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第11卷第21期2020年11月食品安全质量检测学报 J o u r na l o f Fo o d Sa f et y a nd Qu a l i t yVo l.11 No.21No v.,2020DNA检测技术在鱈鱼及其制品鉴定中的应用郭 淼，索一平，毕思丹，郭晶晶，杨文炼，张熙雅，巴冬梅，王媾媛，蔡雪凤*基金项目：中国普通人群食物过敏流行病学调查及临床诊断标准研究项目(2019YFC1605001)Fund:Su ppo r t ed by t h e Epi d emi o l o g i c a l Su r vey o f Fo o d Al l er g y i n t h e Gener a l Po pu l a t i o n o f Ch i na a nd St u d y o f Cl i ni c a l Di a g no st i c Cr i t er i a Pr o g r a m(2019YFC1605001)*通讯作者：蔡雪凤，硕士，匚程师，主要研究方向为食甜微生物学检测、分子生物学检测 E-ma i l:c a i x u ef eng ma i l.bc i ji ng.g o v.c n Corresponding author:CAI Xu e-Feng,Ma st er,Eng i neer,Bei ji ng Mu ni c i pa l Cent er f o r Fo o d Sa f et y Mo ni t o r i ng a nd Ri sk Assessment(Bei ji ng I nst i t u t e f o r Fo o d Co nt r o l),No.17,Feng d e Ea st Ro a d,Yo ng f eng I nd u st r i a l Ba se,Ha i d i a n Di st r i c t,Bei ji ng 100094,Ch i na.E-ma i l:c a i x u ef eng ma i l.bei ji ng.g o v.c n(北京市食品安全监控和风险评估中心(北京市食品检验所)，北京100094)摘 要：鳗鱼是经济价值高和营养价值高的重要食用鱼类，但由于市场上鱼类俗名混乱问题，以及不同鱼种 之间价值的巨大差异，错误标识鱈鱼产品或以次充好的现象时有发生，有可能因为含有过敏原成分或有毒成 分造成食品安全风险。因此，需要快速可靠的鳗鱼成分鉴定方法和来保障市场监管。冃前，鳗鱼及其制品的鉴 定方法主要为DNA检测技术：本文主要介绍了 DNA指纹图谱限制性片段长度多态性聚合酶链反应(c l ea ved a mpl i f i c a t i o n po l ymo r ph i sm seq u enc e-t a g g ed si t es,PCR-RFLP)技术、DNA 条形码技术、环介导等温扩增技术和 实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点、在鱈鱼及其制品鉴定中的应用，最后讨论了鳗鱼及其制品鉴定方法 的发展趋势和监管建议。关键词：鳗鱼；成分鉴定；限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术；DNA条形码技术；环介导等温扩增技 术；实时荧光定量PCR技术Application of DNA-based methods for the identification of cod fish and its productsGUO Mi a o,SUO Yi-Pi ng,BI Si-Da n,GUO J i ng-J i ng,YANG Wen-Li a n,ZHANG Xi-Ya,BA Do ng-Mei,WANG J i ng-Yu a n,CAI Xu e-Feng*(Beijing M unicipal C enter for F ood Safety M onitoring and Risk Assessment(Beijing M unicipal C enter for F ood Safety M onitoring and Risk Assessment(Beijing Institute for F ood C ontrol),Beijing(Beijing Institute for F ood C ontrol),Beijing 100094,C hina)C hina)ABSTRACT:Co d f i sh i s a n i mpo r t a nt ed i bl e f i sh wi t h h i g h ec o no mi c va l u e a nd h i g h nu t r i t i o na l va l u e.Ho wever,d u e t o t h e c o nf u si o n o f c o mmo n na mes o f f i sh i n