；金属与碳相连为有机金属药物，须适牢固，一般直接测定；金属与碳相连为有机金属药物，须适牢固，一般直接测定；金属与碳相连为有机金属药物，须适牢固，一般直接测定；金属与碳相连为有机金属药物，须适当处理。当处理。当处理。当处理。第二节 定量分析样品前处理方法不经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法1 1、直接测定法、直接测定法、直接测定法、直接测定法n n金属元素不直接与碳原子相连的含金属有机药物或金属元素不直接与碳原子相连的含金属有机药物或C-MC-M键结合不牢的有机金属药物，在水溶液中可电键结合不牢的有机金属药物，在水溶液中可电离，不须破坏直接采用适当的方法测定离，不须破坏直接采用适当的方法测定n n如葡萄糖酸钙中的钙离子如葡萄糖酸钙中的钙离子-EDTA-EDTA络合滴定络合滴定一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法2 2、经（酸、碱）水解后测定法、经（酸、碱）水解后测定法、经（酸、碱）水解后测定法、经（酸、碱）水解后测定法n n方法原理（卤素）：将含卤素的有机药物溶于适方法原理（卤素）：将含卤素的有机药物溶于适当溶剂中，加氢氧化钠或硝酸银溶液加热回流使当溶剂中，加氢氧化钠或硝酸银溶液加热回流使其水解，将有机结合的卤素，经水解作用转变为其水解，将有机结合的卤素，经水解作用转变为无机卤素离子，然后采用间接银量法测定。如三无机卤素离子，然后采用间接银量法测定。如三氯叔丁醇的测定。氯叔丁醇的测定。n n间接银量法：定量加入过量的间接银量法：定量加入过量的AgNOAgNO3 3 ，过量的，过量的硝酸银以硫氰酸铵为滴定剂，硫酸铁铵为指示剂硝酸银以硫氰酸铵为滴定剂，硫酸铁铵为指示剂滴定。滴定。CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH 回流回流(CH3)2-CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3 AgCl+NaNO3 AgNO3+NH4SCNAgSCN +NH4NO3（淡棕红色）（淡棕红色）(Ksp=1.561010)(Ksp=1.010-12)Fe3+SCN Fe(SCN)2+3 3、经还原后测定法、经还原后测定法、经还原后测定法、经还原后测定法碱性还原后测定碱性还原后测定n n方法原理；在氢氧化钠和锌粉存在的条件下，有方法原理；在氢氧化钠和锌粉存在的条件下，有机药物（多用于含碘有机药物）加热回流，发生机药物（多用于含碘有机药物）加热回流，发生还原裂解反应，使有机结合的卤素（碘）转变为还原裂解反应，使有机结合的卤素（碘）转变为无机卤素离子（碘离子），继而采用间接银量法无机卤素离子（碘离子），继而采用间接银量法或其他方法进行测定，如泛影酸的测定。或其他方法进行测定，如泛影酸的测定。n n适用范围：碘原子与苯环直接相连的药物。适用范围：碘原子与苯环直接相连的药物。例例 泛影酸的测定泛影酸的测定 取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+11NaOH +Zn回流回流COONaNH2 H2N+3NaI +2CH3COONa+2Na2ZnO2 +H2O酸性还原后测定法酸性还原后测定法酸性还原后测定法酸性还原后测定法n n方法原理；在醋酸和锌粉存在的条件下，有机方法原理；在醋酸和锌粉存在的条件下，有机药物（多用于含碘有机药物），发生还原裂解药物（多用于含碘有机药物），发生还原裂解反应，使有机结合的卤素（碘）转变为无机卤反应，使有机结合的卤素（碘）转变为无机卤素离子（碘离子），采用银量法测定卤素离子素离子（碘离子），采用银量法测定卤素离子的含量。的含量。二、经有机破坏的分析方法二、经有机破坏的分析方法（一）、湿法破坏（一）、湿法破坏n n硝酸硝酸-高氯酸法：破坏能力强，反应激烈，需防止爆炸。高氯酸法：破坏能力强，反应激烈，需防止爆炸。适用于生物样品的破坏，所得的无机金属离子为适用于生物样品的破坏，所得的无机金属离子为高价态高价态。n n硝酸硝酸-硫酸法：适用于与碳原子结合牢固的绝大多数含金硫酸法：适用于与碳原子结合牢固的绝大多数含金属有机药物的破坏分解（但不适用于含碱土金属类有机药属有机药物的破坏分解（但不适用于含碱土金属类有机药物），所得的无机金属离子为物），所得的无机金属离子为高价态高价态。n n硫酸硫酸-硫酸盐法：常用的硫酸盐为硫酸钾，所得的无机金硫酸盐法：常用的硫酸盐为硫酸钾，所得的无机金属离子为属离子为低价态低价态。常用于含砷或锑有机药物的破坏分析。常用于含砷或锑有机药物的破坏分析。凯氏定氮法凯氏定氮法凯氏定氮法凯氏定氮法-含氮有机药物定量分析方法含氮有机药物定量分析方法含氮有机药物定量分析方法含氮有机药物定量分析方法 原理：常用凯氏定氮法测定天然有机物原理：常用凯氏定氮法测定天然有机物(如蛋白质、核酸及氨如蛋白质、核酸及氨基酸等基酸等)的含氮量。含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的的含氮量。含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进碳、氢元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。