茶叶中茶多糖的提取和测定方法.pdf

续表2大豆异黄酮 本低值 加标量 测定均值 回收率%RSD%染料木甙0.050.045.891.94.7100.094.394.35.4金雀异黄素298.0100.039395.01.5200.049096.22.22.6 方法的精密度 对试样同时进行6次测定,结果见表3。四种异黄酮测定结果的重现性均符合分析要求。表3 方法的精密度结果(g/g)异黄酮123456平均值RSD%Daidzin77.7 74.1 68.6 76.9 77.1 81.576.05.7Gennistin45.8 44.2 48.9 46.1 47.7 43.046.04.7Daidzein78.9 78.5 78.1 79.4 78.1 77.778.41.0Genistein49.2 49.8 50.5 48.9 48.1 47.749.02.12.7实际样品测定 采用本方法对6份样品进行测定,检测结果表明,由于大豆异黄酮在常温状态下稳定,检测方法重现性好,与标示值相基本吻合。参考文献1 Messina M,Persky V,Setchell K DR,et al.Soy intake and cancer risk:A re2view of the in vitro and in vivo dataJ.Nutr Cancer,1994,21:113.2 Anderson JW,Johnstone BM,Cook-Newell ME.Meta-analysis of the ef2fects of soy protein intake on serum lipidsJ.New Engl J Med,1995,332:276.3 Blair HC,Jordan SE,Peterson TG,et al.Variable effect of tyrosine kinaseinhibitors on avian osteoclastic activity and reduction of bone loss in o2variectomized ratsJ.J Cell Biochem,1996,60:1761.4 Liggins J,Bluck LJ,Coward WA,et al.Extrction and quantification ofdaidzein and gennistein infood.Analitical BiochemistryJ ,1998,264(1):1.5 Franke AA,Custer LJ,Wang W,et al.HPLC analysis of isoflavonoids andother phenolic agents from foos and from human fluids.Proc Soc Exp BiolMedJ ,1998,217(3):263.6 Franke AA,Custer LJ,Cerna CM,et al.Rapid HPLC analysis of dietaryphytoestrogens from legumes and from human urine.Proc Soc Exp Biol MedJ ,1995,208(1):18.7 Barnes S,Coward L,K irk M,et al.HPLC-Mass spectrometry analysis ofisoflavones.Proc Soc Exp Biol MedJ ,1998,217(3):254.8 Nurmi T,Mazur W,Heinonnen S,et al.Isoflavone content of soy based sup2plements.J Pharm Biomed AnalJ ,2002,28(1):1.9 Aussenac T,Lacombe S,and DaydJ.Quantificationof isoflavones by capil2lary zone electrophoresis in soybean seeds:effects of variety and environ2ment.AmJ Clin NutrJ ,1998,68(6 suppl):1480.10孙梅君,骆炼,史长颖,等.中国大豆制品中异黄酮含量测定分析研究J.食品与发酵工业,1999,26(5):14.11常凤启,韩会新,陈贵茹,等.HPLC法测定食品中金雀异黄素J.中国食品卫生杂志,2003,15(6):500.12 Rostagno MA,Palma M,Barroso CG.Ultrasound-assisted extraction ofsoy isoflavonesJ.J Chromatogr A,2003,1012(2):119.(收稿日期:2003209210)【研究报告】文章编号100428685(2004)042432202茶叶中茶多糖的提取和测定方法陈建国,胡欣,梅松(浙江省医学科学院,杭州 310013)摘 要 目的 建立一种简便、快速、灵敏的测定茶叶中茶多糖含量的方法。方法 按醇析水提法,通过正交试验获得茶多糖提取最佳条件,苯酚 硫酸法比色测定茶多糖含量。结果 茶多糖吸收波长为490nm;线性范围为872g/ml;重现性好,CV=0.956%(n=6);平均回收率为99.9%,CV=2.037%(n=6);不同茶叶样品茶多糖含量在1.292%41529%之间。结论 该法简便、快速、稳定、灵敏,重现性好。茶叶越粗老茶多糖含量越高。关键词 茶叶;茶多糖;提取;含量;测定方法A new method for extraction and determination of tea-polysaccharide in teaChen Jianguo,Hu Xing,Mei Song.Zhejiang Academy of Medical Sciences,Hangzhou310013,ChinaAbstract ObjectiveT o develop a simple,rapid and accurate method for determination of tea-polysaccharide(TPS)in tea.MethodsTPS was extracted by back-flow with alcohol and water in the samples.The best conditionfor extracting TPS in tea was de2termined by orthogonal test.The UV spectrophotometer was