t h e ma r k et a nd t h e h u g e d i f f er enc e i n va l u e bet ween d i f f er ent f i sh spec i es,t h er e a r e so me r epo r t s o f c o d f i sh pr o d u c t s mi sl a bel i ng o r sel l i ng sec o nd s a t best q u a l i t y pr i c e,a nd f o o d sa f et y r i sk ma y be c a u sed by a l l er g en o r t o x i c i ng r ed i ent s.Th er ef o r e,f a st a nd r el i a bl e i d ent i f i c a t i o n met h o d s a r e need ed t o ensu r e ma r k et su per vi si o n.At pr esent,DNA-ba sed met h o d s a r e ma i nl y i d ent i f i c a t i o n met h o d s o f c o d f i sh a nd pr o d u c t s.Th i s pa per i nt r o d u c ed t h e pr i nc i pl es,a d va nt a g es a nd d i sa d va nt a g es o f c l ea ved a mpl i f i c a t i o n po l ymo r ph i sm seq u enc e-t a g g ed si t es(PCR-RFLP),DNA ba r c o d i ng,l o o p-med i a t ed i so t h er ma l a mpl i f i c a t i o n a nd q u a nt i t a t i ve r ea l-t i me PCR i n c o d f i sh a nd pr o d u c t s spec i es i d ent i f i c a t i o n.Fi na l l y,t h e per spec t i ves a nd su per vi so r y su g g est i o n o f t h i s f i el d wer e d i sc u ssed.KEY WORDS:c o d f i sh;i d ent i f i c a t i o n o f c o nst i t u ent s;c l ea ved a mpl i f i c a t i o n po l ymo r ph i sm seq u enc e-t a g g ed si t es;第21期郭 淼，等:DNA检测技术在鱈鱼及其制品鉴定中的应用7701DNA ba r c o d i ng;l o o p-med i a t ed i so t h er ma l a mpl i f i c a t i o n;q u a nt i t a t i ve r ea l-t i me PCR1引言鳗鱼，通常指属于鳗形目(Gadiformes)(Gadiformes)的鱼类，广泛 分布于世界各大洋。鱈鱼品种非常丰富，鱈形目下包括3 亚目12个科85属480余种，其中鲍科(Ga d i d a e)和无须 鳗科(M erlucciidate)(M erlucciidate)具有许多经济价值极高的世界级重要 经济鱼类2叽鳗科中鳗鱼属(Ga d”s)鱼类俗称真鱈鱼，分别 为太平洋鱈鱼(Gadus macrocephalus,)(Gadus macrocephalus,),大西洋鳗鱼(Ga d u s morhua)morhua)、格陵兰鳗鱼(Gadus ogac)(Gadus ogac)、阿拉斯加绿青鲍(Ga d u s chalcogrammus)4Schalcogrammus)4S。鳗科中还包括黑线鳗属(M elanogrammus)(M elanogrammus)、黑线鱈鱼(M elanogrammus aeglejinus)(M elanogrammus aeglejinus)、蓝鱈属(M icromesistius)(M icromesistius),蓝M icromesistius poutassou),M icromesistius poutassou),青鳗属(Pollachius)(Pollachius),青(Pollachius pollachius)(Pollachius pollachius)等重要鱼 种。无须鱈科包括欧洲无须(M erluccius merluccius)(M erluccius merluccius)北 太平洋无须(M erlucciusproductus)(M erlucciusproductus)等重要鱼种鳗鱼肉质 鲜美，营养丰富，是低脂肪、低热量食品，适合幼儿食用 161 o鳗鱼制品有冷冻鱼片、鱼排、鱼肠等，鱈鱼肝还可作 为提取鱼肝油的原料创。