浓碱可使消化液中的硫酸铵分一步与硫酸作用生成硫酸铵。浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量的硼酸溶解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后用标准无机酸滴定，最后根据所用标准液中，硼酸吸收氨后用标准无机酸滴定，最后根据所用标准酸的摩尔数计算出待测物中的总氮量。酸的摩尔数计算出待测物中的总氮量。CHCH2 2NHNH2 2COOH+3HCOOH+3H2 2SOSO4 4 2CO2CO2 2+3SO+3SO2 2十十4H4H2 2OO十十NHNH3 3 2NH2NH3 3+H+H2 2SOSO4 4 (NH(NH4 4)2 2SOSO4 4 (NH(NH4 4)2 2SOSO4 4+2NaOH 2NH+2NaOH 2NH3 3+H+H2 2O+NaO+Na2 2SOSO4 4NHNH3 3+H+H3 3BOBO3 3 NH NH4 4BOBO2 2+H2O+H2ONHNH4 4BOBO2 2+H+H2 2SOSO4 4+2H+2H2 2O O (NH(NH4 4)2 2SOSO4 4+2H+2H3 3BOBO3 3 （直接滴定法直接滴定法）还可用剩余滴定法或甲醛法滴定还可用剩余滴定法或甲醛法滴定n n消解剂：消解剂：硫酸硫酸消解时通常需要加入消解时通常需要加入硫酸钾或硫酸钠硫酸钾或硫酸钠以提以提高反应液的沸点，并加入高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂硫酸铜作为催化剂，以促进反，以促进反应的进行。对某些难以分解的药物（如含氮杂环结构药应的进行。对某些难以分解的药物（如含氮杂环结构药物），在消解过程中常还需加入辅助氧化剂，以使分解物），在消解过程中常还需加入辅助氧化剂，以使分解完全并缩短消解时间。常用的完全并缩短消解时间。常用的辅助氧化剂有过氧化氢和辅助氧化剂有过氧化氢和高氯酸高氯酸，但需慎用。，但需慎用。某一固体样品中的含氮量是用某一固体样品中的含氮量是用100g100g该物质该物质(干重干重)中所中所含氮的含氮的g g数来表示数来表示()。因此在定氮前，应先将固体。因此在定氮前，应先将固体样品中的水分除掉。若样品为液体样品中的水分除掉。若样品为液体(如血清等如血清等)，可取，可取一定体积样品直接消化测定。一定体积样品直接消化测定。常量法取供试品的量约相当于常量法取供试品的量约相当于含氮量含氮量2530mg2530mg 半微量法供试品取样量约相当于半微量法供试品取样量约相当于含氮量含氮量1.02.0mg1.02.0mg n n中国药典用本法测定含有中国药典用本法测定含有氨基或酰胺结构的药物含量氨基或酰胺结构的药物含量。对。对于以于以偶氮或肼偶氮或肼等结构存在的含氮药物，因在消解过程中易等结构存在的含氮药物，因在消解过程中易于生成氮气而损失，须在消解前于生成氮气而损失，须在消解前加锌粉还原加锌粉还原后再依法处理；后再依法处理；而而杂环中的氮杂环中的氮因不易断键而难以消解，可用因不易断键而难以消解，可用氢碘酸或红磷氢碘酸或红磷还原为氢化杂环还原为氢化杂环后再行消解。对于后再行消解。对于含氮量较高含氮量较高的样品（超的样品（超过过10%10%），可在消解液中加入），可在消解液中加入少量多碳化合物少量多碳化合物，如蔗糖、淀，如蔗糖、淀粉等作为还原剂，以利于氮转变为氨。粉等作为还原剂，以利于氮转变为氨。（二）、干法破坏（二）、干法破坏1 1、高温炽灼法、高温炽灼法 将有机物灼烧灰化以达分解的目的。将适量样品置于瓷将有机物灼烧灰化以达分解的目的。将适量样品置于瓷坩埚或铂坩埚中，加入无水碳酸钠、氢氧化钙或轻质氧坩埚或铂坩埚中，加入无水碳酸钠、氢氧化钙或轻质氧化镁等以助灰化，混匀后，先小火加热使样品完全炭化，化镁等以助灰化，混匀后，先小火加热使样品完全炭化，然后高温灼烧，使其完全灰化。然后高温灼烧，使其完全灰化。本法适用于湿法不易破坏完全的药物以及不能用硫酸进行本法适用于湿法不易破坏完全的药物以及不能用硫酸进行破坏的有机药物。破坏的有机药物。2 2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法n n系指将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中系指将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别，检查或含量测定。适宜的分析方法进行鉴别，检查或含量测定。适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析本法简便、快速、破坏完全，尤其用于微量样品分析本法简便、快速、破坏完全，尤其用于微量样品分析基本原理基本原理n n有机物有机物 充充OO2 2烧瓶烧瓶 燃烧燃烧 产物产物 吸收液吸收液 分析分析仪器装置和设备仪器装置和设备（1 1）燃烧瓶）燃烧瓶（2 2）称样材料及称样方法：无灰滤纸：适用于固体；纸袋：适）称样材料及称样方法：无灰滤纸：适用于固体；纸袋：适用于液体用于液体（3 3）氧气：采用钢瓶氧气）氧气：采用钢瓶氧气，防止导气管污染。防止导气管污染。