分析方法验证、转移和确认.pdf

中国食品药品检定研究院中国食品药品检定研究院National Institutes for Food and Drug Control分析方法验证、转移和确认分析方法验证、转移和确认许明哲中国食品药品检定研究院中国食品药品检定研究院中国食品药品检定研究院National Institutes for Food and Drug Control中国食品药品检定研究院中国食品药品检定研究院National Institutes for Food and Drug Control中国食品药品检定研究院中国食品药品检定研究院National Institutes for Food and Drug ControlNational Institutes for Food and Drug Control检验结果的主要质量要素检验结果的主要质量要素分析仪器分析仪器分析方法分析方法系统适用性试验系统适用性试验质控样品质控样品Analytical instrument qualificationSystem suitability testsAnalytical method validationQuality control check samplesNational Institutes for Food and Drug Control基本概念基本概念 方法验证方法验证（method validation）方法转移方法转移（method transfer）方法确认方法确认（method verification）National Institutes for Food and Drug Control现现状状目前存在的问题：目前存在的问题：概念不清 无章可依1）ICH Q2A和Q2B的方法主要是对生产企业在产品分析方法研发的时候进行的全面验证2）各国药典收载的分析方法验证内容和目的基本与ICH指导原则一致National Institutes for Food and Drug Control一个进口复核检验的实例一个进口复核检验的实例 他克莫司（Tacrolimus），也称普乐可复，代号FK506，是一种高效低毒的新型免疫抑制剂。1984年日本藤泽药品有限公司（Fujisawa Healthcare,Inc.）首次从土壤“筑波链霉菌”的肉汤发酵物中提取出FK506，其化学结构属23元环大环内酯类抗生素，类似于红霉素。该药1989年开始用于临床，1995年经美国FDA批准后开始使用。National Institutes for Food and Drug Control一个进口复核检验的实例一个进口复核检验的实例National Institutes for Food and Drug Control实例分析实例分析他克莫司软膏剂含量测定他克莫司软膏剂含量测定（进口药品质量标准复核工作）（进口药品质量标准复核工作）品种名称品种名称他克莫司软膏剂他克莫司软膏剂规规格格0.1%0.1%和和0.03%0.03%1g1g的软膏相当于的软膏相当于1mg1mg和和0.3mg0.3mg主成分主成分检验目的检验目的进口质量标准复核进口质量标准复核样品基质样品基质石蜡、凡士林、羊毛脂、矿物油石蜡、凡士林、羊毛脂、矿物油样品总量样品总量30g/30g/管管National Institutes for Food and Drug Control实例分析实例分析他克莫司软膏剂含量测定他克莫司软膏剂含量测定供试品溶液制备供试品溶液制备：样品内容物,移至广口玻璃瓶(预先冲洗)混匀准确称取1g软膏,臵50ml量瓶+12ml四氢呋喃水浴至60慢搅至软膏溶解精密+4.0ml水混旋液小心振摇冰浴10min剧烈振摇30s室温静臵4h滤膜孔径0.5 m弃去初滤液收集滤液供试品溶液(48h内稳定)取出,平衡至室温精密+4.0ml无水乙醇过滤相当于1mg他克莫司(0.1%软膏)和0.3mg他克莫司(0.03%软膏)National Institutes for Food and Drug ControlNational Institutes for Food and Drug Control专属性专属性 异构体异构体2 2与与他克莫司主峰分离度与与他克莫司主峰分离度分离度大于2，人工降解溶液 他克莫司主峰峰纯度检查他克莫司主峰峰纯度检查根据他克莫司样品溶液的HPLC光谱图，他克莫司主峰的纯度角为0.412，比纯度阈值（2.048）小，可见他克莫司主峰是纯的National Institutes for Food and Drug Control准确度准确度采用测定绝对回收率的方法判断其准确度。向空白软采用测定绝对回收率的方法判断其准确度。向空白软膏基质中加入已知量的他克莫司对照品，按照含量测膏基质中加入已知量的他克莫司对照品，按照含量测定方法进行回收率测定。每个规格分别测定相当于标定方法进行回收率测定。每个规格分别测定相当于标示浓度的示浓度的8080，100100和和120120共三个浓度的回收率，共三个浓度的回收率，每个浓度平行每个浓度平行3 3份。份。