由于鱈鱼常经过切片加工后，制品单从感官特点很难 分辨其捕捞海域、来源和种类，同时因俗名混乱问题，一些 价格相对低廉地其他鱼类被冠以“龙鳗鱼”“马加鱈”等名义 岀售，造成以次充好或标识错误问题时有发生闵 从2009 年开始，全国多个城市都出现过将“油鱼”棘鳞蛇(Ruvettus(Ruvettus pretiosus)pretiosus)和异鳞蛇鳍(Lepidocybium flavobrunneum)Lepidocybium flavobrunneum)冠以鱈 鱼”的名字贩卖，误导消费者购买食用并导致出现排油腹泻 的报道，有些国家和地区已对该2种鱼类的出售、定名和食 用制定规定或提出建议“山。而目前除香港地区外，国内尚 未出台针对鱈鱼命名市场规范准则，严重影响了鱈鱼市场 价格体系和消费者的权益及信任，并有可能因为含有过敏 原成分或有毒成分造成食品安全风险：随着分子生物学检测技术的发展，DNA检测技术已 成为食品分析中物种鉴定的重要检测方法对于鳗鱼 及其制品的鉴定，传统形态学鉴定方法存在形态相近鉴定 困难、无法对失去形态结构的加工产品进行鉴定的缺点【切,而DNA检测技术基于DNA的稳定性和具有的遗传信息,以PCR反应为基础，具有特异性强、灵敏度高的优点巾 本文针对不同DNA检测技术在鳗鱼及其制品鉴定中的应 用、检测特点进行分析，并对发展趋势进行展望，以期为 鳗鱼及其制品鉴定提供技术支撑2 DNA检测技术在鱈鱼及其制品鉴定中的应用2.1 DNA指纹图谱技术DNA指纹图谱技术中的PCR-RFLP技术，即聚合酶 链式反应限制性片段长度多态分析技术，已成为鱼类物种 鉴定应用中一个重要的方法其主要步骤是设计特异性 PCR引物，扩增某一特定DNA序列；然后利用具有能识别 特异性限制性位点的内切核酸酶，切割DNA扩增片段，从 而产生不同大小的DNA片段；再通过琼脂糖凝胶电泳分 离不同的片段，观察比较限制性图谱来分析序列之间的差 异，达到区分不同物种的目的“J。)。Ar a ni sh i等使用PCR-RFLP技术，设计了鳗鱼物种 通用引物TR-14F和TR-571R,用于PCR扩增编码线粒体 细胞色素b基因(c yt b基因)的558-bp片段；用Eco321Eco321和 c o 1051限制性酶对PCR产物进行双重消化，最终得到了 特异性的限制性图谱，成功鉴定太平洋鳗鱼(GadusGadus macrocephalus)macrocephalus)、大西洋鱈鱼(Gadus morhua(Gadus morhua和狭鳗(Theragra chalcogramma)3(Theragra chalcogramma)3种具有较高经济价值的鱈鱼Fi ni z i o 等使用 PCR-RELF 技术，通过 16Sa r 和 16Sbr 引物PCR扩增线粒体16S r RNA基因的约630bp片段；用 M vaM va或B.s/；12851限制酶消化PCR产物，然后通过琼脂糖凝 胶电泳产生的限制性图谱，成功鉴定了大西洋鳗鱼(Ga d u s morhua)morhua)、狭鱈(Theragra chalcogramma)(Theragra chalcogramma)、蓝鳗(Mi c r o mesi snNs poutassou)poutassou)、M o Iva elongataM o Iva elongata、Phycis blennoidesPhycis blennoides、TrisopterusTrisopterus minutus capelanusminutus capelanus、Trisopterus minutus minutestTrisopterus minutus minutest 币H鱈鱼 二PCR-RFLP技术无需昂贵的测序仪器，具有操作简 单、成本低、通量大的优点，在常规实验室即可检测。该 方法的缺点是酶切不完全会对鉴定结果造成很大的影响;另外，为选择合适的限制性酶，需要大量不同个体的物种 进行验证0-却。2.2 DNA条形码技术DNA条形码技术(DNA ba r c o d i ng)是由加拿大圭尔夫 大学研究员Pa u l Heber t在2003年首次提出，是一种可对 鱼类等动物物种进行准确、快速的鉴定方法。DNA条形码 技术使用通用引物对冃标基因进行PCR扩增.