used to determine the content of TPS by using phenol-sulfuric acid.Re2sultsThe linear rage was 8-72 mg/ml,repeatability was good(CV=0.956%,n=6)and the average recovery was 99.9%.The con2tent of TPS in different tea samples was 1.292%-4.529%.ConclusionsThis method is simple,rapid and accurate.Key wordsTea;Polysacchride;Extraction;Determination;Method 中图分类号R151 文献标识码A 茶多糖(Tea-polysaccharide,简称TPS)系茶叶中重要的生理活性成分,具有降血糖、降血脂、增强免疫力、降血压、减慢心率、增加冠脉流量、抗凝血、抗血栓和耐缺氧等功效1-3,已日益引起人们的关注。为了合理开发、利用茶叶资源,迫切需要建立一种快速、灵敏,而又简单、易行的茶多糖含量测定方法,为此,我们进行了本研究。234中国卫生检验杂志2004年8月第14卷第4期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology 20041August1141No14浙江省医药卫生科学研究基金资助1 材料与试剂1.1 材料1.1.1 粗老茶 采自杭州近郊,炒青、龙井等均为市售,茶多糖样品由中国茶科所提供。1.1.2 标准溶液配制 准确吸取宁波慈城生化试剂厂生产的浓度为1mg/ml的标准葡萄糖溶液4ml于100ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀置4 冰箱备用。1.1.380%苯酚溶液配制 分析纯苯酚在油浴上加热至182 蒸馏,取该馏分的苯酚80g加蒸馏水20g使之溶解,摇匀置棕色瓶中、4 冰箱可长期贮存备用。1.1.46%苯酚溶液配制 临用前用80%苯酚溶液加蒸馏水稀释配制而成。1.1.5 浓硫酸、无水酒精 均为分析纯。1.1.6 仪器设备 岛津UV-2100型紫外-可见光分光光度仪,水浴锅,回流提取装置,抽滤器等。2 方法与结果2.1 茶多糖提取最佳条件选择 采用醇析水提法,按正交试验4进行提取最佳条件的选择(另文报道)。2.2 茶多糖提取 按2.1获得的最佳提取条件进行。称取茶叶样品1g30 水浴回流浸提1h 趁热抽滤 清洗2次 取滤渣50 水浴回流浸提1h 趁热抽滤 冷却,定容至500ml,备用。2.3 吸收波长的选择 精密吸取茶多糖提取液、茶多糖样品液和标准溶液各1ml,分别置20ml具塞试管中,依次加入6%苯酚溶液1.0ml、浓硫酸5.0ml,静置10min后摇匀,室温放置20min后在波长400600nm之间进行扫描,测最大吸收峰,结果见图1。茶多糖提取液在490nm、茶多糖样品在488nm、标准液在490nm处有最大吸收峰,它们结果基本一致,故选择490nm为吸收波长。图1 茶多糖的吸收光谱2.4标准曲线的制备 精密吸取标准溶液0、0.2、0.4、0.6、018、1.0、1.2、1.4、1.8ml置20ml具塞试管中,各加蒸馏水至210ml,依次加入6%苯酚溶液1.0ml、浓硫酸5.0ml,静置10min后摇匀,室温放置20min后在490nm波长下测光密度(A值),制作标准曲线,求得回归曲线方程:Y=4.763X-0.158(r=01977,n=8)。2.5 重现性实验 取茶叶样品110g各6份,按212醇析水提后定容至500ml,各取茶多糖提取液1ml同标准曲线制备操作步骤,在490nm波长下测A值,分别为0.207、0.208、0.204、01205、0.203、0.207,求得变异系数CV=0.956%(n=6)。2.6 回收率试验 精密称取样品1、2、3各1g,均为2份;另称取相应样品各1g,再均加入标准品40g,每组各2份。各样品、样品+标准品均按2.2方法提取处理后定容至500ml,各取1ml同标准曲线制备操作步骤,在490nm波长下测A值,并计算茶多糖浓度C值,求回收率和CV值,结果见表1。表1 回收率试验结果(%,n=6)试验号 样品C值(g)标准品加入量(g)样品+标准品C值(g)标准品回收量(g)回收率(%)平均回收率CV(%)129.740.069.940.2100.5129.540.069.740.2100.5220.040.060.440.4101.0219.440.060.441.0102.5323.840.062.638.897.0324.240.063.439.298.099.92.0372.7 样品测定 分别取不同茶叶样品1.0g各2份(平行样品),按2.2醇析水提后均定容至500ml,各取茶多糖提取液1ml,同标准曲线制备操作步骤,在490nm波长下测A值,根据标准曲线回归方程换算成样品浓度(C样),按下列公式计算样品中茶多糖含量。茶多糖含量%=C样(g)标准浓度(C标,g)样品稀释倍数 换算因子5取样品量(g)106100%=C样405000.91106100%=1.8C样%各样品测定结果见表2。表2 不同茶叶样品中茶多糖含量(%)样品粗老茶1粗老茶2陈等外龙井炒青普通绿茶茶多糖含量4.2594.1563.5282.8151.2923 小结本方法简单、稳定、快速、灵敏、重复性好,线性范围为872g/ml,适于一般实验室进行茶多糖含量的测定。用该法对几种不同茶叶样品进行茶多糖测定结果可知,茶多糖含量在1.2924.259之间,茶叶越粗老茶多糖含量越高,这与有关文献报道结果3、6基本一致。参考文献1陈建国.茶多糖的提取及其药理作用研究概况J.中草药,2000,31(7):附6-7.2清水岑夫.茶 血糖降下作用 J.茶(日),1987,3:24-27.3汪东风,谢晓凤,王泽农,等.粗老茶中的多糖含量及其保健作用J.茶叶科学,1994,14(1):73-74.4徐吉民主编.正交法在医药科研中的应用M.北京:中国医药科技出版社,1987,216,130-140.5张惟杰主编.复合多糖生化研究技术M.上海:上海科技出版社,1987:6-7.6傅博强,谢明勇,聂少平,等.茶叶中多糖含量的测定J.食品科学,2001,22(11):69-73.(收稿日期:2004203204)334中国卫生检验杂志2004年8月第14卷第4期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology 20041August1141No14