National Institutes for Food and Drug Control他克莫司软膏剂含量测定他克莫司软膏剂含量测定供试品溶液制备供试品溶液制备：样品内容物,移至广口玻璃瓶(预先冲洗)混匀准确称取1g软膏,臵50ml量瓶+12ml四氢呋喃水浴至60慢搅至软膏溶解精密+4.0ml水混旋液小心振摇冰浴10min剧烈振摇30s室温静臵4h滤膜孔径0.5 m弃去初滤液收集滤液供试品溶液(48h内稳定)取出,平衡至室温精密+4.0ml无水乙醇过滤相当于1mg他克莫司(0.1%软膏)和0.3mg他克莫司0.03%软膏)National Institutes for Food and Drug Control规格加入对照品的量n回收率%平均回收率RSD0.03801100.4100.60.42101.13100.3100198.9100.21.6299.73101.9120197.098.72.3297.83101.3National Institutes for Food and Drug Control精密度精密度 重复性和中间精密度（日间）的考察。在一天之内重复性和中间精密度（日间）的考察。在一天之内，分别连续进行，分别连续进行6 6次含量测定，次含量测定，6 6次结果之间的次结果之间的RSDRSD分分别为别为0.940.94(n=6)(n=6)。中间精密度的考察是连续。中间精密度的考察是连续3 3天天测定含量，每天平行测定测定含量，每天平行测定3 3份。份。3 3天之间测定结果的天之间测定结果的RSDRSD为为1.3%(n=9)1.3%(n=9)National Institutes for Food and Drug Control线性线性 对两种规格的软膏分别考察了浓度范围为其含量测对两种规格的软膏分别考察了浓度范围为其含量测定浓度的定浓度的5050150150之间的线性关系，其中，规格之间的线性关系，其中，规格为为30g30g，0.030.03/支的线性方程为：支的线性方程为：y=6995488x y=6995488x-64.2,r=0.999964.2,r=0.9999，浓度范围为：，浓度范围为：0.00750.00750.225mg/ml0.225mg/ml；规格为；规格为30g30g，0.10.1/支的线性方程为：支的线性方程为：y=6989786x+105.4,r=0.9999y=6989786x+105.4,r=0.9999，浓度范围为：，浓度范围为：0.0250.0250.075mg/ml0.075mg/ml。National Institutes for Food and Drug Control溶液的稳定性溶液的稳定性0.00E+001.00E+052.00E+053.00E+054.00E+055.00E+056.00E+0501234612 24 48 60 72时间（hr）峰面积（AU）National Institutes for Food and Drug Control进口复核（方法转移）进口复核（方法转移）他克莫司软膏剂含量测定他克莫司软膏剂含量测定供试品溶液制备供试品溶液制备：样品内容物,移至广口玻璃瓶(预先冲洗)混匀准确称取1g软膏,臵50ml量瓶+12ml四氢呋喃水浴至60慢搅至软膏溶解精密+4.0ml水混旋液小心振摇冰浴10min剧烈振摇30s室温静臵4h滤膜孔径0.5 m弃去初滤液收集滤液供试品溶液(48h内稳定)取出,平衡至室温精密+4.0ml无水乙醇过滤相当于1mg他克莫司(0.1%软膏)和0.3mg他克莫司(0.03%软膏)National Institutes for Food and Drug Control进口复核（方法转移）进口复核（方法转移）软膏样品的称量软膏样品的称量 四氢呋喃水浴溶解四氢呋喃水浴溶解 申报材料的文字翻译（色谱柱）申报材料的文字翻译（色谱柱）正丁基氯的挥发性正丁基氯的挥发性 流动性低温不稳定，分层流动性低温不稳定，分层 重现性重现性National Institutes for Food and Drug Control方法转移方法转移规格规格批号批号NIFDC含量含量企业含量企业含量0.0312711103.1103.113041102.4101.313131102.1102.90.112741100.1101.112761100.899.31277199.299.7National Institutes for Food and Drug Control方法验证适用范围方法验证适用范围 新分析方法的建立全面的验证：专属性、准确度、精密度、线性、检测线、耐用性 认为有问题需要重新进行验证的方法。主要是药品生产企业的研发部门建立新分析方法时使用。National Institutes for Food and Drug Control方法转移适用范围方法转移适用范围 进口药品质量标准复核 药典质量标准协作起草 企业内部分析方法由研发部门转移到质控部门 企业位于不同地点的生产工厂之间的方法转移 企业委托检验（A企业委托 B公司检验）方法转移最常用的方法是比对National Institutes for Food and Drug Control方法确认适用范围方法确认适用范围 药典各论中收载的分析方法一般不需要再进行验证。