测序获得样 品的线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(mi t o c h o nd r i a l c yt o c h r o me CC o x i d a se su bu ni t I,COI)基因序列,并与 DNA 条形码数据库(Bo l d.Fi sh bo l等)中序列进行对比，根据遗 传距离或相似度确定样品的种属2勺Wo ng等a i应用DNA条形码技术，对北美洲东北部 市场和餐厅中抽取的96种鱼和海鲜制品进行鉴定，检测 岀大西洋鱈鱼(Gadus morhua)(Gadus morhua)、狭(Theragra(Theragra chalcogranima)chalcogranima)、M erluccius paradoxusiM erluccius paradoxusi 种类型的鳗負成分 Fer r i t o等卩为了减少鱼类鉴定的分析时间，使用DNA条 形码与PCR-RFLP方法组合进行分析，即使用通用引物对 样品的COI基因进行PCR扩增，再使用HinflHinfl酶切扩增产 物进行电泳产生特异性图谱的方法，鉴定意大利市场上方 7702食品安全质量检测学报第11卷便食品中狭鳗(Theragra chalcogrammaTheragra chalcogramma、欧洲无须鱈(M erluccius merluccius)(M erluccius merluccius)、北太平洋无须鳗(M erluccius(M erluccius productus)productus)、M erluccius paradoxusM erluccius paradoxus 4 种类型的鳗鱼成分.；李新光等27、王敏等I应用DNA条形码技术，分别 对市场上随机抽取的冻鱈鱼片、烤鱈鱼片、鱼柳样品进行 鉴定，鉴定出大西洋鳗鱼(Ga d u s morhua)morhua),格陵兰鱈鱼(Gadus ogac)(Gadus ogac),狭鱷(Theragra chalcogramma)(Theragra chalcogramma)、绿青鳗(Pollachius virens)(Pollachius virens)等。在上述国内鳗鱼制品的检测鉴定中,存在未检测出鱈鱼成分、与其食品标签不符的问题：目前，DNA条形码技术已被美国FDA用作鱼类鉴定 的官方方法，并在网站上提供了该方法的标准操作程序(st a nd a r d o per a t i o n pr o c ed u r e,SOP)和其他技术资料匸刃DNA条形码技术具有检测范围广、操作简单、鉴定 效率高等优点呵，特别适用于种类远多于其他生物的鱼类 鉴定a.该方法的缺点是对于混合加工制品较难获得单一 的DNA条形码片段，增加结果分析的难度，同时DNA条 形码数据库仍需进一步扩充和完善対，以满足更多鱼类物 种成分的鉴定需求。2.3环介导等温扩增技术环介导等温扩增技术(l o o p-med i a t ed i so t h er ma l a mpl i f i c a t i o n,LAMP)是No t o mi等发明的一种核酸检测技 术，其原理是DNA在65 C左右的条件下，通过内引物(f o r wa r d i nner pr i mer,FI P)和外引物(ba c k wa r d i nner pr i mer,BI P)的作用，针对靶基因的6个不同区域进行特异性识别,使整条DNA链呈茎-环的哑铃状结构；以哑铃状结构为模 板，恒温条件下进行循环扩增反应，最后形成茎-环状 DNA和花椰菜状DNA所组成的混合物一扩增反应结束后,可使用琼脂糖凝胶电泳检测、浊度检测、荧光比色检测或 荧光实时定量检测来测定结果132-351=目前，已广泛应用于 动物源性成分的检测36J 71OSa u l i等。基于大西洋鳗鱼(Ga d i(s morhua)morhua)的c yt b基 因设计出4对LAMP引物，以大西洋鳗鱼(Gadus morhua).(Gadus morhua).太平洋(Gadus macrocephalus)(Gadus macrocephalus)和阿拉斯加绿青鳗(Ga d s chalcogrammus)chalcogrammus)的粗提取DNA为模板，在63 C下恒温扩 增60 mi n,加热至80 C持续1 mi n以终止反应。通过琼脂 糖凝胶电泳检测，大西洋鱈鱼(Gadus morhua)(Gadus morhua)扩增产物形 成具有特异性条带的电泳图，而另外2种基因相似的鳗鱼 未产生相应条带，仅利用LAMP方法检测出大西洋鳗鱼(Gadus morhua)c(Gadus morhua)cLAMP技术具有特异性强、灵敏度高、反应时间短、恒温设备简单、核酸提取简便等优点切。该方法的缺点是 引物设计难度较大，最终产物较难测序分析140411,使其应 用于鳗鱼及其制品的鉴定存在一定难度。2.4 实时荧光定量PCR技术实时荧光定量 PCR 技术(q u a nt i t a t i ve r ea l-t i me PCR,q PCR)已成为鉴定鱼类物种的一种有效检测方法，其原理 是利用PCR技术，扩增某物种DNA高度保守区的基因,根据扩增产物的片段长度或实时荧光定量PCR的Ct值,确定该物种成分。