（4 4）吸收液：定量吸收供试品的燃烧分解产物，使其转变为便）吸收液：定量吸收供试品的燃烧分解产物，使其转变为便于测定的价态。于测定的价态。药物药物破坏后破坏后吸收液吸收液定量方法定量方法含氟含氟氟化氢氟化氢水水硒素氟蓝比色硒素氟蓝比色法法含氯含氯氯化氢氯化氢NaOHNaOH水溶液水溶液银量法银量法含溴含溴溴溴+溴化氢溴化氢NaOHNaOH水溶液水溶液+还原剂还原剂SOSO2 2银量法银量法含碘含碘各种价态碘各种价态碘NaOHNaOH水溶液水溶液+还原剂还原剂SOSO2 2银量法银量法含硫含硫三氧化硫三氧化硫HH2 2OO2 2溶液溶液重量法重量法含磷含磷五氧化二磷五氧化二磷水水磷钼蓝比色法磷钼蓝比色法含硒含硒四价硒四价硒+少量六价硒少量六价硒硝酸溶液硝酸溶液二氨基萘比色二氨基萘比色法法选择原则：被测物质的种类及所用分析方法选择原则：被测物质的种类及所用分析方法3 3、注意事项：、注意事项：（1 1）燃烧瓶：大小适宜、干净、有防爆措施）燃烧瓶：大小适宜、干净、有防爆措施（2 2）氧气要充足：燃烧完全（不得有黑色炭化物）氧气要充足：燃烧完全（不得有黑色炭化物）（3 3）产生烟雾应完全被吸收：充分振摇）产生烟雾应完全被吸收：充分振摇烟雾颜色：碘，紫色；溴，红棕色；氟、氯烟雾颜色：碘，紫色；溴，红棕色；氟、氯,白白（4 4）测定氟化物：石英制燃烧瓶）测定氟化物：石英制燃烧瓶 待分解样品量待分解样品量待分解样品量待分解样品量 燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积 35mg 35mg（微量分析）（微量分析）（微量分析）（微量分析）150250ml 150250ml 2030mg 2030mg（半微量分析）（半微量分析）（半微量分析）（半微量分析）300500ml 300500ml 5060mg 5060mg 1000ml 1000ml 0.60.7g 0.60.7g或更多或更多或更多或更多 2000ml 2000ml或特殊结构或特殊结构或特殊结构或特殊结构的燃烧瓶的燃烧瓶的燃烧瓶的燃烧瓶 正确选用燃烧瓶的目的在于：样品能在足够的氧气中燃烧分解完全；有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。需验证的分析项目需验证的分析项目1.1.鉴别试验；鉴别试验；2.2.杂质定量或限度检查；杂质定量或限度检查；3.3.原料或制剂中有效成分含量测定；原料或制剂中有效成分含量测定；4.4.制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定；制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定；5.5.溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证一、准确度一、准确度 是指用该方法是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示 （一）含量测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1.原料药原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确 度的另一方法测定的结果进行比较。度的另一方法测定的结果进行比较。2.制剂制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原 料对照品的方法作回收率试验，然后计算料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。具体做法：测定高、中、低三个浓度（具体做法：测定高、中、低三个浓度（n=3）,共共9个数据来评个数据来评价，回收率的价，回收率的RSD2%；用；用UV和和HPLC法时，一般回收率可达法时，一般回收率可达98%102%；容量法可达；容量法可达99.7%100.3%二、精密度二、精密度 是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果 之间的接近程度。之间的接近程度。（一）精密度表示方法（一）精密度表示方法 1.偏差偏差(deviation,d)d=测得值测得值-平均值平均值=Xi-X 2.标准偏差（标准偏差（standard deviation,SD或或S）S=(Xi X)2/(n-1)1/2 3.相对标准差相对标准差(relative standard deviation,RSD)RSD=标准偏差标准偏差/平均值平均值100%=S/X 100%（二）重复性、中间精密度及重现性（二）重复性、中间精密度及重现性 1.重复性重复性 在相同条件下在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度由一个分析人员测定所得结果的精密度.2.中间精密度中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不 同设备测定结果的精密度。同设备测定结果的精密度。3.重现性重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。