需要进行方法确认。方法确认的内容和具体方法有关，根据试验人员对方法的理解和经验由试验人员自己确定。National Institutes for Food and Drug Control小小结结方法建立者方法建立者企业研发部门企业研发部门)方法验证方法验证药典分析方法（药检所）药典分析方法（药检所）方法转移方法转移建立者和使用者之间建立者和使用者之间进口药品质量标准复核工作进口药品质量标准复核工作药典质量标准协作起草药典质量标准协作起草方法确认方法确认National Institutes for Food and Drug Control方法验证方法验证 证明分析方法适用于期望用途的过程，该过程必须有文件记录。The documented process by which an analytical procedure(or method)is demonstrated to be suitable for its intended use.National Institutes for Food and Drug Control方法转移方法转移 当经过验证的分析方法在实验室之间转移时，方法接收实验室应该证明其能够成功的操作此方法。When validated method are transferred between laboratories the receiving laboratory should demonstrate that it can successfully performed the method.(USP 1226)National Institutes for Food and Drug Control方法确认（方法确认（WHOWHO定义）定义）证明一个药典方法或者经过验证的方法适用于本次检验的过程。Process by which a pharmacopeial method or validated analytical procedure is demonstrated to be suitable for the analysis to be performed.(WHO定义定义)National Institutes for Food and Drug Control方法确认（方法确认（USPUSP定义）定义）方法使用者应该具有足够的经验知识以及相关培训，对药典方法有充分的了解并且能够按照方法进行操作。Users should have the appropriate experience,knowledge,and training to understand and be able to perform the compendial procedures as written.National Institutes for Food and Drug Control方法确认（方法确认（USPUSP定义）定义）使用者应该对药典方法进行确认，以保证方法操作正确无误。Verification should be conducted by the user such that the results will provide confidence that the compendial procedure will perform suitable as intended.National Institutes for Food and Drug Control专栏文章专栏文章 许明哲，黄宝斌，杨青云等，药品分析方法验证、方法转移药品分析方法验证、方法转移和方法确认概念解析，和方法确认概念解析，药物分析杂志，2015年第一期 许明哲，黄宝斌，杨青云等，药品分析方法确认，药品分析方法确认，药物分析杂志，2015年第一期 许明哲，田学波，杨青云等，药品分析方法转移，药品分析方法转移，药物分析杂志，2015年第一期 许明哲，金少鸿等，分析仪器确认，分析仪器确认，药物分析杂志，2015年第二期 许明哲，金少鸿等，异常检验结果处理，异常检验结果处理，药物分析杂志，2015年第三期 National Institutes for Food and Drug Control分析仪器相关软件分析仪器相关软件/计算机的管理计算机的管理 与分析仪器相连计算机应设臵使用者本人密码 软件使用应建立用户名制度 HPLC的序列进样程序应保存并打印 电子表格等计算软件需要进行验证National Institutes for Food and Drug ControlNational Institutes for Food and Drug Control94.0)12.1(3/)08.1(6)71.0()41.1(22InInInInCpmNational Institutes for Food and Drug Control问问题？题？010-6709 5918