Sa nc h ez等“习基于Ta q Ma n技术和线粒体基因，设计 T欧洲无须鳗(M erluccius merluccius)(M erluccius merluccius)的特异性引物 MMERCR4F、MMERCR5R 和探针 MMERCR 6TP,通过对 鳗形目(Gadiformes)(Gadiformes)、鱼卢形目(Perciformes)(Perciformes)等具有代表性的 20个样本和从当地不同市场购买的31个商业鳗鱼样品进 行验证，证明可有效检测鉴定出欧洲无须鱈(M erluccius(M erluccius merluccius)-merluccius)-李富威等切基于鱈科和无须鱈科中12种鱈鱼的16S r RNA基因保守序列设计了一对通用的PCR引物及探针，对 12种鱈鱼样品、71种非鳗鱼动植物样品和94个市售鳗鱼产 品进行了实时荧光PCR检测，结果显示可以有效检测出太 平洋鱈鱼(Gadus macrocephalus)(Gadus macrocephalus)、大西洋鳗鱼(Gadus(Gadus morhua)morhua)、狭鳗鱼(Theragra chalcogramma)Theragra chalcogramma)、黑线鳗鱼(M elanogrammus aeglefinus)(M elanogrammus aeglefinus)、青绿鳗鱼(Pollachius virens)(Pollachius virens)、蓝鱈鱼(M icromesistius poutassou)(M icromesistius poutassou)、青鳗鱼(Pollachius(Pollachius pollachius)pollachius)、南鳗鱼(M utaenolepis(M utaenolepis mi c r o ps)、澳洲无须鳗鱼(M erluccius australis)(M erluccius australis)、南非无须15鱼(M erluccius capensis)(M erluccius capensis)、阿根廷无须鳗鱼M erluccius hubbsi)M erluccius hubbsi).北太平洋无须鱈鱼(M erlucciusproductus)l2(M erlucciusproductus)l2 种鳗鱼成分。我国鱈鱼成分鉴定的标准或检测方法有2个，均是基 于实时荧光定量PCR技术。一是出入境检验检疫行业标准 SN/T 3589.7-2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方 法第7部分：鳗鱼成分检测实时荧光PCR法(2014-06-01 实施)，即使用李富威等切设计的引物和探针，形成了鳗鱼 成分的实时荧光PCR法鉴定。二是国家市场监督管理总局 于2019年发布的鳗鱼及其制品中裸盖鱼、油鱼和南极犬 牙鱼源性成分检测BJ S 201907食品补充检验方法(2019年 第9号)切，分别设计了鳗鱼及其制品中易混淆物种裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)(Anoplopoma fimbria)、油鱼(异鳞蛇鳍 LepidocybiumLepidocybium flavobrunneumflavobrunneum s 棘鳞蛇鳍 Ruvettus pretiosus)Ruvettus pretiosus)和南极犬牙鱼(小鳞犬牙南极鱼Qissostichus eleginoidesissostichus eleginoides,鳞头犬牙南极鱼 D issostichus mawsoni)D issostichus mawsoni)成分的实时荧光PCR检测方法的特异 性引物和探针，可用于鳗鱼、鳗鱼片、鱈鱼扒等生鲜或速冻 鱈鱼产品的检测。林霖等切利用SN/T 3589.7-2013对市场上常见类型 的鱈鱼产品进行检测，发现无法应用于抽取的全部产品,对于标准方法未检出鱈鱼成分的产品使用DNA条形码技 术鉴定为鱈形目长尾鳗科(M acrouhdae)(M acrouhdae)细鳞壮鳗(Albatrossia pectoralis),(Albatrossia pectoralis),该研究基于长尾鳗科 12Sr RNA 序 列设计出特异性引物和探针，建立了长尾鳗科的实时荧光 PCR检测方法，为鳗鱼DNA成分标准检测方法提供补充;荧光定量PCR技术具有特异性强、灵敏度高、操作 第21期郭淼，等：DNA检测技术在鱈鱼及其制品鉴定中的应用7703简便、耗时少、成本低等优点呦，既能用于定性检测，还 可以根据反应中的循环数Ct值与初始DNA模板浓度进行 相对定量切。但由于需建立标准曲线容易出现假阳性等因 素，其定量体系仍需进一步完善(例。3网络DNA信息资源在鳗鱼及其制品中的应用3.1鱈鱼DNA数据资源鳗鱼及其制品的DNA检测鉴定依赖于DNA数据库的 发展。目前，生物DNA数据检索主要采用美国国立生物技术 信息中心(Na t i o na l Cent er o f Bi o t ec h no l o g y I nf o r ma t i o n,NCBI)维护的一级核酸序列数据库(Genba nk)除NCBI Genba nk数 据库外，生命条形码数据库(c o nso r t i u m f o r t h e ba r c o d i ng o f l i f e,CBOL)(h t t p:/www.ba r c o d i ng.si.ed),鱼类百科全书(r eg u l a t o r y f i sh enc yc l o ped i a,RFE),鱼类溯源数据库(f i sh t r a c e d a t a ba se),AZTI-TECNALI A 数据库(h t t p:/www.a z t i.es/d na)也 提供丰富的鱼类物种DNA数据资源切。