三、专属性三、专属性 是指在其他成分是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检 查、含量测定方法，均应考察其专属性。查、含量测定方法，均应考察其专属性。（一）鉴别反应（一）鉴别反应 应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分 的样品均应呈现负反应。的样品均应呈现负反应。（二）含量测定和杂质测定（二）含量测定和杂质测定 色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。在能图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。在能 获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂 质和降解物不能获得的情况下，可用已验证方法和药典方法进质和降解物不能获得的情况下，可用已验证方法和药典方法进 行对照；也可用对试样加速破坏的方法进行验证。行对照；也可用对试样加速破坏的方法进行验证。四、检测限四、检测限 是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验 指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。（一）常用的方法（一）常用的方法 1.1.非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用已知浓度被测物，试验出能被可靠地用已知浓度被测物，试验出能被可靠地 检测出的最低浓度或量。检测出的最低浓度或量。2.2.仪器分析方法仪器分析方法 GCGC和和HPLCHPLC法：法：LODLOD=S S/N N=2=2或或3 3 五、定量限五、定量限 是指样品中是指样品中被测物能被定量测定的最低量，被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应其测定结果应 具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求 LOQLOQ.常用信噪比法确定定量限，一般以常用信噪比法确定定量限，一般以S/N=10S/N=10时，相应的浓度时，相应的浓度进行测定。进行测定。六、线性六、线性 是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接 呈正比关系的程度。呈正比关系的程度。UVUV法：首先制备一个标准系列，浓度点法：首先制备一个标准系列，浓度点n=5;A=0.3n=5;A=0.30.70.7 建立回归方程建立回归方程C=aA+b;r C=aA+b;r 0.9990.999。HPLCHPLC法：制备一个标准系列，浓度点法：制备一个标准系列，浓度点n=5 n=5 7;7;以以C C对对h h或或A A或与或与 内标物的峰面积之比，建立回归方程内标物的峰面积之比，建立回归方程r r0.9990.999。七、范围七、范围 是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或量的区间适用的高低限度或量的区间。原料药和制剂含量测定原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的：范围应为测试浓度的80%120%。制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的70%130%。溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限度的溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限度的20%20%。八、耐用性八、耐用性 是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受承受 程度。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、程度。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、时间等。时间等。HPLC法变动因素有：流动相组成与法变动因素有：流动相组成与pH，色谱柱，柱温，流速。，色谱柱，柱温，流速。GC法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检测器温度等。检测器温度等。分析方法效能指标的要求分析方法效能指标的要求分析方法效能指标的要求分析方法效能指标的要求1、非定量方法：用于鉴别试验、杂质的限量检查，只对、非定量方法：用于鉴别试验、杂质的限量检查，只对专属性、耐用性和检测限有要求，其余均无须要求。专属性、耐用性和检测限有要求，其余均无须要求。2、用于原料药中主成分或制剂中有效成分含量测定及溶、用于原料药中主成分或制剂中有效成分含量测定及溶出度测定，除了检测限和定量限外，其余均要求。出度测定，除了检测限和定量限外，其余均要求。3、杂质测定或制剂中降解物测定：属于微量定量分析，、杂质测定或制剂中降解物测定：属于微量定量分析，除检测限不必要求外，其余七项指标均应有所要求除检测限不必要求外，其余七项指标均应有所要求。