3.2鳗鱼鉴定中特征基因的选择通过检索文献和标准方法，鱈鱼及其制品DNA检测技 术选择的特征基因主要集中在线粒体CO/基因、c”6基因、12S r RNA基因和16S r RNA基因，详见表1。线粒体 DNA(mi t o c h o nd r i a l DNA,mt DNA)作为生物体内的核外遗 传物质，具有进化速度快、结构简单、序列数据库信息丰富 和严格母系遗传等特点，是研究物种遗传、系统进化和分子 鉴定的理想工具a。已在鱼类物种鉴定研究中得到广泛应 用153551=线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(CO/基因)，其基因 5,端648 bp的片段是DNA条形码技术的目标基因，该基因 具有2个重要的优势：()C OI()C OI基因的通用引物非常稳定；相比其他线粒体基因，具有更多的系统进化信息，且进化速 度快，不仅能够区分出近源物种.也能够分析出同一物种中 的亲缘关系5581o线粒体细胞色素b基因(c y基因)，具有 在种内个体间的序列差异很小，而种间的序列差异较大的 特点，是研究动物的群体遗传结构和分子鉴定的理想标记 序列切。线粒体12S r RNA.16S r RNA是线粒体上的核糖 体RNA,也被广泛应用于分类鉴定研究60611,于NCBI Genba nk数据库中查询基于水产科学及渔业 信息系统(Aq u a t i c Sc i enc es a nd Fi sh er i es I nf o r ma t i o n Syst em,ASFI S)分类的鳗形 目(Gadiformes)(Gadiformes)中鱈科(Gadidae)(Gadidae)、无须鳗科(M erlucciidae)(M erlucciidae)、长尾鳗科(M acrouridae)(M acrouridae)M uraenolepididaeM uraenolepididae 科、M oridaeM oridae 科，以及市 场上常被冠以鱈鱼名称的黑鱼由科(Anoplopomatidae)(Anoplopomatidae)、南 极鱼科(Nototheniidae)(Nototheniidae)、真鱼卢科(Percichthyidae)Percichthyidae)、蛇鳍科(Gempylidae)(Gempylidae)共197个物种DNA信息，线粒体C OIC OI基因、cyt bcyt b基因、12S r RNA基因和16S r RNA基因资源丰富(见 图1),可用于鳗鱼及其制品鉴定中DNA数据比较分析，特 异性引物探针设计等方面。4结语与展望国内外利用DNA检测技术鉴定鱈鱼及其制品已经有 了大量的研究，这为判定市场标识错误或有意冒充提供了 技术支持，其中DNA条形码技术和实时荧光PCR技术已 经作为鱈鱼成分鉴定的标准方法DNA条形码技术具有操 作简便、可靠快捷、应用广泛等优势；实时荧光PCR技术 可以针对鳗鱼特异性物种成分进行鉴定，但要设计出应用 范围广、特异性强的引物探针存在较大闲难。此外，鳗鱼 及其制品的鉴定也面临着对于方法高通量、低成本、自动 化的要求，以及对于深加工产品、混合产品的鉴定、组分 定量分析等多方面的挑战。快速、简便、高通量的实时荧 光定量PCR芯片技术、微滴数字PCR技术、DNA宏条形 码技术已应用于食品检测中多种动物源性成分的鉴定研 究g血1,随着研究的深入和扩展这些技术都有可能用于检 测鳗鱼及其制品，以期建立准确的鉴定方法。表1鱈鱼及其制品DNA检测技术特征基因选择Table 1 Feature gene selection of DNAbased methods for the identification of cod fish and products species特征基因应用的检测技术检测对象参考文献线粒体细胞色素c氧化酶亚 基l(cor)基因DNA条形码PCR-RFLP大西洋I f鱼(Gadus morhua),(Gadus morhua),格陵兰鳗鱼(Gadus ogac),(Gadus ogac),狭鲍(Theragra chalcogramma),(Theragra chalcogramma),绿青(Pollachius virens),(Pollachius virens),欧洲无须鳗(M erluccius merluccius)(M erluccius merluccius)等25,27,2&62线粒体细胞色素b基因(c y 基因)PCR-RFLP太平洋鱈鱼(Gadus macrocephalus),(Gadus macrocephalus),大西洋鳗鱼(Gadus morhua).(Gadus morhua).LAMP狭Theragra chalcogramma),Theragra chalcogramma),棘鳞蛇鳍(Ruvettuspretiosus)(Ruvettuspretiosus)和异鳞21,38,45q PCR蛇 M(Lepidocybium flavobrunneum)(Lepidocybium flavobrunneum)等线粒体12S r RNA基因q PCR细鳞壮Ibatrossia pectoralis)Ibatrossia pectoralis)46线粒体16S r RNA基因PCR-RFLP q PCR大西洋鳗鱼(Gadus morhua),(Gadus morhua),狭Theragra chalcogramma),Theragra chalcogramma),蓝鳞(M icromesistius poutassou)(M icromesistius poutassou)等22,44NADH/基因q PCR裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)(Anoplopoma fimbria)45CK基因q PCR小鳞犬牙南极鱼(D issostichus elegin(D issostichus elegino Mes)和鳞头犬牙南极鱼(D issostichus mawsoni)(D issostichus mawsoni)457704食品安全质量检测学报第11卷图1鳗鱼及相关鱼类线粒体C OIC OI、cyt bcyt b、12Sr RNA和16S r RNA 基因资源统计Fi g.1 St a t i st i c a l a na l ysi s o f mi t o c h o nd r i a l C OI,cyt b,C OI,cyt b,12S r RNA a nd 16S r RNA g ene r eso u r c es i n c o d f i sh a nd r el a t ed f i sh es鳗鱼的真伪鉴定是食品安全问题，关乎消费者的利 益和健康。建议采用以下2个方式，对鳗鱼及其制品加强 管理：(1)国内尽快出台统一的鱈鱼食品标示规范，同时标 注正确的学名和恰当的俗名，以供消费者分辨食品信息,可参考香港食品安全中心在2007年公布的有关识别及标 签油鱼鱈鱼的指引，将以“鱈鱼”或相近名称出售的棘鳞 蛇鳍和异鳞蛇鳍的俗名定为“蜡油鱼”，不可使用“鱈鱼”等 其他俗名；将鱈形目鱼类和俗称为“银鳗鱼”的裸盖鱼、“白 鳗鱼”的小鳞犬牙南极鱼和鳞头犬牙南极鱼3种鱼类继续 使用包含“鳗”字的俗名。(2)结合DNA检测技术和传统 形态学鉴定手段，完善国家标准体系检测方法，对市场上 的鳗鱼制品进行监管，避免出现以低价鱼类冒充鳗鱼的情 况，以降低食品安全风险，提升消费者信任度。参考文献1 李明徳.鱼类分类学.第2版M.北京：海洋出版社,2011.Li MD.Fi sh t a x o no my.Sec o nd ed i t i o n M.Bei ji ng:Oc ea n Pr ess,2011.2 尹伟力，方绍庆，耿金培，等.鳗鱼物种特异性鉴定的PCR方法研究J.动物医学进展,2011,32(2):19-24.Yi n WL,Fa ng SQ,Geng J P,et al.St u d y o n PCR met h o d f o r spec i es spec i f i c i d ent i f i c a t i o n o f COD J.Pr o g Ani m Med,2011,32(2):19-24.3 Ca l o MP,So t el o CG,Per ez MRI.et al.I d ent i f i c a t i o n o f g a d o i d f i sh spec i es u si ng DNA-ba sed t ec h ni q u es J.Eu r Fo o d Res Tec h no l,2003,217(3):259-264.4 Wa l l eye P.FDA ma r k et na me:Po l l o c k o r Al a sk a po l l o c k EB/OL.2015-09-02,www.f Ua.g o v/f bo d/f bo d sc i enc er esea r c h/r f e/u c m091255.h t m.5 佚名.美国阿拉斯加绿青鱈标示面临新要求J.食品安全导刊，2016,3:109.Ano nymo u s.New r eq u i r ement s f o r ma r k i ng o f US ALa sk a n g r een po l l o c kJ,Ch i n Fo o d Sa f Ma g a z,2016,3-1:109.6 叶繁，陈康，陶美洁，等.5种市售鱈鱼肠品质比较及风味分析J.南 方水产科学,2019,15(6):96-104.Ye F,Ch en K,Ta o MJ,et al.Co mpa r i so n o f q u a l i t y a nd vo l a t i l e c o mpo nent s a mo ng f i ve br a nd s o f c o d sa u sa g es